败酱草多糖提取工艺的研究

败酱草多糖提取工艺的研究

失败草是失败科多年生草本植物的花白遗址和黄花失败草或其附近植物的根和草本植物。具有清热解毒、去瘀、排脓、活血化瘀、安抚人心等功效。最新的研究发现,败酱草具有抗菌、抗炎、镇静、抗肿瘤等作用,并且在临床上有多种应用,如治疗慢性盆腔炎、结肠炎、前列腺炎等。多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖通过糖苷键连接在一起的聚合物(一般10个以上)。多糖包括活性多糖和膳食纤维两大类。活性多糖专指具有某种特殊生物活性的多糖化合物,如真菌多糖、植物多糖和壳聚糖等。这些多糖具有复杂的、多方面的生理活性和功能,如:免疫调节功能、抗肿瘤作用、延缓衰老作用、降血脂、抗血栓作用等功能。败酱草多糖是败酱草的主要有效成分之一,是败酱草防腹泻、抗便秘双向作用的有效成分之一,同时研究显示败酱草多糖AP4在体外可以抑制RSV的增殖,且其抗病毒指数明显高于利巴韦林,说明败酱草AP4的毒性较低,抗病毒作用强,使用安全性高。本试验通过对败酱草多糖的提取工艺研究,以初步确定败酱草多糖提取的最佳工艺条件,为以后败酱草相关的深入研究提供一定的依据。1材料和方法1.1仪器、检测设备败酱草,购于连云港康济大药房;硫酸(AR);苯酚(AR)。高速中药粉碎机,温岭市林大机械有限公司;HH–2型数显恒温水浴锅,江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司;752型紫外可见分光光度计,上海光谱仪器有限公司;电子天平,上海精科天平;电热恒温鼓风干燥箱,上海三发科学仪器有限公司。1.2方法1.2.1提取黑加仑草糖的方法称取适量上述败酱草粉→按一定比例加入蒸馏水→在热水浴中热浸提数→冷却后过滤→取滤液用蒸馏水定容至100ml(即为待测的样液)。1.2.2标准曲线的测定(1)标准曲线的制作:精密称取干燥至质量恒定的标准葡萄糖40mg,加蒸馏水溶解,250ml容量瓶定容,制成葡萄糖标准溶液。分别精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0ml于10ml容量瓶中,各加蒸馏水至2.0ml,然后加5%苯酚溶液1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀,于冷水中放置30min后于490nm处测定吸光度。空白对照以2.0ml蒸馏水代替葡萄糖溶液。以葡萄糖标准溶液浓度为横坐标,所测定的吸光度为纵坐标,得标准曲线。(2)样品多糖含量的测定:吸取样液之前充分摇匀,准确吸取样品液1.0ml,按上述步骤操作,测吸光度,以标准曲线计算多糖含量。(3)多糖提取率的计算:1.2.3提取时间对多糖得率的影响选择对提取多糖有重要影响的因素,分别采用温度为60℃、70℃、80℃、90℃四个水平,结果表明,60℃时多糖得率最低,随着温度的升高,多糖得率不断升高,但温度达到80℃以后,多糖得率略有下降。料水比为1∶10、1∶20、1∶30、1∶40四个水平,结果表明,料液比在1∶10~1∶20时,多糖得率增加迅速。料液比在1∶20~1∶40时,多糖得率增加缓慢。提取时间为1h、2h、3h、4h四个水平,结果表明,随着提取时间的不断增长,多糖得率不断增加。但是提取时间超过2h以后,多糖得率增加缓慢,因此,提取时提取时间应控制在4h以内。提取次数1、2、3、4四个水平进行试验,结果表明,随着提取次数的增加,多糖得率不断增加,但提取次数超过2次时,多糖得率增加缓慢。1.2.4正交试验根据单因素试验结果,以提取多糖得率为试验指标,选正交试验,得出败酱草多糖提取的最佳工艺组合。因素水平见表1,试验结果见表2。2结果与分析2.1建立葡萄糖浓度检测曲线葡萄糖标准曲线见图1。测得葡萄糖标准曲线的回归方程为:y=0.0605x-0.0025,R2=0.9934,其中y为吸光度,x为葡萄糖浓度。2.2正交试验的结果和分析2.3提取验证试验以最优工艺条件(温度90℃,料液比1∶20,时间3h,提取3次)进行验证试验,此条件下多糖得率为3.781%,并且多次试验结果具有良好的重现性。3工艺条件重现性和各因素的交互作用用水浴浸提法提取败酱草多糖的过程中,温度是影响多糖提取率最主要的因素,其次为时间、提取次数和料液比。败酱草多糖的最佳提取工艺条件为温度90℃、料液比1∶20、时间3h、提取次数3次,在此工艺条件下,提取败酱草多糖得率为3.781%。该工艺条件重现性良好。败酱草→烘箱内50℃烘干→植物粉碎机粉碎→密封保存。由正交试验结果和极差分析可知