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文档简介
病毒感染力的滴定半数致死量LD50(50%lethaldose)半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedose)半数细胞培养物感染量TCID50(tissueculture50%infectivedose)蚀斑形成单位(plaqueformingunit,PFU)测定病毒感染力的方法:一、病毒TCID50的测定操作步骤在青霉素瓶中将病毒作连续10倍的稀释,从10-1-10-10。将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中,每一稀释度作8孔,每孔接种100µl。在每孔加入细胞悬液100µl,使细胞量达到3×105个/ml。设正常细胞对照,正常细胞对照作两纵排。逐日观察并记录结果,一般需要观察5-7天。结果的计算,按Reed-Muench两氏法或Karber法TCID50的计算方法CalculationofTCID50
UseofReed&Muenchmethod(if50ulofvirusdilutionisaddedtoeach
well)病毒液CPE孔数无CPE累计出现CPE孔稀释度孔数CPE孔数无CPE孔数所占的%10-180270100(27/27)
10-280190100(19/19)
10-37111191.6(11/12)
10-4354640(4/10)
10-5171130.7(1/14)
10-6080210(0/21)
Reed-Muench两氏法距离比例=(高于50%病变率的百分数-50%)/(高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数)=(91.6-50)/(91.6-40)=0.8lgTCID50=距离此例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数
=0.8×(-1)+(-3)=-3.8TCID50=10-3.8/0.1mlKarber法
病毒液稀释度出现CPE孔的比率10-18/8=110-28/8=110-37/8=0.87510-43/8=0.37510-51/8=0.12510-60/8=0lgTCID50=L-d(s-0.5)L:最高稀释度的对数D:稀释度对数之间的差S:阳性孔比率总和lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml二、病毒蚀斑技术病毒蚀斑(plaque)
又称空斑,指病毒在已长成的单层细胞上形成的局限性病灶。原理:适当稀释的病毒悬液接种经长
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