以尿素为唯一氮源的土壤微生物的分离培养与数量测定2_第1页
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文档简介

第二节:分离特定的微生物并测定其数量实验部分一、边做边学CO(NH2)2脲酶+CO2NH3+H2O1.培养基选择分解尿素的微生物的原理培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基:①从物理性质看此培养基属于哪类?从功能上属于哪类培养基?固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源?碳源:葡萄糖、尿素氮源:尿素选择培养基二.实验的具体操作

㈠土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。㈡制备培养基:制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁进行◆分离不同的微生物采用不同的稀释度原因:不同微生物在土壤中含量不同目的:保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板[三]样品的稀释㈣取样涂布◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数,如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大,表明试验不精确,需要重新实验。㈤微生物的培养与观察在菌落计数时,每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌:30~37℃培养1~2d放线菌:25~28℃培养5~7d霉菌:25~28℃的温度下培养3~4d。1.显微镜直接计数:P21利用血球计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。㈡统计菌落数目:2.间接计数法(活菌计数法)(1)常用方法:每克样品中的菌落数=(C÷V)×M其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml),M代表稀释倍数。

当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板

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