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文档简介

诱变育种流程及紫外诱变育种的具体步骤-标准化文件公布号：〔9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII3诱变育种的一般步骤：首先是自然菌种的选育：调查争论及查阅充分的资料↓设计试验方案↓确定采集样品的生态环境采样↓确定特定的增殖条件增殖培育确定特别的选择培育基及可能的定性或半定量快速检出法平板分别↓原种斜面↓确定发酵培育根底条件筛选↓初筛〔11瓶〕↓复筛〔13～5瓶〕↓结合初步工艺条件摸索再复筛〔13～5瓶〕↓3～5株↓单株纯种分别生产性能试验→毒性试验菌种鉴定诱变菌种：动身菌株动身菌株----菌种纯化(动身菌株性能测定)----制备斜面孢子 制备单孢子悬液(悬液进展活菌计数) 诱变剂处理(存活菌数的测定并计算存活率)----平板分别(测定变异率备单孢子悬液(悬液进展活菌计数) 诱变剂处理(存活菌数的测定并计算存活率)----平板分别(测定变异率) 挑取变异菌落并移植至斜面上----初筛(初筛数据分析，生产性状的粗测)----斜面传代 复筛(复筛数据分析，准确测定生产性状)----变异菌株(菌株参数分析) 小型或中型投产试验 大型投产试验。诱变育种应把握的主要原则有以下几点：1)选择简便有效的诱变剂。在选用理化因素作诱变剂时，在同样效果下，应选用最简便的因素；在同样简便的条件下，应选用最高效的因素。2)选择优良的动身菌株。最好承受生产上已发生自变的菌株，选用对诱变剂敏感的菌株，选取有利于进一步争论或应用性状的菌株。4)处理单细胞或孢子悬液。单细胞悬液应均匀而分散，孢子、芽孢等应稍加萌发。5)选用适宜的诱变剂量。一般正变较多消灭在低剂量中，负变较多地消灭在高剂量中。6)选用高效的筛选方法。紫外线诱变育种：15W紫外线杀菌灯，波长为253-265nm30cm，照耀时间依菌种而异，一般为几秒至几格外钟。一般我们常以细胞的死亡率表示，期望照耀的剂70～80%为宜。106个/ml左右，霉菌孢子和酵106～107/ml。由于紫外线穿透力不强，要求照耀液不0.5～1.0cm厚，同时要用电磁搅拌器或手工进展搅拌，使照耀均匀。由于紫外线照耀后有光复活效应，所以照耀时和照耀后的处理应在红灯下进展。具体操作步骤3000r／min5min，倾去上清液，将菌体打散参加无菌生理盐水再离心洗涤。将菌悬液放入一已灭菌的，装有玻璃珠的三角瓶内用手摇动，以打散菌体。将菌液倒入有定性滤纸的漏斗内过滤，单细胞滤108个／ml左右，作为待处理菌悬液。2～4mL9cm培育皿内，放入一无菌磁力搅拌子，然后置磁力搅拌器上、15W30cm处。在正10min，让紫外灯预热，然后开启皿盖正式在搅拌下照耀10～50s。操作均应在红灯下进展，或用黑纸包住，避开白炽光。0.5ml进展稀释分别，计数活菌细胞数。2ml

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