【幽门螺杆菌免疫学抗体检测法研究4300字（论文）】

V幽门螺杆菌免疫学抗体检测法研究目录TOC\o"1-3"\h\u40391引言 1108062免疫学抗体检测方法 2138652.1免疫印迹技术 2248942.2胶乳免疫比浊法 243862.3胶体金法 3215642.4酶免疫法 382063总结 45345参考文献 61引言幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，HP）是人类胃的主要病原体之一，与胃溃疡、慢性胃炎、胃癌和十二指肠溃疡密切相关[1]，全球有超过50%的人感染了H.pylori，在一些社会经济不发达的地区，感染率已超过总人数的一半ADDINNE.Ref.{3EDD8628-D001-4822-8878-5DEAFB0433DA}[2]。胃内局部pH值可达到0.9-1.8，但H.pylori依然可存活、定殖和繁殖。主要原因如下：幽门螺杆菌产生尿素酶（Urease），分解尿素产生氨气能够中和胃的酸性环境ADDINNE.Ref.{705235D9-2BB9-4FD7-A8A0-FD28A72AC6C5}[3]；H.pylori借助鞭毛在胃中自由游走逃避宿主的免疫攻击，或者阻碍了先天性免疫功能和适应性免疫ADDINNE.Ref.{C9F21090-5AFD-48D2-9D24-A2DF13AADCCC}[4-6]应答NE.Cms_Insert；另外，细胞毒素相关蛋白A、空泡毒素A和γ-谷氨酰转肽酶还可以诱导树突状细胞发生免疫耐受，抑制T细胞的增殖和信号转导导致细胞凋亡，使H.pylori免受T细胞的攻击ADDINNE.Ref.{94BBC543-F01A-4386-B34C-DCA9B3662B3A}[7]。幽门螺杆菌感染导致人体胃消化不良，患萎缩性胃炎、肠化生、消化性溃疡，甚至胃癌等疾病ADDINNE.Ref.{A26EBA53-0044-44CB-8D7F-32EC9FC5AF14}[8，9]。除了胃内消化性疾病之外，H.pylori还会导致一些胃外疾病，比如神经疾病阿尔茨海默症ADDINNE.Ref.{8C45201D-84AD-4F8E-A865-C70256D941BF}[10]、血液疾病免疫性血小板减少症ADDINNE.Ref.{AAD2EFEA-EB28-42B3-AC0E-9204260E07E5}[11]、肝胆疾病酒精性脂肪肝ADDINNE.Ref.{B21A0DD8-8B08-494B-99F0-1BCDB4B19394}[12]等。因此，根除H.pylori对于治疗胃部疾病和其他与H.pylori相关疾病十分重要。目前临床治疗中H.pylori抗生素耐药性不断提高，甲硝唑、克拉霉素的耐药性在亚洲高达99.5%、85.5%ADDINNE.Ref.{1AEB3BB1-F7F4-4396-82E2-1DFF71C917AA}[13，14]。HP根除需要综合考量个体化、患者的依从性以及对抗生素的敏感性，其中，抗生素耐药的普遍存在使得HP的全球根除率不断下降。大多数患者对基于铋剂的四联一线疗法或伴随治疗反应较好，当一线治疗失败时，抢救方案应替换既往应用的抗生素制剂，避免耐药重复发生。目前公认的根除HP治疗的方案包括CTT、BQT、伴随疗法以及其他如序贯疗法、混合疗法和基于左氧氟沙星的抢救疗法。幽门螺杆菌（HP）在胃内定植，通过自身的鞭毛到达胃黏膜表面的保护性黏液层，并通过化学趋化法首先定居在没有产酸细胞的胃窦以避开低pH区域，同时它还产生尿素酶、中和胃酸，以利于自身生存。HP是多种疾病的高危因素，全球患病率约为58%，中国的患病率约为20.6%至81.8%不等，HP流行率在发达国家逐年下降，而在发展中国家和新兴工业地区一直处于较高水平。这表明，HP感染在一定程度上延缓经济发展，加重国家医疗负担。随着人们对HP的不断研究，幽门螺杆菌的检测方法也在改进与创新，并且在临床上得到广泛应用。根据HP检测时是否需要从胃部取材，可以将检测分为2类：侵入性检测和非侵入性检测[15]。侵入性检测主要包括病理学检测法、病原学检测法；非侵入性检测主要有免疫学检测法、尿素呼气实验检测法。尿素呼气试验是目前最常用的HP感染诊断和用于根除效果评价方法[24]，敏感性、特异性、准确性高，且操作简便、快速、无创伤，无交叉感染的风险。最大缺点是检测费用贵，14C有放射性，会受抗生素影响出现假阴性，所以会受到检测近期药物影响。从检验工作者和患者的感受来讲，一般认为最好的方法是能简便、快速、无创、还有准确测试的方法。因此，免疫学抗体检测更易接受和采用且更有研究意义。2免疫学抗体检测方法2.1免疫印迹技术免疫印迹是免疫化学中的一项新技术。用SDS分离不同分子量的HP蛋白，并检测HP患者血清中的抗体。HP的临床分类通常分为两种类型：I型和II型。一些研究表明，HP分型在临床工作中更为重要。如果是第一种感染，建议给予积极的抗病毒治疗；如果是第二种感染，就无法治疗，然后进行随访观察，避免滥用抗生素。HP感染的临床诊断方法很多。Westernblotting是一种非侵入性诊断方法，但由于其灵敏度高、特异性强、检测方法简单、时间短，Westernblotting西医很容易检测消化不良患者的HP感染，对HP的临床治疗也有很好的指导意义[16]。westernblot检测可以减少受试者的创伤。与传统方法相比，检测成本更经济、更经济，降低了经济负担，提高了幽门螺杆菌的检测效率，从而有效避免了其他疾病的传播。通过对菌株特性的分析，结合其他技术，可以更好地控制其治疗效果和毒副作用[17]。2.2胶乳免疫比浊法乳胶增强免疫比浊法是在一定粒径的乳胶颗粒上标记一定量的抗体或抗原，制备乳胶溶液，与抗体或抗原的混合溶液反应，通过比浊法测定抗体或抗原的浓度，形成一定的浊度。这远远超过任何其他方法。通过对乳胶免疫比浊法检测HP抗体试剂性能的研究和评价，得出乳胶免疫比浊法检测HP抗体试剂可用于全自动生化分析仪的结论。结果表明，乳状液浊度法能满足临床检测的准确度、线性、准确度和抗干扰性要求。在另一项研究中，分别通过免疫比浊法、金标记法和14C呼气试验检测HP。这种方法灵敏度低，需要改进[20]。2.3胶体金法胶体金法是检测幽门螺杆菌抗体的一种新方法。它是一种新的免疫标记技术，利用胶体金作为显色剂或示踪剂来检测抗原和抗体。该方法简单、无痛，采样后5分钟内即可快速显示结果。与快速尿素酶试验相比，胶体金法检出率为65.71%，快速尿素酶试验检出率为67.14%，敏感性和特异性分别为91.24%和89.76%，显著高于胃镜快速尿素酶试验。因此，胶体金法检测HP具有较高的可靠性。总之，胶体金HP试验不仅阳性检出率高，而且检测时间短。它不需要专业人员，没有疼痛感，易于被患者接受，不属于患者禁忌症，符合要求，可靠性高，非常适合临床使用[22]。2.4酶免疫法ELISA免疫法治疗是免疫诊断的新一代技术,已广泛应用于多种感染病原体如微生物毒性感染症、寄生虫感染病、非病原感染症等的免疫诊断。此外，还广泛应用于各种高分子阴性抗原和其他小分子阳性抗原的药物定量灵敏测定，从目前的实验结果分析来看，ELISA等方法检测具有定量高灵敏度、特异性、简单、快速、稳定、自动化等六大特点。不仅非常适用于各种临床多个标本的同时检查，因为一天至少能同时检查几百到几千个临床标本，所以也非常适合用于血清学和流行传染病学的调查。这个检测方法不仅可以直接测定体内抗体，还可以直接测定进入体液过程中的体内循环抗原，是早期疾病诊断最好的治疗方法。酶联免疫吸附试验（ELISA）是用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗涤，用最广的技术。ELISA可以采集病人的血液、唾液、尿液及粪便等标本检测抗体。目前检测细胞因子的ELISA方法主要是双抗体夹心ELSIA，基本原理为捕获抗体固定在ELISA板上，细胞因子与捕获抗体结合，HRP标记的检测抗体与固定在ELISA板上的细胞因子结合，通过测量HRP催化底物产生的信号，来测量细胞因子的含量。TakashiSaito等人基于IL-6的大鼠单克隆抗体以及猪多克隆抗体建立了小鼠IL-6的ELISA检测方法，检测限为2ng/mL(Saitoetal1992)。由于体内细胞因子的含量较低，传统的ELISA方法灵敏度达不到临床要求(Helloetal1991)。商业化试剂盒中常常引入生物素-链霉亲和素信号放大系统来提高灵敏度。生物素-链霉亲和素放大系统主要通过生物素、亲和素和信号物质的不同的组合方式来提高检测信号。研究了血清HP抗体ELISA的优点和有效性。对200例疑似HP感染的患者进行血清HP抗体ELISA、14C-UBT及嗜银染色检测。结果表明：银染法kappa值为0.915，14C-UBT法kappa值为0.853，血清HP抗体ELISA法kappa值为0.882；三种检测方法的特异性无显著性差异（P>0.05），表明银染诊断HP阳性的一致性优于其他两种方法，但三种检测方法的一致性好，特异性好，表明血清HP抗体ELISA和14C-UBT能满足临床诊断HP阳性的需要。血清HP抗体ELISA和14C-UBT操作简单，检测成本低，无创性，但血清HP抗体ELISA在适用人群方面优于14C-UBT。本研究中，银染法与血清HP抗体ELISA法的敏感性无显著性差异（P>0.05）；血清HP抗体ELISA的特异性、敏感性和准确性略高于14C-UBT，但差异无统计学意义（P>0.05）。许多研究表明，14C-UBT法中的14C会对人体和环境造成一定的污染损害，不适用于孕妇和婴儿，这表明选择血清HP抗体ELISA检测方法的可行性更高[23]。因此，应用血清HP抗体ELISA诊断HP感染具有效果更好、灵敏度和特异性更高、操作简单、无创、患者易于接受等优点。3总结抗体检测采用免疫印迹法、胶体金法、酶联免疫吸附法和乳胶浊度法。检测尿素酶A和B亚单位的空泡抗体和细胞毒性抗体[24]。然而，它也与其他抗生素发生交叉反应，从而导致幽门螺杆菌感染假阳性。该方法特异性强、灵敏度高、无创、操作简单、成本低，适合大规模检测[25]。westernblotting结合分型可以提高诊断结果。乳胶免疫比浊法可用于体检。酶联免疫吸附试验（ELISA）可用于检测各种抗体样本。13C尿素呼气试验结果表明，胶体金联合免疫印迹法在评价HP感染方面明显优于胶体金免疫印迹法[26]。然而，在某些方面仍存在争议：研究发现，胃镜检查和呼吸测试不支持诊断消化系统疾病，例如HPI抗体阳性患者的炎症。慢性胃炎；消化性溃疡；胃癌的原因可能是患者自身抗体水平和免疫力下降，或患者在治疗前或治疗后感染了HP，体内抗体仍呈阳性[27]。由于抗体含量下降缓慢，抗体含量增加，因此，HP抗体检测不能作为当前感染或疗效观察的指标。临床治疗和预后必须结合胃镜检查或呼吸测试结果来判断[28]。参考文献[1]张永芬,昝学凯.消化系统常见疾病与幽门螺杆菌感染的关系探讨[J].基层医学论坛,2020,24(31):4468-4469.[2]HirukawaS,SagaraH,KanetoS,etal.CharacterizationofmorphologicalconversionofHelicobacterpyloriunderanaerobicconditions[J].MicrobiolImmunol.2018,62(4):221-228.[3]ChristopheB,AnthonyA.EpidemiologyofHelicobacterpyloriinfection[J].Helicobacter.2017,22.[4]FuHY,KawanoS.[AmmoniaandmonochloraminegeneratedbyureaseinHelicobacterpyloricausegastricmucosalinjury][J].NihonRinsho.2002,60Suppl2:119-123.[5]GuH.RoleofFlagellainthePathogenesisofHelicobacterpylori[J].CurrMicrobiol.2017,74(7):863-869.[6]Mejias-LuqueR,GerhardM.ImmuneEvasionStrategiesandPersistenceofHelicobacterpylori[J].CurrTopMicrobiolImmunol.2017,400:53-71.[7]KimJH,NamgungB,JeonYJ,etal.Helicobacterpyloriflagellin:TLR5evasionandfusion-basedconversionintoaTLR5agonist[J].BiochemBiophysResCommun.2018,505(3):872-878.[8]RicciV,GiannouliM,RomanoM,etal.Helicobacterpylorigamma-glutamyltranspeptidaseanditspathogenicrole[J].WorldJGastroenterol.2014,20(3):630-638.[9]YeoSH,YangCH.[PepticUlcerDiseaseAssociatedwithHelicobacterpyloriInfection][J].KoreanJGastroenterol.2016,67(6):289-299.[10]SunaN,EtikD,OcalS,etal.Theeffectofhelicobacterpylorieradicationonatrophicgastritisandintestinalmetaplasia:aretrospectivesinglecenterresearch[J].ActaGastroenterolBelg.2020,83(3):381-384.[11]ZendehdelA,RohamM.RoleofHelicobacterpyloriinfectioninthemanifestationofoldage-relateddiseases[J].MolGenetGenomicMed.2020,8(4):e1157.[12]MichelM,KhellafM,DesforgesL,etal.AutoimmunethrombocytopenicPurpuraandHelicobacterpyloriinfection[J].ArchInternMed.2002,162(9):1033-1036.[13]TangDM,KumarS.TheAssociationBetweenHelicobacterpyloriInfectionandNonalcoholicFattyLiverDisease[J].CurrGastroenterolRep.2017,19(2):5.[14]O'ConnorA,LiouJM,GisbertJP,etal.Review:TreatmentofHelicobacterpyloriInfection2019[J].Helicobacter.2019,24Suppl1:e12640.[15]张志明,温丽.免疫印迹法检测幽门螺杆菌及其分型的临床应用价值探讨[J].临床医药文献电子杂志,2018,5(41):133+136.[16]梁文燕.免疫印迹法检测门诊消化不良患者幽门螺杆菌