中药复方制乌头的历史沿革、化学成分及药理作用研究

中药复方制乌头的历史沿革、化学成分及药理作用研究

何首乌是蓼科植物的一种干燥的肿瘤根，味苦甘甜涩味，性平热于肝、心、肾经。具有清热解毒、消瘀、疟疾、润肠排便等功效。具有补肝、肾、精血、黑素发、肌肉骨骼、稀释、降脂等功效。目前临床多采用制何首乌入药。笔者现从何首乌炮制历史沿革、炮制工艺、炮制前后化学成分及药理作用研究等几个方面对其综述如下。1加辅料制、药汁制几种大类刑罚试验装置何首乌历代炮制方法有净制、切制、不加辅料制、加辅料制、药汁制几大类20多种炮制方法,其炮制历史沿革见表1。现今常用的仅有净制、切制和加辅料黑豆蒸制,其他炮制方法多未沿用。2制备工艺对麻黄病的净化作用2.1.1切制赵氏等以吸水率为指标,采用旋转响应表面试验设计对何首乌饮片润制工艺进行研究,结果饮片润制过程中吸水率达51%时达到润涨要求,适宜的室温润制工艺为何首乌∶润制用水量=1∶1,润制时间12h,适宜的加热润制工艺为何首乌∶润制用水量=1∶1,润制温度71℃,润制时间131min。2.1.2炮制方法范氏等对炖制和蒸制2种方法炮制的何首乌进行薄层色谱(TLC)定性鉴别和HPLC含量测定,炖制法炮制的何首乌中游离大黄素及2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷含量均高于蒸制法,经TLC检测,采用蒸制法炮制的何首乌中各种成分基本随水蒸气流失。李氏等通过偏光显微镜观察淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化,并比较何首乌各炮制品中的蒽醌类成分、总糖、卵磷脂、二苯乙烯苷、水溶性浸出物的含量。以反复蒸晒7次含量最高,随后各成分的含量有所下降,确定何首乌作为补益药应用时,采用七蒸七晒炮制品较好。2.1.3炮制时间任氏等将何首乌分别采用黑豆汁拌蒸0、2、4、6、8、10h和传统工艺(九蒸九晒)炮制后,用高效液相色谱法(HPLC)测定炮制饮片中二苯乙烯苷的含量,结果不同炮制工艺的饮片中二苯乙烯苷含量顺序为传统工艺炮制品>生品>黑豆汁拌蒸品。用黑豆汁拌蒸,二苯乙烯苷的含量先逐渐上升而后下降,以6h为峰,说明应规范何首乌饮片的炮制时间。张氏等以二苯乙烯苷的含量为指标,采用正交试验法对炮制工艺进行优选研究,结果显示蒸制时间48h为最佳条件。田氏等以何首乌中二苯乙烯苷、多糖、大黄素的含量为指标,采用正交设计综合评分法优化黑豆汁炖何首乌的工艺,结果优化所得工艺为炖36h、干燥9h、干燥温度80℃。罗氏等用硫酸-苯酚法测定何首乌及其炮制品中还原性糖、水溶性糖和多糖的含量,结果何首乌炮制后均较生品含糖量高,并确定清蒸何首乌最佳条件为蒸制35h、100℃干燥。赵氏等以结合蒽醌的量和淀粉糊化程度为指标,研究120℃下长、宽、高在0.8~1cm粒状何首乌和切片厚度在2~4mm厚片何首乌常用2种规格饮片的清蒸工艺,显示粒状蒸制6h最佳,片状蒸制4h最佳。陈氏等通过观察制何首乌不同蒸制时间对小鼠耳壳急性炎症肿胀的影响,寻找黑豆汁拌蒸何首乌最佳蒸制时间,结果确定以黑豆汁制10h为抗炎作用最佳蒸制时间。2.1.4炮制辅料解氏等采用HPLC和分光光度计对清蒸和黑豆汁蒸何首乌中有效成分进行比较分析,结果清蒸和黑豆汁蒸何首乌中蒽醌和二苯乙烯苷无明显差别,认为用清蒸代替黑豆汁蒸是可行的。张氏等以何首乌中二苯乙烯苷、游离蒽醌的含量为指标,考察不同炮制方法(黑豆汁蒸制、黑豆汁煮制、甘草煮制)对何首乌成分的影响,结果表明甘草制何首乌中二苯乙烯苷含量较高,其他略低于生品,游离蒽醌含量均降低,建议制何首乌的炮制方法以黑豆汁蒸或煮8h及甘草煮为好。2.2微波制备工艺及设备研究2.2.1高压蒸制丘氏等采用正交设计,以水浸出物、二苯乙烯苷、水溶性糖含量为指标优化何首乌高压炮制工艺,比较高压炮制品与传统炮制品各指标含量、HPLC指纹图谱、不同分子量糖百分含量比的差异,结果高压炮制何首乌影响因素大小依次为蒸制温度>蒸制时间>干燥温度,高压炮制法和传统炮制法热动力过程不同,所炮制的何首乌无论是醇溶性成分变化还是多糖分子量变化都存在差异。因此认为,高压炮制法能否代替传统炮制法尚需药效学的进一步验证。李氏等用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化,并比较何首乌各炮制品的蒽醌类成分、总糖、卵磷脂、二苯乙烯苷、水溶性浸出物的含量,认为何首乌作为补益药应用时采用高压蒸7h炮制品较好。许氏等用不同辅料(豆、酒、酒豆、不加辅料)润制何首乌,再用高压方法炮制,时间为4、6、8、10h,考察高压炮制方法对二苯乙烯苷和卵磷脂的影响,优选何首乌炮制工艺,以卵磷脂与二苯乙烯苷为考察指标,结果高压豆制品>高压酒制品>高压酒豆制品>高压清蒸品,建议采用高压豆制4h方法炮制何首乌。2.2.2微波炮制李氏等考察了微波干燥和炮制新鲜何首乌的工艺条件,并与传统炮制方法相比较,采用正交设计,以二苯乙烯苷含量为指标优化微波干燥和炮制新鲜何首乌的工艺条件,确定最佳优选条件为火力60%、加热时间3min、药材堆积厚度3cm。结果表明,何首乌经短暂的微波加热后,二苯乙烯苷的含量较传统方法所得的炮制品及生品均高,且失水率达50%左右,表明微波技术在干燥和炮制新鲜何首乌方面是可行的。韦氏等采用正交试验法,以失水率和密度比研究微波对何首乌的干燥和膨化作用,同时以紫外分光光度法测定游离蒽醌和结合蒽醌含量,优化微波炮制何首乌的最佳工艺条件,结果显示,微波炮制何首乌最佳工艺条件为微波功率60%、炮制时间5min、药材铺叠厚度2cm,微波用于新鲜何首乌药材的快速干燥和膨化效果均较好,但对于降低结合蒽醌含量并不明显,表明微波用于何首乌炮制的可行性还有待进一步研究。2.2.3发酵方法YuJ等通过比较何首乌生品、传统炮制品与发酵炮制品的抗氧化活性及致泻不良反应的差异,发现各种炮制方法均可显著降低何首乌的致泻作用,其中用发酵品可显著降低何首乌致稀便的次数及时间,发酵品的抗氧化活性强于传统方法炮制的何首乌,利用米根霉发酵得到的何首乌可在降低致泻作用的同时最大程度地保留何首乌的抗氧化活性,表明该发酵法可成为何首乌炮制方法中新的研究方向。杜氏等采用HPLC考察了何首乌微生物发酵前后二苯乙烯苷类和蒽醌类化学成分的变化,发现何首乌经米根霉发酵后产生了新的蒽醌类成分大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,而二苯乙烯苷类成分无变化;药理研究发现,大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对家兔肠平滑肌的收缩作用弱于大黄素。这表明在何首乌发酵炮制过程中,米根霉可催化大黄素转化为大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,从而降低何首乌的泻下作用,该结果也初步验证了微生物发酵炮制何首乌的科学性。与此同时,采用HPLC和紫外可见分光光度法(UV)对不同菌株发酵的何首乌样品及其发酵前后的化学成分进行比较分析,通过筛选发现米根霉、菌株YMS-006具有专一性降解蒽醌类成分而不破坏二苯乙烯苷的能力,获得了具有发酵炮制作用的菌株。石氏等采用经微生物发酵后的何首乌药材分别通过乙酸乙酯和正丁醇提取,并对提取物进行硅胶柱正相分离方法得到化学成分,结果在发酵何首乌中通过光谱分析法鉴定得到6个化学成分,化学成分与生何首乌相比没有发生明显的变化。刘氏等采用HPLC梯度洗脱的方法测定了不同何首乌的特征图谱,结果发酵何首乌与同一来源的何首乌、制何首乌之间相关性较好,化学成分总体相似,未发现新成分。秦氏将发酵何首乌和药典所收载的炮制品种以及何首乌的地上与地下部分进行了系统研究,对发酵何首乌性状、鉴别、检查、含量测定等质量控制项进行了研究,建立了TLC鉴别方法;对水分、灰分、总鞣质作了检查,建立了二苯乙烯苷、游离蒽醌的HPLC含量测定方法,拟定了发酵何首乌质量标准。2.2.4膨化方法郭氏等利用醋酸镁比色法分别测定膨化前后何首乌中游离和结合蒽醌的含量,结果膨化使何首乌中游离和结合蒽醌的含量都有所下降,但后者比前者下降更明显,表明从何首乌炮制的目的来说挤压膨化可以用于何首乌的炮制加工。朱氏等采用HPLC测定何首乌膨化前后样品溶液中大黄素含量,结果何首乌膨化后大黄素含量降低了0.0108%,相对降低27.48%。这表明膨化技术会降低何首乌中大黄素含量,膨化作为一种新型的中药材加工方法并不适用于何首乌。3配方中各成分的作用何首乌的化学成分主要有蒽醌类、二苯乙烯苷类、糖类、卵磷脂、鞣质及微量元素等,炮制对各成分均有一定影响,包括已知成分的含量变化和新成分的产生。3.1张结合剂对玉米中化学成分的影响2010年版《中华人民共和国药典》以二苯乙烯苷和结合蒽醌的含量控制生何首乌的质量,二苯乙烯苷和游离蒽醌的含量控制制何首乌的质量,其中二苯乙烯苷的含量生何首乌不得少于1.0%,制何首乌不得少于0.70%。生何首乌含结合蒽醌以大黄素(C15H10O5)和大黄素甲醚(C16H12O5)的总量计,不得少于0.05%;制何首乌含游离蒽醌以大黄素(C15H10O5)和大黄素甲醚(C16H12O5)的总量计,不得少于0.10%。张氏等采用紫外分光光度法,以0.5%醋酸镁-甲醇溶液显色测定蒽醌含量,采用HPLC测定大黄素的含量。结果炮制后,何首乌中结合蒽醌类成分明显降低,总蒽醌类含量有所升高,结合蒽醌占总蒽醌的比例明显降低;结合大黄素含量明显降低,总大黄素含量有所升高,结合大黄素占总大黄素的比例明显降低。史氏采用UV测定何首乌炮制前后蒽醌类和二苯乙烯苷的含量变化,结果制何首乌中游离蒽醌的含量略高于生何首乌,而结合蒽醌的含量生何首乌则明显高于制何首乌;二苯乙烯苷的含量生何首乌高于制何首乌。张氏等采用HPLC对何首乌中5种主要化学成分大黄素、大黄素甲醚、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷以及2,3,5,4’-四羟基反式二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量在炮制过程中不同时间的动态变化进行研究,结果所测5种成分的含量均明显降低。陈氏等采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定制何首乌中化学成分含量的动态变化,结果2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷随着炮制时间的延长,其含量呈下降趋势;游离蒽醌类物质大黄素与大黄素甲醚,炮制后均比炮制前高,且都在炮制后32h达最高峰。王氏等采用HPLC测定生何首乌、清蒸制何首乌和黑豆制何首乌中大黄素和二苯乙烯苷含量,并分别对其含量进行比较,发现生何首乌中二苯乙烯苷含量显著高于制首乌,而制何首乌中大黄素含量显著高于生何首乌。一般认为,炮制使何首乌中的部分结合蒽醌苷类分解生成游离蒽醌,而降低了其泻下作用。3.2不同碳量玉米糖和双糖含量对糖品品质的影响刘氏等采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定何首乌炮制过程中单糖和双糖含量的变化,结果随炮制时间的延长,何首乌中的单糖D-葡萄糖含量逐渐升高,D-果糖含量逐渐降低,双糖蔗糖含量逐渐降低,其总量也逐渐降低,表明何首乌在炮制过程中单糖和双糖含量不断变化。赵氏等用硫酸-苯酚法测定制何首乌饮片总糖含量,结果清蒸品的总糖含量高于黑豆汁拌蒸品,随蒸制时间、蒸制温度的增加,制何首乌的总糖增加。丘氏等采用硫酸-蒽酮比色法测定何首乌及其炮制品中水溶性总糖、单糖-低聚糖、多糖的含量,结果何首乌炮制后水溶性总糖含量升高,其中单糖-低聚糖、多糖均有所增加,以多糖含量增加为主。3.3不同处理对儿茶素含量的影响刘氏等用皮粉法测定何首乌炮制品中的鞣质含量,结果鞣质含量随炮制时间延长而逐渐下降;进一步通过HPLC测定何首乌不同炮制品中没食子酸和儿茶素含量,发现儿茶素含量随炮制时间的延长呈现降低趋势至16h检测不到,而没食子酸含量随炮制时间的延长逐渐升高至40h最高,然后在48h含量降低。说明何首乌炮制前后没食子酸和儿茶素的含量发生明显变化。采用黑豆汁蒸法、黑豆汁炖法和清蒸法炮制相同时间,2种成分含量无明显差异,而与高压蒸法比较差异明显。陈氏等采用RP-HPLC观察制何首乌中没食子酸在炮制时间变化过程中含量的动态变化,发现没食子酸炮制后含量明显增加,但随着炮制时间延长其含量变化不大。3.4认同地面炮的质量指标周氏等采用钼蓝-分光光度法测定何首乌炮制过程中磷脂的含量,方法简便、灵敏、专属性强,为何首乌及其不同炮制品的质量评价提供了有效的方法。赵氏等用钼蓝比色法测定制何首乌饮片的磷脂含量,结果显示,黑豆汁拌蒸品的磷脂含量高于清蒸品,随蒸制时间、蒸制温度的增加,制何首乌中磷脂减少。3.5药质量前后微量元素的总量及溶出特性金氏等应用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术对中药炮制前后18种微量元素的总量及溶出特性的改变进行考察,黄芪、大黄、黄芩、地黄、何首乌炮制后,微量元素的溶出率总体呈现上升趋势。提示中药炮制可改变微量元素的总量和溶出特性。3.6新产生成分ddmp和5-二羟基-4-化合物ddmp、3,5-二羟基-4-化合物ddmp、h通过对制何首乌化学成分进行分离和波谱数据分析鉴定,确定何首乌炮制后新产生的化学成分为5-羟基麦芽酚、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4氢-吡喃-4-酮(DDMP)、3,5-二羟基-2-甲基-4氢-吡喃-4-酮、琥珀酸。有研究采用HPLC分析何首乌炮制后新产生成分DDMP和5-HMF的含量随炮制时间的变化情况,结果在炮制60h时间内,随炮制时间延长,DDMP含量逐渐升高,至炮制24h达到最高,随后开始逐渐降低;5-HMF含量随炮制时间的延长逐渐升高。4乌制品致泻强度及hplc值赵氏等采用小鼠泻下半数有效量(ED50)为评价指标,考察何首乌生品和经4个不同炮制时间处理过的何首乌制品致泻强度的差异,结果致泻强度顺序为生品何首乌>1h制品何首乌>2h制品何首乌>3h制品何首乌>4h制品何首乌;而HPLC测得的结合型蒽醌含量高低顺序为:生品何首乌>1h制品何首乌>2h制品何首乌>3h制品何首乌>4h制品何首乌。说明何首乌致泻强度与结合型蒽醌含量间具有量-时-效关系。4.2肝氧化作用检测小鼠肝损伤中抗氧化酶系统的关系赵氏等通过溴代苯致小鼠肝中毒实验,观察了何首乌3种炮制品的抗氧化作用,结果生何首乌、制何首乌、制何首乌颗粒对溴代苯诱发的小鼠肝损伤有不同程度的保护作用,可使肝组织中的超氧化物歧化酶(SOD)含量明显增加,丙二醛(MDA)含量明显下降,表明3种炮制品均有抗氧化作用。4.3急性炎炎作用陈氏等观察不同蒸制时间制何首乌对二甲苯、巴豆油致小鼠耳壳急性炎症肿胀的影响,发现黑豆汁拌蒸的何首乌随着蒸制时间延长,抗炎作用增强。4.4不同浓度苯乙胺对模型大鼠红细胞系统指标的影响丘氏等建立大鼠血虚动物模型,比较样品粗多糖的药效差异,结果生何首乌及不同炮制品水溶性糖含量及其分子量分布不同,除炮制72h制何首乌外,生何首乌粗多糖和其他各制何首乌样品(传统笼屉蒸法24、32、40h,流通蒸汽锅蒸法24、32、48h)粗多糖对模型大鼠红细胞系统指标