药物分析实验

药品分析实验目录一、基本知识与基本技能（一）药品分析的性质与任务（二）药品检查工作的基本程序（三）计量器具的检定（四）药品分析数据的解决（五）药品质量原则分析办法的验证（六）药典基本知识二、验证性实验实验一葡萄糖的普通杂质检查…实验二醋酸可的松中其它甾体的检查实验三药品的特殊杂质检查实验四药品的鉴别与区别实验五双相滴定法测定苯扎溴铵溶液的含量实验六凯氏定氮法测定干酵母片的含量实验七非水碱量法测定硫酸奎尼丁的含量实验八溴酸钾法测定异烟肼片的含量实验九磺胺嘧啶的重氮化滴定实验十酸性染料比色法测定硫酸阿托品注射液的含量实验十一硅钨酸重量法测定维生素B1片的含量实验十二差示分光光度法测定苯巴比妥片的含量实验十三三点校正-紫外分光光度法测定维生素AD胶丸中维生素A的含量实验十四气相色谱法测定维生素E片剂的含量实验十五高效液相色谱法测定丙酸睾酮注射液的含量实验十六复方乙酰水杨酸片中三种成分的含量测定实验十七双波长分光光度法测定复方制剂的含量实验十八胃蛋白酶片的含量测定实验十九尿中咖啡酸的比色分析实验二十尿中异烟肼及其代谢物乙酰异烟肼的比色测定实验二十一血清中氨茶碱的双波长分光光度法测定实验二十二血清中茶碱的高效液相色谱分析实验二十三血浆中阿司匹林的高效液相色谱测定实验二十四唾液中对乙酰氨基酚浓度的比色测定三、综合性实验实验一阿司匹林及其制剂的质量分析(一)阿司匹林原料药(二)阿司匹林肠溶片(三)阿司匹林栓实验二对乙酰氨基酚和对乙酰氨基酚片的质量分析(一)对乙酰氨基酚原料药（二）对乙酰氨基酚片实验三盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因注射液的质量分析（一）盐酸普鲁卡因原料药（二）盐酸普鲁卡因注射液四、设计性实验实验一药品的鉴别实验实验二药品的特殊杂质检查实验实验三药品滴定分析实验实验四药品紫外定量分析实验实验五药品的色谱定量分析实验五、附录附录一《中国药典》（二部）凡例附录二药品杂质分析指导原则附录三《药品检查操作原则汇编》中有关样品和取样的规定附录三填写检查成果和检查报告书的规定一、药品分析的基本知识与基本技能（一）药品分析的性质与任务药品分析是药学专业的一门重要专业课程。本课程旨在培养学生含有强烈的药品质量观念和含有从事药品质量研究及质量控制的基本理论知识和基本操作技能。药品分析学是一门研究药品的构成、理化性质、真伪鉴别、纯度检查及含量测定的一门办法学科。药品分析学是整个药学科学领域中一种重要的构成部分，其目的是为了控制药品的质量，确保用药的安全、有效、合理。药品分析是运用物理学的、化学的、物理化学的、生物化学的办法和技术来研究化学构造已经明确的合成药品、天然药品、生化药品及其制剂的质量控制问题。为了全方面控制药品质量，还要与生产单位紧密配合，主动从事药品生产过程的质量控制，从而发现问题、提高药品质量。同时也要与药品供应部门亲密协作，考察药品贮存、使用过程中的质量稳定性问题，以改善药品的贮存条件和办法。可见，药品的质量控制问题不是某一种单位、某一种部门的，也不是某一学科能够单独完毕的，它涉及到药品的研究、生产、供应、使用等多个环节，而药品分析则是其中最重要的一种方面。药品分析的重要任务涉及两个方面:一是药品的常规检查工作，如药品成品的化学检查、药品生产过程的质量控制、药品贮存过程的质量考察等。二是体内药品分析工作，如测定药品在生物材料中的药品浓度，以理解药品进在体内吸取、分布、代谢、消除等动力学过程，为安全合理用药提供信息。（二）药品检查工作的基本程序1．取样取样是从一批产品中按取样规则，抽取出少量样品进行分析。取样应含有科学性、真实性和代表性，否则就失去了检查的意义。生产规模的固体原料药的取样，须采用取样探子取样。取样量要根据产品数量的多少而有所不同，样品取出后应混合均匀。有关样取样的规定见本书药品分析部分附录三。鉴别鉴别就是根据药品的化学构造和理化性质来进行化学反映、测定理化常数、光谱特性及色谱特性以判断药品的真伪。药品的鉴别不能由某一项实验就能完毕，而是要采用一组（二个或几个）实验项目全方面评价一种药品，力求使结论对的无误。选择鉴别办法应以专属性强、敏捷度高、办法简便、成果精确为原则。3.检查 药品质量原则的检查项重要是检查药品的纯度，即检查药品在生产和贮存过程中引入的杂质与否超出了限量。药品在不影响疗效及人体健康的原则下，是能够允许微量的杂质存在的；但其量必须在药品原则规定之内。普通按照药品质量原则规定的项目进行“程度检查”，就是判断药品的纯度与否符合原则的限量规定规定，因此也可称为纯度检查4.含量测定含量测定是测定药品中有效成分的量与否符合药品原则的规定规定。普通采用化学分析、物理化学分析办法或生物化学的办法来测定。判断一种药品的质量与否符合规定，必须综合考虑药品的性状、理化常数、鉴别、检查与含量测定的检查成果。5.统计和报告检查报告是对药品质量检查成果的证明书，结论必须明确、必定，有根据。药品检查统计应真实、简要、完整、具体。笔迹应清晰、色调一致，不得任意涂改，若有写错，可在错处划上单线或双线，而后在其旁边改正重写，并签名盖章。检查统计的内容应涉及：药名、批号、规格、数量、来源(取样或送样部门或单位)、取样办法、外观性状、包装状况、检查目的、取样日期或收到日期、报告日期；检查项目、检查根据、检查办法、数据、计算、成果、结论及解决意见；检查人、复核人签名或盖章。复核后的统计，属内容和计算错误的，由复核人负责；属检查错误的，由检查人负责。（三）计量器具的检定计量器具是指单独或连同辅助设备一起用以进行测量的器具。计量器具的检定是查明和确认计量器具与否法定规定的程序。计量检定人员运用测量原则，按照法定计量检定的规程规定对计量器具的测试能力和可靠性进行检定，以考核和证明计量器具与否可供使用。国家对社会公用计量原则器具，部门和公司、事业单位使用的最高计量原则器具，以及用于贸易结算、安全保护、医疗卫生、环境监测方面的计量器具实施强制检定。未按照规定申请检定或者检定不合格的，不得使用。实施强制检定的计量器具的目录和管理方法，由国务院制订。规定以外的其它计量原则器具和工作计量器具，使用单位应当自行定时检定或者送其它计量检定机构检定，县级以上人民政府计量行政部门负责进行监督检查。按照《中华人民共和国依法管理的计量器具目录》，进行药品分析实验时需要检定的计量器具重要有：温度计、酸度计、天平及砝码、紫外－可见分光光度计、红外分光光度计、原子吸取分光光度计、旋光计、气相色谱仪、高效液相色谱仪等。（四）药品分析数据的解决药品检查过程中所测得的数据由于受分析办法、仪器、试剂,操作者及偶然因素的影响都不可能绝对精确，总是存在一定的误差。这就需要对实验成果的可靠性作出合理的判断并予以对的体现。1．绝对误差和相对误差测量值和真实值之差称为测量误差。测量误差可用两种办法表达,即绝对误差和相对误差。绝对误差是测量值与真实值之差，以测量值的单位为单位,能够是正值,也能够是负值。测量值越靠近真实值,绝对误差越小；反之,则越大。相对误差是以真实值的大小为为基础来表达误差值,他可反映误差在测量值中所占的比例,不受测量值单位的影响，实际工作中，常使用相对误差。，2．系统误差和偶然误差根据误差的性质,误差可分为系统误差和偶然误差两大类。（1）系统误差也叫可定误差,它是由于某种拟定的因素引发的,普通有固定的方向（正或负）和大小,重复测定时重复出现。根据系统误差的来源,又可分为办法误差、仪器误差、试剂误差及操作误差等。办法误差是由分析办法本身不完善或选用不当所造成的。对分析办法误差较大的分析办法必须寻找新的办法加以改正。试剂误差是由于试剂不纯而造成的误差。试剂误差能够通过更换试剂来克服,也可用“空白实验”的办法测知误差的大小加以校正。仪器误差是由于仪器不够精确造成的误差。仪器误差可通过预先校正仪器,选用符合规定的仪器或求出其校正值加以克服。操作误差是由于分析者操作不符合规定造成的误差。操作误差可通过作对照实验或经请有经验的分析人员校正而减免。（2）偶然误差也称不可定误差或随机误差,它是由偶然的因素所引发的，其大小和正负都不固定，但多次测定就会发现绝对值大的误差出现的概率小,绝对值小的误差出现的概率大,正、负偶然误差出现的概率大致相似。因此，可通过增加平行测定的次数,来减少测定的偶然误差。3．有效数字（1）有效数字在科学实验中,对于任一物理量的测定,其精确度都是有一定程度的。测量值的统计，必须与测量的精确度相符合。在分析工作中实际能测量到的数字称为有效数字。在统计有效数字时，规定只允许数的最末一位欠准，并且只能上下差1。拟定有效数字的位数，要根据测量所能达成的精确度来考虑。因此，在统计测量值时，普通只保存一位可疑数值，不可夸张。超出有效数字的数位再多，也不能提高成果可靠性，反而会给运算带来麻烦。从0到9的10个数字中，只有0既能够是有效数字，也能够是只作定位用的无效数字，其它的数都只能作有效数字。（2）有效数字的修约在数据解决时，各个测量值的有效数字位数可能不同，为便于运算，应按一定规则舍弃多出的尾数。舍弃多出的尾数，称为有效数字的修约，其重要原则有:①四舍六入五成双测量值中被修约的那个数等于或不大于4时舍弃,等于或不不大于6时，进位。等于5且5后无数时，若进位后测量值的末位数成偶数，则进位；若进位后，测量值的末位数成奇数，则舍弃。若5后尚有数，阐明修约数比5大，宜进位。②只允许对原测量值一次修约至所需位数，不能分次修约。例如将2.15491修约为三位数，不能先修约成2.155后再修约成2.16,只能一次修约为2.15。③运算过程中，为了减少舍入误差，可多保存一位有效数字（不修约），待算出成果后，再按修约规则，将成果修约至应有的有效数字位数。④在修约原则偏差值或其它表达不拟定度时、修约的成果应使精确度的预计值变得更差某些，例如S＝0.2l3，若取两位有效数字，宜修约为0.22,取一位则为0.3。（3）有效数字的运算法则在计算分析成果时，每个测量值的误差都要传递到成果中去。必须根据误差传递规律，按照有效数字运算法则，合理取舍，才不致影响成果精确度的体现。在做数学运算时，有效数字的解决，加减法与乘除法不同。做加减法是各数值绝对误差的传递，因此成果的绝对误差必须与各数中绝对误差最大的那个相称。普通为了便于计算，可按照小数点后位数最少的那个数保存其它各数的位数，然后再相加减。在乘除法中,因是各数值相对误差的传递，因此成果的相对误差必须与各数中相对误差最大的那个相称。普通为了便于计算，可按照有效数字位数最少的那个数保存其它各数的位数，然后再相乘除。（五）药品质量原则分析办法的验证药品质量原则分析办法验证的目的是证明采用的办法适合于对应检测规定。在建立药品质量原则时，分析办法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析办法进行修订时，则质量原则分析办法也需进行验证。需验证的内容以下。1．精确度精确度系指用该办法测定的成果与真实值或参考值靠近的程度，普通用回收率（%）表达。精确度应在规定的范畴内测试。（1）含量测定办法的精确度原料药可用已知纯度的对照品或供试器进行测定，或用本法所得成果与已知精确度的另一种办法测定的成果进行比较。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或用本法所得成果与已知精确度的另一种办法测定成果进行比较。（2）杂质定量测定的精确度可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如不能得到杂质或降解产物，可用本法测定成果与另一成熟的办法进行比较，如药典原则办法或通过验证的办法。在不能测得杂质或降解产物的响应因子或不能测得对原料药的相对响应因子的状况下，可用原料药的响应因子。应明确表明单个杂质和杂质总量相称于主成分的重量比（%）或面积比（%）。（3）数据规定在规定范畴内，最少用9个测定成果进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。应报告已知加入量的回收率（%），或测定成果平均值与真实值之差及其相对原则偏差或可信限。2.精密度精密度系指在规定的测试条件下，同一种均匀供试品，经多次取样测定所得成果之间的靠近程度。含量测定和杂质的定量测定应考虑办法的精密度。精密度普通用偏差、原则偏差或相对原则偏差（RSD）表达。(1)重复性在相似条件下，由同一种分析人员测定所得成果的精密度称为重复性。在规定范畴内，最少用9个测定成果进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定，或将相称于100%浓度水平的供试品溶液，用最少测定6次的成果进行评价。(2)中间精密度在同一种实验，不同时间由不同分析人员用不同设备测定成果之间的精密度，称为中间精密度。为考察随机变动因素对精密度的影响，应设计方案进行中间精密度实验。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。（3）重现性在不同实验室由不同分析人员测定成果之间的精密度，称为重现性。法定原则采用的分析办法，应进行重现性实验。例如，建立药典分析办法时，通过协同检查得出重现性成果。协同检查的目的、过程和重现性成果均应记载在起草阐明中。应注意重现性实验用的样品本身的质量均匀性和贮存运输中的环境影响因素，以免影响重现性成果。（4）数据规定均应报告原则偏差、相对原则偏差和可信限。3.专属性专属性系指在其它成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的办法能对的测定出被测物的特性。鉴别反映、杂质检查和含量测定办法，均应考察其专属性。如办法不够专属，应采用多个办法予以补充。（1）鉴别反映反映规定能与可能共存的物质或构造相似化合物分辨。不含被测成分的供试品，以及构造相似或组分中的有关化合物，应均呈负反映。（2）含量测定和杂质测定色谱法和其它分离办法，应附代表性图谱，以阐明办法的专属性，并应标明诸成分在图中的位置，色谱法中的分离度应符合规定。在杂质可获得的状况下，对于含量测定，试样中可加入杂质或辅料，考察测定成果与否受干扰，并可与未加杂质或辅料的试样比较测定成果。对于杂质测定，也可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质之间能否得到分离。在杂质降解产物不能获得的状况下，可将含有杂质或降解产物的试样进行测定；与另一种经验证了的办法或药典办法比较成果。用强光照射、高温、高湿、酸（碱）水解或氧化的办法进行加速破坏，以研究可能的降解产物和降解途径。含量测定办法应比对二法的成果，杂质检查比对检查的杂质个数，必要时可采用光二极管阵列检测和质谱检测，进行峰纯度检查。4.检测限检测限系指拭样中被测物能被检出的最低量。药品的鉴别实验和杂质检查办法，均应通过测试拟定办法的检测限。惯用的办法以下：（1）非仪器分析目视法用已知浓度的被测物，实验出能被可靠地检测出最低浓度或量。（2）信噪比法用于能显示基线噪声的分析办法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。普通以信噪比为3∶1或2∶1时对应浓度或注入仪器的量拟定检测限。（3）数据规定应附测试图谱，阐明测试过程和检测限成果。5.定量限定量限系指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定成果应具一定精确度和精密度。杂质和降解产物有定量测定办法研究时，应拟定办法的定量限。惯用信噪比法拟定定量限，普通以信噪比为10∶1时对应浓度或注入仪器的量拟定定量限。6.线性线性指是设计的范畴内，测试成果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。应在规定的范畴内被测定线性关系。可用一储藏液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试样品的办法进行测定，最少制备5份供试样品。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察与否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。数据规定应列出回归方程、有关系数和线性图。7.范畴范畴系指能达成一定精密度、精确度和线性，测试办法合用的高低限浓度或量的区间。范畴应根据分析办法的具体应用和线性、精确度、精密度成果和规定拟定。原料药和制剂含量测定，范畴应为测试浓度的80%~120%；制剂含量均匀度检查，范畴应为测试浓度的70%~130%，根据剂型特点，如气雾剂和喷雾剂，范畴可适宜放宽；溶出度或释放度中的出量测定，范畴应为程度的±20%；如规定了程度范畴，则应为下限的-20%至上限的+20%；杂质测定，范畴应根据初步实测，拟定为规定程度的±20%。如果含量测定与杂质检查同时进行，用百分归一化法，则线性范畴应为杂质规定程度的-20%至含量程度（或上限）的+20%。8.耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定成果不受影响的承受程度，为使办法可用于提供常规检查根据。开始研究分析办法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件规定苛刻，则应在办法中写明。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品的提取次数、时间等。液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的构成和pH值、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。气相色谱变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相、不同类型的担体、柱温、进样口和检测器温度等。经实验，应阐明小的变动能否通过设计的系统合用性实验，以确保办法有效。附表检查项目和验证内容项目鉴别杂质测定含量测定及溶出题测定内容定量程度精确度－+－+精密度重复性－+－+中间精密度－+①－+①专属性②++++检测限－－③+－定量限－+－－线性－+－+范畴－+－+耐用性++++①已有重现性验证，不需验证中间精密度。②如一种办法不够专属，可有其它分析办法予以补充。③视具体状况予以验证。（六）药典基本知识1．药典（pharmacopoeia）药典是一种国家记载药品原则的法典，是国家管理药品生产和实施质量检查的根据。药典的重要特点体现在他的法定性和体例的规范化。法定性是药典同其它法同样，含有法律约束力。规范化是指全书按一定的体例进行编排。2．药品质量原则（简称药品原则）药品原则是国家对药品质量、规格及检查办法所作的技术规定，是药品生产、供应、使用和监督管理部门共同遵照的法定根据。药品原则收载在药典的正文部分，是药典的主体内容。我国现行的药品质量原则是国家药品原则。国家药品原则涉及《中华人民共和国药典》（简称中国药典）、药品注册原则和其它药品原则。国家药品原则由国家药典委员会负责制订和修订，由国家食品药品监督管理局（SFDA）颁布实施。药品检查应严格按照药典规定的项目和办法进行，只有符合药品原则的药品才是合格的药品。生产、销售和使用不符合国家药品原则的药品，均属于违法行为。3．中国药典《中华人民共和国药典》简称《中国药典》，如用英文表达则为ChinesePharmacopoeia（缩写为Ch.P）。《中国药典》由国家药典委员会负责制订和修订，由国家食品药品监督管理局（SFDA）颁布实施。自1949年新中国建立后，国家药典委员会先后共出版了8个版次（1963、1977、1985、1990、1995、、）的《中国药典》。《中国药典》除1953年版为一部和为三部外，其它版次均为二部。《中国药典》为现行版本，于1月出版发行，7月1日起正式执行。该版药典初次将《中国药典》分为三部，其中一部收载中药材、中药饮片及成方制剂；二部收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及其制剂；第三部是将原《中国生物制品规程》并入药典，单独收载生物制品。中国药典内容涉及凡例、正文、附录和索引四个部分。“凡例”是制订和执行药典必须理解和遵照的规则。《中国药典》的凡例，除了阐明书名与内容编排外，并把某些与原则有关的、共性的、需要明确的问题，以及采用的计量单位、符号与专门术语等，用条文加以规定，以避免在全书中重复阐明。凡例的具体内容见本书药品分析部分附录一。正文部分专门收载药品或制剂的质量原则。药品的质量原则的内容普通应涉及：法定名称、构造式、分子式和分子量、来源、性状、鉴别、纯度检查、含量测定、类别、剂量、规格、贮藏、制剂等。正文品种收载的中文药品名称系按照《中国药品通用名称》收载的名称及命名原则命名,《中国药典》收载的中文药品名称均为法定名称。英文名除另有规定外，均采用国际非专利药品名(INN)。附录是药典的重要构成部分。中国药典（）二部附录涉及：制剂通则、普通鉴别实验、分光光度法、色谱法、有关理化常数测定法、有关滴定法及测定法、普通杂质检查法、有关检查法及测定法、制剂检查法及测定法、抗生素效价测定法及安全检查法、升压素生物测定法等测定法、放射性药品检定法、生物检定统计法、试药与滴定液、制药用水、灭菌法、原子量表及指导原则等内容。中国药典（）二部的索引分为两种：一是中文索引（按汉语拼音次序排序）、二是英文名和中文名对照索引。中国药典除有中文的品名录次外，在书末尚有汉语拼音索引和英文索引。4．外国药典介绍现在世界上有38个国家编制了药典，代表性的药典是《美国药典》、《英国药典》、《日本药典》和《欧洲药典》。《美国药典》的英文全称是TheUnitedStatesPharmacopoeia（缩写为USP）。《美国国家处方集》的英文全称是TheNationalFormulary(缩写为NF)。为减少重复，方便使用，从1980年起，USP与NF合并为一册出版，用USP-NF表达。《美国药典》的现行版本是USP（29）-NF（24）版，出版。《英国药典》的英文全称是BritishPharmacopoeia（缩写为BP）。英国药典有悠久的历史，最早的药典是16编写的《伦敦药典》，后又有《爱丁堡药典》和《爱尔兰药典》。1864年合为《英国药典》。《英国药典》的现行版本为，简写为BP()。日本国药典名称是《日本药局方》，英文缩写为JP。《日本药局方》历史也较悠久，1886年就出版了《日本药局方》第一版。《日本药局方》分为二部，一部涉及凡例、制剂总则、普通实验办法（系指各类测定办法）和医药品各论（重要为化学药品、抗生素、放射性药品及多个制剂）。二部涉及通则、生药总则、制剂总则、普通实验办法和医药品各论（重要为生药、生物制品、调剂用附加剂等）。《日本药局方》现行版本是第15版，以JP（15）表达。《欧洲药典》的英文全称是EuropeanPharmacopoeia(缩写为Ph.Eur.)。《欧洲药典》由欧洲药典质量委员会编辑出版，有英文和法文两种法定文本，对其组员国皆有法律约束力。实验一葡萄糖的普通杂质检查一、实验规定1．掌握普通杂质检查的项目及杂质限量计算办法。2．掌握普通杂质检查的原理和办法。二、实验原理1．酸碱度检查是指用药典规定的办法对药品中的酸度、碱度及酸碱度等酸碱性杂质进行检查。检查时应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。不溶于水的药品，可用中性乙醇等有机溶剂溶解。惯用的办法有酸碱滴定法，批示剂法以及pH值测定法。2．氯化物检查是指药品中微量氯化物在硝酸溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量的原则氯化钠溶液在相似条件下生成的氯化银浑浊相比较，以判断供试品中氯化物的限量Cl-+AgNO3→AgCl↓3．硫酸盐检查是指药品中微量硫酸盐与氯化钡试液在酸性溶液中作用生成的白色浑浊液，与一定量的原则硫酸钾溶液与氯化钡试液在相似的条件下生成的浑浊比较，以判断供试品中硫酸盐的限量。SO+BaCI2→BaSO4↓4．铁盐检查是指药品中三价铁盐在酸性溶液中与硫氰酸盐试液生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量的原则铁溶液，用同法解决后进行比色，以判断供试品中三价铁盐的限量。Fe3++6SCN-→[Fe(SCN)6]3-5．重金属检查是指重金属（以铅为代表）在弱酸性（pH3~3.5）溶液中与硫代乙酰胺或硫化钠作用，生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量的原则铅溶液经同法解决后的颜色比较，以控制药品中重金属含量。CH3CSNH2→CH3CONH2+H2SPb2++H2S→PbS↓6．砷盐检查（古蔡氏法）是运用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药品中微量砷盐作用生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与定量原则砷溶液所生成的砷斑比较，以判断药品中砷盐的限量。AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↓+3Zn2++3H2OAsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2（黄色）AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3（棕色）五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成砷化氢的速度较三价砷慢，故在反映液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氧化生成碘，碘又可被氯化亚锡还原为碘离子。AsO43++2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+溶液中的碘离子，又可与反映中产生的锌离子生成稳定的配离子，有助于生成砷化氢的反映不停进行。4I-+Zn2+→ZnI42-7．炽灼残渣检查在机药品经炽灼炭化，再加硫酸湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，于高温（700~800℃）炽灼至完全灰化，使有机物破坏分解变为挥发性物质逸出，残留的非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或无机盐类）称为炽灼残渣，或称为硫酸盐三、实验环节1．酸度取本品2g，加新沸过的冷水20ml溶解后，加酚酞批示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.2ml，应显粉红色。2．氯化物取本品0.60g，加水溶解使成25ml（溶解加显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取原则氯化钠溶液（10μgCl-/ml）6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，供试溶液不得比对照液更浓（0.01%）。3．硫酸盐取本品2.0g，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml、摇匀，即得供试溶液。另取原则硫酸钾溶液（100μgSO42-/ml）2.0ml，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液，于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%的氯化钡溶液5ml，用水稀释成50ml，充足摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.01%）。4．铁盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液（30→100）3ml，摇匀，如显色、与原则铁溶液2.0ml用同一办法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。5．重金属取25ml纳氏比色管两支，甲管中加原则铅溶液（10ugpb/ml）2ml，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，加水稀释成25ml。取本品4.0g置于乙管中，加水23ml溶解，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深（含重金属不得过百万分之五）。6．砷盐取本品2.0g，置检砷瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾溴试液0.5ml，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸5ml与水适量使成28ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，快速将瓶塞塞紧（瓶塞上已置有醋酸铅棉花及溴化汞试纸的检砷管），并在25~40℃的水浴中反映45分钟，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与原则砷溶液一定量制成的原则砷斑比较，颜色不得更深，含砷量不得原则砷斑制备：精密量取原则砷溶液（1μg/ml）2ml，置另一检砷瓶中，加盐酸5ml与水21ml，照上述办法自“加碘化钾试液5ml……”起依法操作，即得原则砷斑。7．炽灼残渣取本品1.0g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全灰化，放冷至室温，加硫酸0.5~1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700~800℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700~800所得炽灼残渣不得超出0.1%。四、注意事项1．比色或比浊操作，均应在纳氏比色管中进行。选择比色管时，应注意样品管与原则管的体积相等，玻璃色质一致，管上刻度均匀，高低一致，如有差别，不得超出2mm。2．样品液与对照品液的操作应遵照平行操作的原则，并应注意按操作次序加入多个试剂。3．比色、比浊前应使比色管内试剂充足混匀，然后将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下观察。4．砷盐检查时，取用的样品管与原则管应力求一致，管的长短，内经一定要相似，以免生成的色斑大小不同，影响比色。锌粒加入后，应立刻将检砷管盖上，塞紧，以免AsH3气体逸出。5．炽灼残渣时，恒重的操作条件，如所用的干燥器、坩埚钳、坩埚置于干燥器内放置时间等，必须一致。五、问题与讨论1．普通杂质检查的重要项目有哪些？2．比色、比浊操作应遵照的原则是什么？3．简述古蔡氏法检砷所加各个试剂的作用与操作注意点。4．炽灼残渣的成败核心是什么？恒重的概念和意义是什么？实验二醋酸可的松中其它甾体的检查一、实验规定1．理解醋酸可的松中的特殊杂质来源及其检查意义。2．掌握薄层色谱法检查特殊杂质的操作办法。二、实验原理甾体激素类药品多是由甾体化合物经构造改造而来，因而可能带来未反映完的原料、中间体、异构体、降解产物、试剂和溶剂等杂质。甾体化合物普通要作“其它甾体”的检查，“其它甾体”是药品中存在的含有甾体构造的其它物质。如合成用的原料、中间体、副产物及降解产物等。由于其它甾体和药品的构造相似，普通采用色谱办法检查，如薄层色谱法、高效液相色谱法等。如醋酸可的松中其它甾体的检查可采用薄层色谱办法。在醋酸可的松的化学构造中，由于C17位的α-醇酮基（-CO-CH3OH）含有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑定量地还原为有色甲臢，生成的颜色随所用的试剂和条件而不同，多为红色或兰色。三、实验步聚1．薄层板的制备取薄层用硅胶G4g，按1∶3（W∶V）比例加0.5%的羧甲基纤维素钠的上清液，研磨均匀，铺于两块5×20cm规格的玻璃板上，于室温下，置水平台上晾干，在110℃2．供试溶液和对照溶液的制备取醋酸可的松适量，加氯仿-甲醇（9∶1）制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取以上溶液适量，加氯仿-甲醇（9∶1）稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。3．薄层层析照薄层色谱法（中国药典1990年版附录30页）实验，吸取上述供试溶液和对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷10ml-乙醚-甲醇-水（385∶60∶15∶2）为展开剂，展开后，晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四