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文档简介

实验九动物组织中DNA的提取与鉴定

一、实验目的掌握DNA的提取方法。二、实验原理

DNA+RNAPrPr+DNPRNPDNP在1mol/LNaCl中溶解度最大

RNP在0.15mol/LNaCl中溶解度最大可分离DNP和RNP二苯胺

二苯胺法鉴定DNA酸解脱氧核糖

嘌呤ω-羟基-γ酮基戊醛

蓝色的化合物SDSDNAPrDNP氯仿-异戊醇除去蛋白质

95%的乙醇

沉淀几个试剂的作用柠檬酸盐、EDTA

防止DNA酶对DNA的降解（可螯合除去DNA酶活性所需的Mg2+，抑制DNA酶的活性）SDS氯仿-异戊醇除去变性蛋白质使蛋白质变性

三、操作

1、制备匀浆：

称取新鲜动物肝脏5g，置于研钵中，剪碎，加2倍组织重的冷0.15mol/L

NaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液(10mL)，研磨成浆状，得匀浆液。

（一）DNA的提取

2、抽提DNP粗制品

将匀浆液（除去组织碎片）转移至离心管中，4000r/min离心10min，弃去上清夜，收集沉淀(内含DNP)。向沉淀中加两倍体积(10mL)的冷0.15mol/L

NaCl–0.015

mol/L柠檬酸钠溶液，搅匀，如前离心，重复洗涤2~3次。所得沉淀为DNP粗制品，移至烧杯中。

3、DNA与蛋白质分离

向沉淀中加入冷0.15

mol/LNaCl-0.1

mol/L

EDTA-Na2溶液，使总体积达到8mL，在缓慢搅拌的同时滴加5%SDS溶液2mL，使SDS最终浓度达1%，边加边搅拌，使DNA与蛋白质分离。再加入5mol/LNaCl溶液2.5mL，使Na

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