微生物棉签擦拭取样方法验证方案

微生物棉签擦拭取样方法验证方案主题内容本方案规定了微生物棉签擦拭取样验证的目的、原理、标准及内容。适用范围本方案适用微生物棉签擦拭法取样。责任人质量部现场监控员：负责棉签擦拭取样方法验证方案的起草及实施。质量部QC：负责按计划完成相关检验任务，确保检验结论正确可靠。质量部QA：负责监督验证实施的全过程。验证管理员：协助验证方案的起草，组织协调验证工作，并总结验证结果，出具验证报告。质量管理部部长：负责验证方案及验证报告的审核。质量授权人：负责验证方案及验证报告的批准。组长：质量管理部部长验证小组成员：QA主管QC主管微生物限度检验员现场监控员内容4.1概述制药企业生产设备、生产场所、用具等需要清洁，清洁后残留物限度经检验应符合要求。检验残留物限度的方法有两种：一是最终淋洗水取样；二是擦拭取样。擦拭取样优点是能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性的最难清洁部位的残留物限度评价生产设备的清洁状况。但取样方法需验证其可行性。因此需通过取样方法验证确定清洁方法的有效性。能消除药品交叉污染及微生物污染。4.2验证目的通过对清洗消毒后微生物取样方法的回收率实验，评价取样方法的有效性、代表性和科学性，并为证明清洁方法有效性提供基本依据。4.3验证原理通过物理的擦拭对那些已经干燥的残留物取样。通过选择适当的擦拭溶剂、擦拭工具和擦拭方法，可将清洗过程中未溶解的，已“干结”在设备表面或溶解度很小的物质擦拭下来。检验结果能直接反映出个取样点的清洁状况。4.4清洁方法执行《XX机清洁SOP》、《房间清洁SOP》。4.5验证方法 4.5.1.试验器具包括不锈钢载片（规格50mm×50mm）、培养皿Ф90mm、医用棉签，以上器具均需要经过121℃4.5.1.1.金黄色葡萄球菌菌液的制备接种金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃4.5.1.2.白色念珠菌菌液的制备接种白色念珠菌［CMCC(F)98001］新鲜培养物至改良马丁或改良马丁琼脂培养基中，23-28℃4.5.1.3.染菌不锈钢载片制备·载片脱脂处理：载片放在含肥皂的水中煮沸30分钟，以纯化水洗净；用纯化水煮沸10分钟；用纯化水漂洗至PH中性晾干备用。·菌液滴染将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、白色念珠菌含菌量为50-100CFU的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置洁净工作台晾干备用。每种菌平行制备2个染菌不锈钢载片。4.5.1.4.擦拭取样·取无菌医用棉签2支，用0.9%无菌氯化钠溶液润湿后，在锥形瓶上挤压除去多余的溶液。将其中1支棉签头按在染菌载片上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面，擦拭路线按下图所示，擦拭过程应覆盖整个表面。另取1支棉签再次对该不锈钢载片表面擦拭，擦拭路线和上次擦拭路线垂直。擦拭完后，用无菌手术刀把棉签的头部（棉花部位）剪断，投入装有50ml0.9%无菌氯化钠溶液的锥形瓶中，密闭。共制备12份检品。·取适宜稀释的菌液0.1ml（约50-100CFU）分别注入平皿中，立即倾入冷却至45℃4.5.1.5.检验将装有样品的锥形瓶反复振摇，使面前上的微生物释放到溶液中。取样品溶液50ml薄膜过滤，取出滤膜，菌面朝上，贴于培养基上。金黄色葡萄球菌用营养琼脂培养基，白色念珠菌用改良马丁琼脂培养基。4.5.1.6培养及计数检验结束后，将细菌平皿倒置于30-35℃培养箱培养3天，霉菌平皿倒置于23-28养5天，计数。4.5.2可接受标准：阴性对照应无菌生长，总回收率不低于70%，RSD≤4.6检验结果：见检验记录。4.7验证次数：进行三次验证。5．结论与评价验证小组根据验证情况对验证结果进行综合评审，做出验证结论，由质量受权人作出是否批准的决定及负责发放验证证书。对验证结果评审应包括：验证试验是否有遗漏？验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？验证记录是否完整？验证试验结果是否符合标准要求？是否需要进一步补充试验？综合验证的结果，判定取样方法的有效性。6．再验证：有以下情况需要进行再验证。6.1到了规定的再验证周期。6.2若取样方法有变化应进行再验证。6.4洁净区环境包括温、湿度有重大变化应进行再验证。7．附表7.1表一取样检验记录可接受标准总回收率不低于70%，RSD≤20%金黄色葡萄球菌检验白色念珠菌检验阳性菌阴性菌1号样2号样3号样4号样5号样RSD/检验人阳性菌阴性菌1号样2号样3号样4号样5号样RSD/检验人第一次第二次第三次总回收率结论复核人：日期：7.2表二验证结论与评价验证结论评价验证试验是否有遗漏有□无□遗漏部分：验证实施过程中对验证方案有无修改有□无□修改部分：验证方案修改原因验证方案修改依据验证方案修改是否经过批准是□否□验证记录是否完整是□否□是否需要进一步补充