化验室操作规程

化验室化验室需要器械试剂：一、 需要的器械：显微镜、血细胞计数板、血球计数器、白细胞分类计数器、载玻片、血盖片、一次性盖玻片、香柏油（镜油）、擦镜纸、、滴瓶（染液）、滴定管（有刻度的：10ml、1ml各一只）、定量吸管（配套吸头）、一次性试管、试管架、天平、离心机（最大转速4000转/分）、广口瓶（装红白细胞稀释液）、吸耳球、染色缸、染色架、定性滤纸、X光胶片（感光、无影象的部分X酒精灯、白金饵勺或铜丝做成的饵勺、剪毛剪（弯剪）、刀片、止血钳、止血绷带、干湿棉球、肾型托盘、注射器若干、生化采血的真空负压管（4毫升）。二、 需要的试剂：抗凝剂、红细胞稀释液、白细胞释释液、瑞吉氏染色液、蒸馏水、5%NaHCO3、饱和盐水、5%的卢戈氏碘液、镜头檫洗剂、中性甲醇、生理盐水、10%中性甘油、一、血常规：一） 、需要的器械、试剂与染料：1） 需要器械：显微镜、血细胞计数板（0.1mm）、血球计数器、白细胞分类计数器、载玻片、血盖片、一次性盖玻片、香柏油（镜油）、擦镜纸、镜头擦洗剂（擦镜油）、滴瓶（染色）、吸耳球、染色缸、染色架、定性滤纸、滴定管、定量吸管、一次性试管、试管架、广口瓶、酒精灯、研钵。2） 需要试剂与染料：抗凝剂、中性甲醇、冰醋酸、甘油、生理盐水、蒸馏水、瑞氏染粉、吉氏染粉、草酸铵、草酸钾、亚甲蓝、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠。二） 、常用试剂的配制：1） 、抗凝剂的配制方法：草酸铵6.0g，草酸钾4.0g,蒸馏水100ml配制，取0.05ml分装于小试管中备用.2） 、红细胞稀释液：0.9%的氯化钠溶液。3） 、白细胞稀释液：冰醋酸2ml，加蒸馏水至100ml，再加10g/L亚甲蓝数滴，成天蓝色即可，以便与红细胞稀释液区别。4） 、10g/L亚甲蓝：即每10g亚甲蓝需要1L蒸馏水，因用量不大等比例递减，0.5g亚甲蓝加50ml蒸馏水配制。5） 、瑞吉氏染色液：瑞特氏染粉1.0g，吉氏染粉0.3g，中性甘油10ml，甲醇500ml。6） 、缓冲液（pH值6.8时）：磷酸二氯钾5.47g，磷酸氢二钠3.8g，蒸馏水加至1000ml。临床用蒸馏水代替亦可。三） 、血常规的操作方法与技巧：1）、准备：三个空试管，一个加抗凝剂半滴（约0.05ml），一个加红细胞稀释液3.98ml或4.0ml，一个加白细胞稀释液0.38ml或0.4ml，准备2个干净的载玻片，盖玻片，计数板，血盖片用丝绸擦干净，然后将盖玻片盖在计数板上，两拇指稍用力按压，上下推动数次，使盖玻片与计数板紧密接触，然后两拇指翘起、松开。用10倍镜镜检计数池无异物即可备用。2） 、采血：略（取0.5—1ml血即可）3） 、操作：①染片。取血后将注射器针头拔掉，立即把新鲜血推入抗凝管，用手轻轻弹动混匀，然后把剩余未凝的血液滴在干净的载玻片的右端半滴，马上推片，或取抗凝血推片亦可。要求左手的拇指与食指夹持载玻片，右手持盖玻片，将盖玻片倾斜30-40。角，使其一端与载玻片接触放在血滴之前，待血液扩散形成一条线之后，用力均匀轻轻向左推动，形成一层薄的均匀的血膜。用洗耳球迅速将血膜吹干。放在染色架上，先加中性甲醇适量固定血膜2分钟，待甲醇挥发后，再滴瑞吉氏染液3-5滴使其覆盖整个血膜，加等量缓冲液稀释，染液与缓冲液的比例是1：1或1：2,用洗耳球轻轻吹动，使缓冲液与瑞吉氏染液充分混合均匀，否则染出的血片颜色深浅不一。染片时间为3—5分钟（染色液中的甲醇易挥发，若在染片中染色液干燥，呈现出像金粉样的膜，此时应再补加染色液），此时应进行下一步红白细胞计数工作。注意：推片时，若推片角度越小血片越厚，推片角度越大血片越薄，外界气温高染色的时间短，外界气温低染色的时间长。滴加瑞吉氏染液的量不宜太少，太少易挥发变干，形成颗粒。红细胞、白细胞计数。用两支20山定量吸管分别吸取抗凝血20山（二个格）用干净的棉球擦去吸管外壁多余的血液，将此血液分别吹入加好了红细胞稀释液和加好了白细胞稀释液的两个试管底部。连续吸吹数次，以洗出定量管内沾附的血液，然后将红细胞稀释液的试管口折上，捏住，轻轻颠倒混匀后，用定量吸管吸15山充入计数池。再用食指轻轻振动白细胞稀释管充分混匀，吸15W充入另一计数池。静置1分钟，等待细胞沉淀，红细胞易破裂，先数红细胞，数红细胞时先用10倍镜观察，光线不要太强，找到计数室的格子后把中间的大方格调到视野中，发现此方格分为25个中方格，每个中方格又分为16个小方格。然后转用40倍镜适量调亮光线，开始计数。计数时可选用数四角与中间的共5个中方格或用对角线的方法计数5个中方格，每一大中方格中有16个小方格应计数，计数原则是数左不数右，数上不数下。计数的数字记为X。计算：x/80X400X200X10=1mm3血液中的红细胞个数。说明：式中x——5个中方格，即80个小方格内的红细胞总数。400——一个大方格，即1mm3面积内共有400个小方格。200——稀释倍数10——血盖片与计数板的高度化简式：xX10000=个/mm3，结果的填写：计数的结果x的小数点向前移两位，记入化验单。然后将显微镜视野调至白细胞计数池，用10倍镜找到白细胞计数格，发现有4个大方格，每个大方格分为16个小方格，将这些方格内的白细胞依次数完，计数方法同红细胞计数，压在左线和上线的白细胞计算在内，压在右线和下线都不计算。计数的结果记为x。计算：x/4X20X10=白细胞总数/mm3式中：x-------四个角四个大方格内的白细胞总数；x/4-----一个大方格内的白细胞数；20——稀释倍数10 血盖片与计数板的实际高度1/10mm，乘10后则为1mm。化简式：xX50=白细胞总数/mm3。结果的填写：计数的结果xX50-1000直接记入化验单。注意：稀释液充入计数池的量不易过多或过少，过多可使稀释液充入另一计数池影响计数，并且会使血盖片浮起来使计数结果偏高，过少则在计数池中开形成小的空气泡，使计数结果偏低甚至无法计数。白细胞分类计数。数完红、白细胞总数、血片染色时间相恰，蒸馏水冲洗染片，用滤纸轻压染片吸掉玻片的水份，切勿用力按压或使玻片与滤纸来回摩擦，自然风干或酒精灯烘干，先放在10倍镜下观察血片上的白细胞的分布情况（一般来说，嗜中性白细胞、单核细胞以及体积较大的细胞分布在血片的上、下边及尾端，淋巴细胞则多在涂片的起始端），玻片滴加1—1.5滴香柏油，转用油镜（100倍）观片，光线调到最亮进行各种细胞分类计数，若病例多熟练的化验员可采用高倍镜（40倍）的方法分类，此法简便快捷但有一定的误差，初学者一般不用.计数时为避免遗漏减少误差可用四角曲折计数法或三段曲折及二段曲折计数法，工作中一般采取以下方法（具体如图）A四角曲折计数法B三段曲折计数法C二段曲折计数法注意事项:①冲洗血染片时应将蒸馏水直接向血膜上倾倒，使液体从血片边缘溢出，沉淀物从液面浮去，切勿将染液倾去再冲洗，将染片倾斜冲洗也是错误的，否则沉淀物附着于血膜上不易冲掉.②染色良好的血片是樱红色，如是淡紫色是染色时间过长;是红色则是染色时间过短，碱性水时，血片是烟灰色;酸性水时，则是鲜红色.，水偏碱或偏酸时，可用适量1%醋酸液或1%碳酸氢钠液矫正。血常规检验临床意义及分析思考1、白细胞总数：6个以下疑为病毒感染、预后不良；4个以下病危；12个以上为炎性感染。2、 叶状中性粒细胞：经验值65个以下核左移，82个以上核右移，正常参考值60-77个。3、 杆状中性粒细胞：2—8个为正常，10个以上为核左移。4、 单核细胞：6个以下为正常，10—20个反映了骨髓病倾向。5、 淋巴细胞：5个以下为病毒感染。6、 嗜酸性粒细胞：6个以下正常，6个以上疑为寄生虫或应激、过敏。白细胞总数低，核右移，杆状少，预后不良。白细胞总数低，核左移，杆状高，目前虽无战斗力，但有好转可能。白细胞总数高，核右移，杆状少，目前仍有战斗力，但需要观察，目前分叶尚能维持三天，分叶在血液中战斗力能维持三天。白细胞总数高，核左移，目前抵抗力不高，但将来会好的。白细胞总数高，是机体对炎症的防御性反应，对于急性传染病的细菌继发期（犬瘟中期），化脓性炎症（子宫畜脓、腹膜炎）急性炎症（肺炎、胃肠炎）。二、便常规：一） 、需要试剂、试纸与器械：饱和盐水、瑞吉氏染液、细小病毒特异诊断纸条、隐血试纸条、尿杯、白金饵勺、天平、试管、离心机、酒精灯、一次性吸管、载玻片、盖玻片、生理盐水、蒸馏水、卢戈氏碘液。二） 、饱和盐水的配制方法：1000ml水中加380g盐。三） 、准备：取便方法（略）取好新鲜无污染的粪便典型部分放入一次性尿杯，加适量生理盐水混匀备用。四） 、操作程序：1） 隐血诊断与细小病毒特异性诊断：将隐血试纸条插入已稀释好的尿杯粪便中，取出30秒后看结果。然后用吸管吸取少量粪便上清液，滴入细小试纸样品孔，每隔3秒左右滴一滴，约3—5滴左右，水平放置，5-10分钟后观察结果。结果判定：（T为检测区、C为对照区）；阳性：C、T两条紫红线均出现弱阳性：C、T两条紫红线均出现，但T线不明显。阴性：只有C出现一条紫红线。无效：C、T两条红线均不出现。2） 活片镜检：取1滴混匀的粪便滴在干净的载玻片上，盖上盖玻片，先用低倍镜找至U，高倍镜确认。注意：在加盖玻片时最好先将盖玻片的一边接触液面，然后慢慢的放平，以防产生空气。活片镜检可见寄生虫卵、中性脂肪、淀粉颗粒、超量的杆菌、球菌、植物纤维、血细胞。3） slais推片法染片看菌：将粪便混匀，左手持玻片，取一滴粪便滴在玻片上，右手再拿一干净的载玻片，使两玻片十字交叉平面接触，右手玻片不动，左手迅速将玻片拉开，使两玻片相摩擦，推出均匀的活片，用酒精灯将其火焰固定，加瑞吉氏染液3—5滴，两分钟后，加缓冲液等量稀释，3—5分钟后冲片，干燥。100倍油镜看霉菌、杆菌、球菌、脓细胞、血细胞等。4）饱和盐水漂浮法看虫卵：从尿杯中取出约1g混匀的粪便，置入另一尿杯，加饱和盐水5—10倍稀释，静置15分钟看虫卵时。饱和盐水漂浮法静置后的虫卵：小于饱和盐水密度的虫卵则上浮在表面，大于饱和盐水密度的虫卵则下沉在底部。看小虫卵，用白金饵勺与液面平行接触沾取表面液膜。边缘和中间各取一次，抖落于载玻片上，盖上盖玻片，中间不要产生汽泡。10倍下镜检，可疑虫卵用40倍镜确认。若看大虫卵（如滴虫、吸虫），可将其粪便置入试管，用离心机1500转/分，离心8—15分钟，将上清液提出弃掉，剩0.5ml沉渣混匀,取一滴压片,由低倍至高倍镜检。注意：淀粉颗粒与虫卵镜检有时不好分辨，可在玻片上滴加一滴5%卢格氏碘液来区别，虫卵遇卢格氏碘液变黄，淀粉则变蓝。三胰蛋白酶的测定（75%的准确率）（一） 需要试剂与器械：5%NaHCO3,两个干净的试管，两小段感光无显影的胶片。（二） 操作方法：1） 在A试管中加入5%NaHCO3，溶液5ml，再加入粪便1g，混合后为测定管。2） 在B试管中加入5%NaHCO35ml为对照管。3） 将感光的X光胶片，裁成宽0.3cm,长11cm,条状物后分别放入A测定管和B对照管中各一根,然后将A、B两试管放37度温箱中，保温1小时.若没有温箱可将两试管折上，用胶带缠好放在腋下或暖气片上恒温1小时.4）结果判定:将A、B两管中胶条取出后,用自来水冲洗干净,先看对照管中胶条应该是原色的，再看测定管中胶条若是原色,表示粪便中胰蛋白酶不存在，则说明胰脏不正常。若胶条变成透明的，表示粪便中有胰蛋白酶，此时的胰脏正常。四犬瘟试纸特异诊断：（一）操作方法：用试纸盒配套的棉签采取病料，按眼分泌物、鼻流物、唾液、尿液、粪便、血液的优先顺序取样，将棉签插入稀释液中，充分搅拌混合，静置5分钟后，用吸管吸取上清液，加入试纸板样品孔3—4滴（滴加时速度不宜过快），5—10分钟观察结果。结果判定：C、T同时出现2条线说明犬瘟“+”性。只有T出现一条线，则犬瘟“一”性。若C、T两条线均不出现，说明试纸无效。五尿常规：（一） 需要试剂与器械：瑞吉氏染色液、5%的卢格氏碘液、尿八项试纸、尿杯、载玻片、盖玻片、天平、离心机、一次性试管、一次性吸管、蒸馏水、缓冲液、酒精灯。（二） 操作程序：1） 尿八项测定。取新鲜尿液置入尿杯，取上清液滴加在尿八项试纸上观察结果。若对尿八项不熟悉可采取滴一项记一项来观察结果。2） 尿沉渣测定。将剩余尿液提入试管中，称平，离心1500转/分5—10分钟，用吸管小心将上清液吸出弃掉，留下0.5ml尿沉渣，手摇动试管，混匀尿沉渣，用吸管吸取尿沉渣2滴,滴于载玻片上，加1滴卢戈氏碘液，盖上盖玻片，在加上盖玻片上不要产生气泡，置于低倍镜下观片，高倍镜确认（若发现酸性结石、碱性结石或大量红细胞、白细胞 说明为病理现象），常规碱性结石有碳酸钙、磷酸铵镁结晶、磷酸钙等，常见的酸性结石有：草酸钙、尿酸结晶等。管型分为：透明管型、红细胞管型、上皮细胞管型、颗粒管型等。透明管型是：病理时，肾小球通透性增高，将血浆中浆蛋白析出，脓稠的浆蛋白通过血管网析到稀薄的尿液中，从肾盂到降绊、升绊，然后到降绊，最后到膀胱途中凝结硬化，即形成管型。

红细胞管型：红细胞管型是尿液中的红细胞附着在透明管型上称红细胞管型。上皮细胞管型：肾上皮细胞、膀胱上皮细胞等附着在透明管型上称为上皮细胞。颗粒管型：肾小管剥脱的上皮细胞破坏变成的颗粒或蛋白质凝固的颗粒附着在透明管型上称为颗粒管型。常见上皮细胞管型如下：膀胱上皮细胞膀胱上皮细胞诊断结果：①显微镜检若小圆上皮（肾上皮）在尿液中占一定比例时，说明有真性肾炎。尿液里见到大量的白细胞、红细胞、分叶细胞等，说明尿道出血或膀胱出血，较容易治疗。偶见一个或少量透明管型，尿蛋白阴性“一”可能是机体发烧、剧烈运动、应激、轻度肾脏炎症。尿蛋白“+”即无管型又无上皮细胞，可能有轻度肾炎。尿蛋白“+”无管型，只有肾上皮定为真性肾炎。尿蛋白“+”同时见到肾上皮细胞，大量的红细胞、白细胞，动物出血多，有浮肿现象，定为真性肾炎。若有管型，同时可见肾上皮（小圆上皮），肾小球上皮，触摸动物腹部紧张，定为真性肾炎。（三）、Slais染片观察尿沉渣：先用Slais法推片（方法略），自然风干或用酒精灯火焰固定加瑞吉氏染色液3—5滴固定2分钟，再加等量缓冲液稀释3—5分钟后冲干，干燥。滴上1滴香柏油，油镜观察是否有真菌、细菌感染，也可见管型及各种细胞。六、 皮肤病检验：（一） 需要试剂与器械：瑞吉氏染色液、剪毛剪、10%的甘油、生理盐水、刀片、酒精灯、磺胺结晶粉、载玻片、盖玻片、蒸馏水、缓冲液。（二） 采集病料要点：先剪掉病变及病变周围的毛，刀片用酒精消毒，蘸上甘油或生理盐水后，选择患病皮肤与健康皮肤交界处进行刮取皮屑，直到皮肤殷血，蠕形螨由于寄生皮脂腺和毛囊内，所以，用力挤压患部，挤出皮脂腺的分泌物可提高蠕形螨的检出率，若有脓汁将脓汁一同置于载玻片上，共取2张，一张做螨虫检验，一张做染片镜检，同血染片法，注意：一般采取腋下，股内侧病料。（三） 螨虫检验：将刮取的病料，置于载玻片上，加一滴清水或一滴10%的甘油。盖上盖玻片，使病料展开。用10倍镜观察虫体或