第十一章 固相膜免疫测定

1.HRP催化的反应式为DH2+H2O2→D+2H2O,何者习惯上被称为底物()A.DH2B.H2O2C.DD.H2O2.OPD经与HRP反应后,再用H2SO4终止反应后呈()A.橙黄色B.棕黄色C.黄色D.蓝色3、目前ELISA中应用最广泛的底物是A.OPDB.TMBC.5-ASAD.ABTS（）ABB4.ELISA双抗体夹心法是()A.酶标记特异抗体用于抗原的检测

B.先将待测抗原包被于固相载体

C.标记一种抗体可检测多种抗原

D.能用于半抗原的测定

E.属竞争结合测定5.捕获法主要用于何种物质的测定

A.IgMB.IgGC.IgAD.IgD

()AA6、下列哪种方法用一种标记物可检测多种被测物()

A.ELISA双抗体夹心法B.ELISA竞争法

C.ELISA间接法D.ELISA捕获法

E.放射免疫测定法7.关于ELISA竟争法,正确的是()A.用于检测抗原B.被测物与酶标记物的免疫活性各不相同C.被测物多则标记物被结合的机会少D.待测管的颜色比参照管的淡表示被测物量少E.结合于固相的酶标抗原量与样品中被测抗原量成正比CC1.每个亲和素能结合多少个分子的生物素

A.1B.2C.3D.42.生物素分子中与亲和素结合的主要部位是()A.噻吩环B.咪唑酮环C.苯环

D.羰基E.-NH-3.在用生物素标记酶时,酶活性会降低的是

A.HRPB.葡萄糖氧化酶

C.β-GalD.AP()BD第十一章固相膜免疫分析技术掌握：免疫印迹试验熟悉：胶体金免疫技术的方法学种类与原理了解：胶体金与免疫金的制备、其他膜载体免疫分析技术一概述二免疫层析试验三免疫渗滤试验四斑点酶联免疫吸附试验五免疫印迹试验六影响固相膜免疫试验的主要因素七固相膜免疫分析技术的临床应用概述固相膜免疫分析技术

(solidphasemembrane-basedimmunoassay)特点:以微孔膜作为固相载体

多孔性,

非共价键高度吸附抗原或抗体易于漂洗第二节免疫层析试验

免疫层析试验原理：以NC膜等为固相载体，样品溶液借助毛细作用在层析条上泳动，同时样品中的待测物与层析材料上待测物的受体（抗原或抗体）发生高特异性、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域，通过目测或仪器检测标记物，在短时间内得到直观的实验结果。

毛细作用是指浸润液体在细管里升高的现象和不浸润液体在细管里降低的现象第二节免疫层析试验

免疫层析试验分为：胶体金免疫层析试验（ICA）荧光免疫层析试验（GICA）

二、测定模式

（一）胶体金免疫层析试验1、双抗体夹心法测抗原2、竞争法测小分子抗原3、间接法测抗体

胶体金免疫层析试验AGCB双抗体夹心法测大分子抗原（阳性，2个条带）胶体金免疫层析试验AGCB竞争法测小分子抗原（阴性，2个条带）

三技术要点操作要点：（1）将试剂条标记线一端浸入待测标本中2-5s,或在标本加样处加一定量待检标本,平放于水平桌面上（2）在5-20分钟内观察结果结果判断夹心法：阴性:1条棕红色指控条带阳性:出现2条棕红色条带

无棕红色条带出现为试剂失效竞争法：阴性:出现2条棕红色条带。阳性:1条棕红色指控条带

第三节免疫渗滤试验1原理在硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到检测目的。2方法类型双抗体夹心法测抗原间接法测特异性抗体三、试剂盒组成和技术要点

①渗滤装置②胶体金标志物③洗涤液④Ag参照品技术要点：1、平放反应板，于小孔内滴加含待测Ag标本1-2滴，与膜上的Ab反应而结合在膜上2、于小孔内滴加胶体金标记Ab试剂1-2滴，使胶体金标记Ab与结合在膜上的Ag反应3、于小孔内滴加洗涤液2-3滴，待完全渗入，洗去未结合的胶体金标记Ab。4、结果观察：阳性膜中央有淡红色或红色斑点

第四节.斑点酶免疫吸附试验(Dot-ELISA)技术要点：1、抗原包被NC膜吸附力强，包被后封闭。2、抗原抗体反应抗原抗体反应后再加二抗3、确定酶结合物最佳稀释度阴性样品不显色，阳性显色最强时的酶结合物稀释度4、显色反应pH值5.8-6.0时反应最灵敏强阳性蓝黑色斑点

弱阳性淡绿色半点方法学评价：1、NC吸附力强，灵敏度较ELISA高6～8倍；2、可同时检测多种抗体；3、操作简便不需特殊仪器设备4、吸附抗原（抗体）或已有结果的NC膜可长期保存，不影响期活性。

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