微波萃取连钱草中总三酸的工艺研究

微波萃取连钱草中总三酸的工艺研究

连草是嘴唇科多年生草本植物的活血丹（nakai）kpr干燥区域，主要产于江苏省和浙江省。有利湿通淋,清热解毒,散瘀消肿等功效。现代医学表明,连钱草具有治疗胆固醇结石及抗炎作用。据有关文献报道连钱草中主要含有黄酮和三萜酸类成分,如齐墩果酸、熊果酸等。目前连钱草中总黄酮的提取方法报导较多,而总三萜酸的提取工艺较为匮乏。本实验采用微波萃取法提取连钱草中总三萜酸成分,并与传统醇回流法相比较,得到了比较满意的结论。笔者就微波萃取法提取连钱草中总三萜酸类成分,进行了最佳工艺条件探索,同时与传统的醇提取法进行了比较,结果微波萃取法的结果更令人满意。1材料和机器1.1仪器和检测方法高速万能粉碎机(泰斯特仪器有限公司,天津);CW-2008微波萃取仪(新拓分析仪器科技有限公司,上海);TU-1901紫外分光光度计(普析通用仪器有限责任公司,北京);RE-2000旋转蒸发仪(亚荣生化仪器厂,上海)。1.2浙江医学研究熊果酸对照品(中国药品生物制品鉴定所);连钱草(浙江中医药大学第二门诊部提供,经浙江医学高等专科学校邓茂芳副教授鉴定);高氯酸、冰醋酸、香草醛、无水乙醇均为分析纯。2方法和结果2.1标准曲线的生产2.1.1熊乳酸储备液0.精密称取熊果酸对照品10mg(实际为9.8mg),置100mL量瓶中,加无水乙醇溶解后,定容至刻度,摇匀,即得熊果酸储备液(0.098mg/mL)。2.1.2熊乳酸总总糖含量测定分别精密量取0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40mL熊果酸储备液,水浴挥干,分别加5%香草醛-冰醋酸液0.4mL、高氯酸0.8mL,置60℃水浴加热10min,冰浴冷却后,加冰醋酸5.0mL摇匀,用紫外分光光度法在546nm处测定其吸光度。2.1.3标准曲线的绘制以熊果酸含量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,得到标准曲线,其回归方程为:y=6.0117x+0.0933,r=0.9995,线性范围为0.020～0.140mg/mL。2.2正交表设计选用微波萃取-醇提法,拟定4个因素(溶剂浓度,固液比,提取温度,提取时间),各取3个水平,拟定L9(34)正交表设计实验,见表1。2.3黄酮类成分的萃取取干燥药材粉末10g,置提取器中,分别按正交设计的实验条件萃取黄酮类成分,微波强度为50%。经微波萃取后,过滤,滤液回收乙醇,残留物用50%乙醇溶解,定容至50mL,摇匀,备用。2.4测定总三酸含量在连钱草中的含量分别吸取上述各样品溶液0.4mL,按2.1.2项方法显色,于546nm处测定其吸光度,测定总三萜酸成分在连钱草中的含量,结果见表2。2.5结果分析2.5.1进行误差分析研究结果以测定总三萜酸成分含量为优选正交方案的考察指标,进行极差分析,见表3。极差R值大小显示,各因素作用主次为A>C>D>B,最佳工艺为A2B1C2D3,即用50%的乙醇8倍量,于70℃提取10min。2.5.2分散分析将正交试验结果进行方差分析,结果见表4。可知相对于B因素,A因素有显著性意义。2.6最佳工艺验证取连钱草粗粉,按最佳工艺条件提取样品,重复试验5次,结果见表5,提取率的平均值为0.940%,RSD=1.25%(n=5)。2.7返回率测试精密称取已知含量的样品,准确加入熊果酸对照品进行测定分析,得平均回收率为99.58%,RSD=2.03%。结果见表6。2.8连钱草草总三酸含量的测定称取干燥药材粉末10g,按上述最佳乙醇浓度和配液比,即加入400mL50%的乙醇,于70℃回流提取2h,过滤,同法再操作一次,合并提取液,过滤,回收乙醇,残留物用50%乙醇溶解,定容至50mL,按2.4项下方法测定含量,计算得连钱草草总三萜酸含量为0.647%。微波萃取法与之相比,提取效率高45.3%。如图1所示,且使用微波萃取所用时间短,效率高,损失小。3微波萃取法与传统乙醇回流法比较本次实验通过正交分析,得到了微波萃取连钱草总三萜酸的最佳工艺,即:50%的乙醇8倍量,于70℃提取10min。几个影响因素中,溶剂的浓度对结果影响最大,其次是提取时间和提取温度,固液比对结果的影响不大,可以根据实际条件选择。微波萃取法是一种新型的提取方法,具有设备简单、萃取范围广、提取效率高、重现性好、节省时间、节省试