医院制剂质量标准起草说明模版

#根据三批样品pH值测定的结果，暂定样品的pH值为3.62相对密度照《中华人民共和国典典》2010年版二部附录叫A相对密度测定法，三批样品测定结果见表露衣2和洌密度测定结果批号111212111214111215相对密度1.051.05LQ5根驷-：批样品相对密度测定的结果，W定样品的相对空度为不低于1.亮＜■353装量差异照《中华人民共利国的典》2010年版—部附录XF［最低装量检查法】检查,绍果见表表1装量差异检杳鼬果批号随机抽取3瓶(ml)平均装量(ml)装量限度《加)111212154 152 153153]112H153 153 154153符令1H2I5153 152 [52152技法量150rM现定.三批样品检直结果均符合规定口3.6.4微生物限度方法验证材料与依据1供试品：参榆灌肠液规格：XXX生产企业：江苏省XXX医院批号:111212111214111215培养基：.营养琼脂培养基 批号：110512厂家：XXX

2．玫瑰红钠琼脂培养基2．玫瑰红钠琼脂培养基3．营养肉汤培养基4．胆盐乳糖培养基5.MUG培养基批号：1105172厂家：XXX批号：110126厂家：XXX批号：110408厂家：XXX批号：110203厂家：XXX稀释剂:pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液500ml/瓶,批号：2011032801（如缓冲液为市场购买，需写明生产企业）菌种：菌种名称编号来源传代次数大肠埃希菌(Escherichiacoli)CMCC(B)44102南京市药检所第3代金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26003南京市药检所第3代铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CMCC(B)10104南京市药检所第3代枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CMCC(B)63501南京市药检所第3代白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC(F)98001南京市药检所第3代黑曲霉(Aspergillusniger)CMCC(F)98003南京市药检所第3代验证依据：《中国药典》2010年版二部附录XIJ微生物限度检查法方法验证。3.6.4.2验证实验操作根据《中国药典》2010年版二部附录微生物限度检查法方法，采用常规法（如常规法回收率未达70%，需采用培养基稀释法重新进行验证；如培养基稀释法回收率仍未达70%，可采用薄膜过滤法再次进行验证）对细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。控制菌检查方法采用常规法（若阳性未生长采用培养基稀释法或薄膜过滤法），从而建立该样品的微生物限度检查方法。菌液制备方法：.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，置350C培养24小时，分别取上述培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释制成每1ml含菌数为50〜100cfu的菌悬液。.接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置250C培养48小时，取上述培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释制成每1ml含菌数为50〜100cfu的菌悬液。.接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，置250C培养7天，加入5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，并吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠制成每1ml含孢子数为50〜100cfu的孢子悬液。3.6.4.2.2供试液制备：取供试品10ml,力口pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml，混均，作为1：10供试液。菌落计数方法的验证平皿法：(常规法)①试验组：取1：10供试液1ml,分别加入10个平皿中，再依次加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌的菌悬液1ml(含50〜100cfu),每株菌平行制备2个平皿，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。②菌液组：分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内，每个菌平行制备2个平皿,测定所加的试验菌数。③供试品对照组：取1：10供试液1ml分别注入4个平皿中，立刻注入营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基制备2个平皿，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。以测定供试品的本底菌数。上述方法平行实验3次④结果见表1表1.参榆灌肠液细菌.霉菌和酵母菌回收率的测定(平皿法)菌种类型试验试验组菌液组供试品回收率(％)次数对照组试验组

大肠埃希菌14749095.9265620100361560100金黄色葡萄球菌13633010024445097.8345410100枯草芽孢杆菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.522731087.132829096.6试验组菌回收率(%);试验组平均菌落数一供试品对照组的平均菌落数100y菌液组的平均菌落数 *°由表1可见参榆灌肠液用平皿菌落计数法，三次平行试验大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都达到了70%，说明常规平皿法用于参榆灌肠液计数结果是准确的。备注：如采用常规平皿法菌落回收率都达到70%，则细菌、霉菌和酵母菌的计数方法验证即可完成但，如常规法一种或几种菌回收率三次均低于70%，需采用培养基稀释法重新进行试验，具体操作如下：若细菌回收率低于70%则细菌数计数采用培养基稀释法，霉菌回收率低于70%则霉菌酵母菌计数采用培养基稀释法，二者均低于70%则同时采用培养基稀释法验。证资料中需体现常规法及培养基稀释法两种验证方法及结果。平皿法：（培养基稀释法）①试验组：取1：10供试液0.2ml及各试验用菌液1ml分别注入平皿中，每种试验菌平行制备10个平皿，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，细菌350C培养48小时，霉菌及酵母菌250C培养72小时。②菌液组：分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内，每个菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。③供试品对照组：取1：10供试液0.2ml分别注入20个平皿中，立刻倾注营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基制备10个平皿，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。以测定供试品的本底菌数。上述方法平行实验3次④结果见表2表2.参榆灌肠液细菌.霉菌和酵母菌回收率的测定（培养基稀释法）菌种类型试验次数试验组菌液组供试品对照组回收率（%）试验组大肠埃希菌14749095.9265620100361560100金黄色葡萄球菌13633010024445097.8345410100枯草芽孢杆菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.522731087.13 28 29 0 96.6试验组菌回收率（%）;试验组平均菌落数一供试品对照组的平均菌落数100%菌液组的平均菌落数 * 0由表2可见参榆灌肠液用培养基稀释法，三次平行试验大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都达到了70%，说明培养基稀释法用于参榆灌肠液计数结果是准确的。备注：如培养基稀释法回收率仍低于70%，采用薄膜过滤法再次进行试验。验证资料中需体现常规法、培养基稀释法及薄膜过滤法三种验证方法及结果。具体操作如下：薄膜过滤法：供试液制备：取1：10供试液10ml放入离心管中，将离心管放入离心机，500转/min离心3分钟，取上清液。（注：仅细菌计数可用低速离心，霉菌及酵母菌计数不可采用。）①试验组：取1：10上述供试液1ml加pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液100ml稀释过滤，用400ml（备注：具体用量依样品抑菌作用强弱而定，在试验中需设计不同的冲洗量进行冲洗根，据回收率的情况选择不同的冲洗量）pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每次100ml，在最后一次冲洗液中分别加入试验用菌液1ml，过滤后无菌方法取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂或玫瑰红钠琼脂平板上，细菌350C培养48小时，霉菌及酵母菌250C培养72小时。②菌液组：分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内，每个菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。③供试品对照组：取1：10供试液1ml采用上述薄膜过滤法冲洗过滤，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。以测定供试品的本底菌数。上述方法平行实验3次④结果见表3表3.参榆灌肠液细菌.霉菌和酵母菌回收率的测定（薄膜过滤法）菌种类型试验试验组菌液组供试品回收率

次数对照组试验组大肠埃希国14749095.9265620100361560100金黄色葡萄球菌13633010024445097.8345410100枯草芽孢杆菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.522731087.132829096.6试验组菌回收率(%);试验组平均菌落数一供试品对照组的平均菌落数1%菌液组的平均菌落数 * 0由表3可见参榆灌肠液用薄膜过滤法，三次平行试验大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都达到了70%，说明薄膜过滤法用于参榆灌肠液计数结果是准确的。控制菌(大肠埃希菌)检查方法的验证直接接种法(1)试验组：取1：10的供试液10ml,接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入49cfu大肠埃希菌,350C培养24小时，可见培养基混浊，有气体产生。取上述培养物0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、24小时，在366nm紫外线下观察，可见荧光反应，滴加靛基质试液，液面呈玫瑰红色(2)阴性菌对照组：取1：10的供试液10ml,接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入33cfu金黄色葡萄球菌,350C培养24小时，培养基无混浊与气体产生。取上述培养液0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、24小时，在366nm紫外线下观察，无荧光反应，滴加靛基质试液，液面均呈试剂本色。上述方法试验组检出了大肠埃希菌，阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌。说明用100ml胆盐乳糖增菌培养基可以进行参榆灌肠液大肠埃希菌检查。备注：试验中若100ml阳性对照未生长，则加大胆盐乳糖增菌培养基用量，分别作200ml、300ml，方法同以上方法。薄膜过滤法若直接接种法加大培养基用量阳性对照仍无法检出，则采用薄膜过滤法：（1）试验组：取1：10的供试液10ml，用离心机低速离心500r/min离心3分钟，取上清液定容至10ml，加入pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液稀释至100ml薄膜过滤，用400ml（备注：具体用量依样品抑菌作用强弱而定，在试验中需设计不同的冲洗量进行冲洗根，据回收率的情况选择不同的冲洗量）pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每次100ml，过滤后无菌方法取出滤膜，接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入49cfu大肠埃希菌,350C培养24小时,可见培养基混浊,有气体产生。取上述培养物0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、24小时，在366nm紫外线下观察，可见荧光反应，滴加靛基质试液，液面呈玫瑰红色.（2）阴性菌对照组：取1：10的供试液10ml，用离心机低速离心500r/min离心3分钟，取上清液定容至10ml,加入pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液稀释至100ml薄膜过滤，用400ml（注：具体用量依样品抑菌作用强弱而定）pH7.0的无菌氯化钠蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每次100ml，过滤后无菌方法取出滤膜，接种至100ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入33cfu金黄色葡萄球菌,350C培养24小时，培养基无混浊与气体产生。取上述培养液0.2ml接种至5mlMUG培养基的试管内，培养5小时、24小时，在366nm紫外线下观察，无荧光反应，滴加靛基质试液，液面均呈试剂本色。上述方法试验组检出了大肠埃希菌，阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌，说明用100ml胆盐乳糖增菌培养基可以进行参榆灌肠液大肠埃希菌检查。备注：如制剂中含生药，需增加大肠菌群检查验证试验;如制剂中含动物药，需增加沙门菌检查验证方法如制剂为外用药，需增加金黄色葡萄球菌、铜绿杆菌检查验证方法,每个品种具体要求见《中国药典》2010年版附录。其他控制菌检查常规法、培养基稀释法、薄膜过滤法方法同上述大肠埃希菌检查方候使用相应增菌及分离培养基。如金黄色葡萄球菌使用营养肉汤增邮露醇氯化钠琼脂分离等。结论：参榆灌肠液按《中国药典》2010年版二部附录微生物限度检查法方法验证试验:取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠蛋白冻缓冲液至100ml,混匀，作为1：10供试液。细菌、霉菌及酵母菌数测定：可用常规平皿法（或培养基稀释法、薄膜过滤法）；大肠埃希菌检查可用100ml胆盐乳糖增菌培养基进行增菌培养（或其他量的培养基、薄膜过滤法），依法检查。金黄色葡萄球菌采用。。。。。。。。依法检查，铜绿假单胞菌采用。。。。。。。。。依法检查。（备注：上文中黑体斜体部分文字仅为验证过程中指导之用）工6.4.5参榆震肠海的微生物限度检查方法供试液的制备；吸取供试品lOmh加pH无菌氯化铀-蛋白陈缓冲液至100mL振相均匀，作为1:10供试液：取上述供试液1ml加入pH7内无菌氯化钠■蛋R脓线冲液9ml,制得1：加供试液，备用「工645」细菌、震菌及酷母菌骨数（I）细菌数法数①样品细菌数测定：分别吸取样品1：10的供试液1mL分别10个无菌平01中.跳每个平MO.lmh平行试脸一份.立即倾注［温度不超过45c自养琼脂培养猾，混匀.凝固一列卜35七倒置培养4&小时.比数.1。个平皿中的细菌数之和即为每时供试液中细菌数口②阴性对照！取pH7。无菌就化钠•张口陈线冲淞1mL置无痢平鹏中，邛打制备2个平板,立即倾注15〜20ml温度不超过45c营养琼脂培养基，混匀，凝固,3O-3TC倒置培养48小时,不得有菌生长.⑵毒南及醉母菌计数：①样品霉菌及醇母菌-计数测定：分别吸取样品I：io的供试淞IH，分别⑷个无菌rm中，每个平JBL0」ml,平行试旧:价，立即惭注I舁20而温度不超过45D玫瑰红纳琮脂培养生，混匀，凝固，25-28C倒置培养48小时.计数，！0个平皿中的鲫菌数之和即为将ml供试液中霉菌数.②阴性对照：取pH7.0无南氮化钠•蛋白I陈缓冲液1ml+置无菌平皿中,平行制备2个平板，①即颖注】5心0巾1温度不超过45C玫瑰红便琼喈培养基,混句.凝固.2421C倒置培养72小时，不得有菌生氏。3.6,4.52控制菌检查（I）样品大肠埃希施检作取1：10供试液10mL加入100ml胆林乳城培养城中，经35r37t培养M小时后，若有菌生长,再进行MUG和靛基质试验，以确定是否染菌.阴性对照：取pH7.Q无菌氧化钠-蛋白陈生冲液10mL加入100nli胆盐乳糖培养基中,经35-37C培养24小时*不得有菌生长。（2）样品金黄色匍陶建的投企设1:10供试液10mL加入】00向营养肉断培养基中，经35一第二培养加小时后，若有菌生长,再进行分离培养和甘露解高盐试验,以确定是否染菌。阴性对隔取闭7.0无菌索化钠■强白脓缓冲液10ml,加入100m1营养肉血培养基中,经3637七培养24小时。不得有菌生长.0）样品铜绿桎单胞菌检查取1:10供试液10而，加入代山川胆酸乳削培养基中，经3577七培养加小时后，若有前生长,再进行分离培养和42C生长忒胶，以确定是否染菌.阴性对照：取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胺援冲液10ml,加入100ml胆盐乳糖培养基中，经年77七培养24小时.不得有菌生长.按照中国典典20J0年版一部附录X1IJC微生物限度检查法拴查，锤ml为物中细的数应刍00个替霉菌,酵母菌数应WOO/g,不得检出大隔埃君菌、金黄色制菊球的・铜绿假单胞菌.3.6.5三批中试产品微生物限度检餐结果按《中华人民共和国药典》2oio年版一部附录xinc微生物限度检查法要求，结合验证试胎.结论，依法对参榆濯肠液进行微生物眼度检向，结果见表15。友15参榆港肠泄微生物限度检在结果表检查菌批号1112121H214111215细菌总数<10<10<10酵母氟<10<]0<10霉菌总数金如色匍窗球健农检出未检出未检出大肠埃希前未检出未检出未检出铜绿假单胞菌未检出未检出未检出活端未检出未检出未检出检查结果表明，一批样品微生物虫度均符合规定.3.7含量测定工工1冽定对象及成分的选择参检濯肠液由黄柏、石菖薄、苦蓼、地榆等七味中药组成，具有祛湿泻火、止血生肌、敛疮救疡之功效.用r久痢，腹痛，眼泻，枯液脓血使，里急后垂。方中黄柏是君剑.黄柏中的生物碱类成分具有广泛的药理作用，包括抗菌、抗真菌、镇咳、降用、抗滴虫、抗肝炎、增强免疫功能、抗溃疡作用等，面就酸小第碱又是其主要二成分。因此，本试验选择靛酸小聚碱作为指标性成分，用高效液相色谱法测定其含域,原控制制剂盘量.保证临床疗效.试验结果表明，HPLC灵敏度高，重注性好，测定结果准确,可用于参输灌肠液中林酸小桀戚的含汝测定，3.7.2含葩测定仪器与试药AgilentUM高效高相色相仪,四元蕤⑹乳】4—温箱（G13I6A）,VWD捡剌器CGISMAJj匚作站（Chtmststicn）□盐酸小麋碱对照品（批号i107i3-20020S,含吊测定用.斶自中国前品生物制品检定所另1门0万塔子分子天平（B冉21ID型,德国Sarto「皿”ASB22（M）型超声波清洗器（犬津奥杼赛恩斯仪器公司上参榆谶胸糠【批号1112】露1】口U-t5k水为超纯水，乙精、中醉为色帮姓.其余化学试剂为分析纯.37,2,2方法与结果照《中华人民共和国药典》的10年版二部高效液相测定法〔附录VD）测定。对照品溶液的制备取盐酸小聚频对照品适时।精密称定，加甲醉溶解制成彘所|含2石」的溶液.供试品溶液的制备精密吸取本品2m上置5。川量瓶中，加流动和超声处理（功率250W.频率白网也）20分钟，放冷，用流动相稀释年刻度，摇郁然过，取续滤液作为供试品溶液,同法制备阴性供试品溶液。3,7.2.23色谱条件与系统适应性试验色谱柱;HederaOPS2C|SU（250^.6mtn，5^™）；以乙骊-0.1%礴酸溶液£50:5。）【班10（hnl加十二烷基碱酸钠0.1g）为流动相：拉好波长为265nmi柱温：30C；流速：LOmhnin%分别精密吸取微酸小维碱对照品溶液，供成品溶液及阳性供试品溶液各10川，注入哥效液相色谱仪中r测定，供试拙与对照品在相同的位理有较大吸收.阴性对照无干扰。色谱柱的理论板数按盐酸小麋碱桂计算不低于4000,分离度大于L5。3.7.21.4线性关系考察取上述对照相溶液，用甲醉分别稀林至1229、51.仇30.5、15,25、7.625、3舟］251gm产,分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液】%1,注入高效液相色谱仪中测定。经线■性问得插酸小栗碱回归方程产45一6以+4.424%尸0.驷99.秋酸小堞碱在工8125—122.如g-mW范围内，与峰而枳的积分值早.良好的线性关系.结果如图7.图7盐酸小聚轼标准曲线3.7.225精密度试验粕密吸取同一对照品溶液1。H，注入高效液相色谱仪，双复进样6次.测定,以蜂面积枳分值计算，RS口为0.15%,松果见表】6・衣16精密度试验结果表No.12 3456ARSD(%)I110J1106.7 1110.70J51103.2110631107.43.7,226重夔性试验精密吸取同一批号(111214)的本品2mL共6份，按为722炉项下处理方法制品供试品溶液。分别粘密吸取供试品溶液1m也注入高效液相色谱仪中,测定.以触底小槃破含最计兑,Rg口为L61%,给果见表表17重免性试验结果表Nu, 12 3 4 5 6含量(mg/ml)1.004 L026 1054 1.008 1.017L0I7RSD(%) 1.613.7,2.27稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，于0.2、4.6.8,12h分别进样，测定色谱峰面积，RED为809%,说明本拈在门甘内稳定，结果她表1口表18稳定性试验结果走时间Ch)0246812AIS11.61807.618H.81812,71810.418098RSD(%)0.093722g加样回收率试验精密吸取已知合量的参榆濯粉液样品(11】214>1ml,共6份，分别加入盐酸小聚碱对照品，按，区7.222"项卜一方法制备供试品溶液，进样，测定,计算，^果见表】表19盐酸小桀碱加样回收试验结果表取样量(ml)样品中含陆盐酸小壁赚