鸡大肠杆菌病的诊断及防治

第1章前言鸡大肠杆菌病(Avian?Colibacillosis)是由埃希氏大肠杆菌(Escherichiacoli)引起的细菌性传染病。由于大肠杆菌普遍存在于自然界和动物肠道中，属条件性致病菌，当机体抵抗力下降，特别是应激情况下细菌的致病性即可表现出来，使感染的鸡发病，本病常为某些传染病的并发病或继发病，因而临诊表现形式十分复杂多样。本病在畜牧生产中发生广泛，也较难防治，是目前养鸡业中常见、多发、死亡率高、危害极大的一种疾病。特别是近年来，随着畜禽养殖小区的不断建设，规模化、集约化养鸡业的蓬勃发展，因为鸡的大肠杆菌病不断蔓延，发病率持续上升，从而导致鸡只的死亡、种鸡及蛋鸡的产蛋率下降、种蛋孵化率降低、鸡只生长发育受阻、肉和蛋品质下降、治疗费用增加等，给规模化、集约化养鸡生产造成了严重的经济损失，其对养禽业发展构成的威胁极大，成为养鸡生产中最主要的疫病之一。因此，采取有效措施防治鸡大肠杆菌病，减少损失，是集约化养鸡业迫切需要解决的重要问题。本次试验无菌采取疑似大肠杆菌病的病、死鸡的心血、肝、脾、肾，进行病原菌的分离、生化鉴定和药敏试验。生化鉴定结果显示引起试验鸡只发病的病原为大肠杆菌，药物敏感性试验结果显示，我地区大肠杆菌对硫酸安普霉素、阿米克星敏感，曾经对致病性大肠杆菌敏感的药物出现了不敏感和不同程度的耐药，提示在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素，在使用药物治疗大肠杆菌病时，要充分利用药敏试验，为鸡大肠杆菌病的防治提供科学的理论依据，大肠杆菌是条件性致病菌，防制该病的关键在于加强饲养管理，做好各个环节的卫生消毒，落实好卫生防疫措施，减少各种诱发因素。【病原】大肠埃希氏杆菌(Escherichia?coli)为革兰氏阴性的短小杆菌，不形成芽胞，有的有荚膜，大小为2~35X0.65,—般有周鞭毛，大多数菌株具有运动性。郝永清(1996)应用透射电镜观察到⑴，致病性大肠埃希氏菌在体外适宜条件下培养可产生菌毛，而非致病性菌株未见菌毛产生。致病菌具有菌毛及不同的血凝活性。不同地区有不同的血清型，同一地区不同鸡场有不同血清型，甚至同一鸡场同一鸡群可以同时存在多个血清型，在家禽中常见的主要血清型有O1、O2、O36和O78等血清型⑵。近年研究结果表明，目前我国已报道的鸡的致病性大肠埃希氏杆菌血清型50多个。大肠埃希氏杆菌在自然界中分布极广，可以说凡是有哺乳类动物和禽类活动的环境，其空气、水源和土壤中均有本菌存在的可能。大肠埃希氏杆菌对外界环境因素的抵抗力属中等，对物理和化学因素较敏感，55°Clh或60C20min被杀死，120C高温消毒立即死亡。在畜禽舍内，大肠杆菌在水、粪便和尘埃中可存活数周或数月之久。本菌对石炭酸和甲酚高度敏感，但粘液和粪便的存在会降低这些消毒剂的效果。【流行病学】本病一年四季均可发生，尤以冬季及夏季多发。常与慢性呼吸道病，新城疫病，法氏囊，传染性支气管炎，马立克，支原体，沙门氏菌，传然性鼻炎，球虫，腹水综合症等混合感染。但与饲养管理水平，环境卫生，防治措施的效果，应激等因素密切相关。发病日龄一般幼雏和中雏发生较多。发病较早的为4日龄、7日龄和9~10日龄，通常以1月龄前后的幼鸡发病为多，日龄较大的鸡因不同原因也会发生本病。发病率和死亡率较高。虽然因血清型及菌株的毒力、有无并发或继发病、采取措施是否及时有效而差异颇大，但调查表明，该病发病急;发病率为11%〜69%；死亡率为3.8%〜72.9%；致死率为40.2%〜90.3%。病程因日龄、饲养管理水平、环境卫生、防治措施的效果及有无继发其它疫病等因素的影响2-7d不等，雏鸡一般发现拉稀粪1—2天死亡，大鸡病程稍长。病鸡和带菌鸡是主要的传染源，病原通过传染的蛋壳，病鸡的分泌物便被污染的饲料饮水食具垫料及粉尘而传播，鼠是本病的携带者。传播途径主要有：①消化道：饲料和饮水为本菌污染，尤以水源被污染引起发病最为常见；②呼吸道：沾有本菌的尘埃被易感鸡只吸入，进入下呼吸道后侵入血流而引起;③蛋壳穿透种蛋产出后为粪便等脏物沾污，在蛋温降至环境温度的过程中，蛋壳表面污染的大肠杆菌很容易穿透蛋壳进入蛋内，这种种蛋常于孵化后期引起死胚，或刚孵出的小鸡即发生本病；④交配：患本病的公、母鸡与易感鸡交配可以传播本病；⑤经蛋传播：患有大肠杆菌性输卵管炎的母鸡，在蛋的形成过程中本菌即可进入蛋内，造成本病经蛋垂直传播。【临床症状及病变】鸡大肠杆菌没有特征的临床表现，根据症状和病变可能分为多种病型：大肠杆菌败血症，脐炎，肝周炎，气囊炎，大肠杆菌性肉芽肿，关节炎，卵黄性腹膜炎，输卵管炎，全眼炎，脑炎，肠炎。但以大肠杆菌败血症，气囊炎，脐炎，卵黄性腹膜炎为多见。其他类型较少发生，共同症状为病鸡精神萎靡，缩头闭眼，饮水增多，采食减少，羽毛粗乱消瘦，侵害呼吸道后出现呼吸困难粘膜发绀；侵害消化道后出现腹泻，排绿白色或黄绿色性稀粪便，侵害关节后表现为跗关节肿大，在关节的附近有大小不一的水泡和脓疮，病鸡跛行；侵害眼时，眼前房积脓有黄白色的渗出物，眼睑肿胀，甚至失明，出现神经症状，头颈震颤仰头，扭头，陆续出现死亡。败血症型：5-9周龄肉鸡常发此病，夏季多发，病雏呼吸困难，精神不振，下痢粪便呈白色或黄绿色食欲减退或拒食腹部胀满。解剖时可闻到特殊臭味腹腔内大块黄色块状渗出物，肝脏肿大，呈紫红色或铜绿色，表面有散在的白色小坏死灶，纤维性心包炎，心包浑浊增厚，心包腔内充满大量淡黄色液体，心包膜及心外膜上白色纤维蛋白附着，严重者可见心包膜与心外膜粘连，肠粘膜弥漫性出血，整个肠管呈紫红色，肾脏体积肿大，呈紫红色肾脏出血，水肿，死亡率一般为5%-20%。脐炎：俗称“大肚脐”，主要发生在出壳初期，病雏脐孔红肿并常有破溃，后腹涨大，呈红色或青紫色，精神沉郁少食或拒食，粪便呈黄白色，稀薄，腥臭，病雏1-2内死亡或被淘汰。剖检脐孔开张，卵黄吸收不良，或卵黄没有吸收，卵囊充血出血，囊内卵黄液黏稠或稀薄多呈黄绿色。肝周炎：肝脏肿大，有时可见散在的淡黄色坏死灶，肝包膜略有增厚，与霉形体混合感染的病鸡，多见肝脏肿大，肝包膜增厚，不透明呈黄白色，易剥脱，在肝的表面形成的这种纤维素性膜局部发生，，严重的整个肝被此膜包裹，此膜易剥落后肝呈紫褐色。气囊炎：主要发生于4-12周龄的雏鸡，但6-8周龄发病率最高，本病通常是大肠杆菌和其他病原微生物例如霉形体，传染性支气管炎，新城疫，混合感染所致。死亡主要发生在发病的头几天，如果耐过最初的感染，可迅速康复，但少数持续丧失食欲的病鸡消瘦，最后死亡。气囊炎也是常见的转化腹膜炎等病之一，其表现为气囊浑浊、囊壁增厚呈灰黄色囊腔内又数量不等的黄色纤维性渗出物或干酪样物，更为严重者可见腹气囊肌肉层内形成包腔内可大量黄白色块状渗出物。肉芽肿：较少看到主要侵害雏鸡或成年鸡，以小肠，盲肠浆膜肠系膜可见到肉芽肿结节，肠粘连不易分离，心、肝脏面发现大小不一的肉芽肿结节。镜检：结节中央为大量核碎裂的坏死区，其外环绕上皮样细胞带，多核巨细胞少见，最外层为纤维组织包裹，其间有异嗜性粒细胞侵润。关节炎型：多见于幼稚感染后慢性经过，可见跗关节和趾关节肿大，跛行，两腿向外展，关节附近有大小不一的水泡，穿刺后，可见黄色浑浊液体向外流出，关节腔中纤维蛋白渗出，浑浊的关节囊滑膜肿胀增厚。卵黄性腹膜炎：较多的成年鸡可见到腹部膨大下垂，直立呈企鹅姿势，多是由卵巢，卵泡和输卵管感染发炎，进一步发展卵黄性腹膜炎，故鸡病大多数突然死亡，剖开腹腔可见，腹腔中充满大量淡黄色腥臭的液体和破溃的卵黄，腹腔表面常覆盖了一层蛋黄色凝固的块状纤维性渗出物，卵黄液广泛地布于肠道表面，稍慢死亡的鸡腹腔内又多量纤维表样物粘在肠道和肠系膜上腹膜发炎粗糙，肠粘连，大量腹水，肠浆膜散在针头大小的点状出血，卵泡中的卵泡变形，破裂呈灰色，褐色或酱色等不正常色泽。有的卵泡皱缩，滞留在腹腔中的卵泡，如果时间较长即凝固或硬块，破裂的卵黄则凝结或大小不等的碎片，输卵管粘膜发炎，针头状出血点淡黄色纤维性渗出沉着，器官腔中也有蛋白色纤维性凝片。输卵管炎：产蛋鸡常发生慢性输卵管炎，鸡冠萎缩，剖检可见输卵管高度扩张，粘膜充血，管腔内有不等量的干酪样物，严重时输卵管内积有较大块状物，输卵管变薄，块状物呈黄白色表面不光滑，切面呈轮层状较干燥有的腹腔内可见有灰白色的软壳蛋，主要表现为产蛋量不高和产蛋高峰上不去，产蛋高峰维持时间短，蛋重下降，蛋壳表面有大小不一的血点，鸡群死淘率增加。全眼炎：是急性败血症恢复期的一种症状，常为单侧，或双侧散发，眼脸肿胀，有白色干酪样渗出物，眼粘膜潮红、流泪、角膜浑浊，严重者失明，眼球萎缩，镜检：全眼都有单核性细胞浸润，脉络膜充血，视网膜完全破坏。脑炎型：雏鸡及产蛋鸡多发，脑膜充血，出血。脑实质水肿，脑膜剥离，脑壳软化，中性细胞和单核细胞浸润，脉络膜充血，视网膜完全破坏，侵害大脑时出现神经症状，表现头颈震颤，角弓反张，呈阵发性发作。肠炎型：鸡消化不良，鸡体消瘦，腹膜充血、出血，肠浆膜变厚，形成慢性肠炎，有的可形成慢性腹膜炎，病鸡表现腹泻，拉黄绿或黄白稀粪，食欲下降，消瘦。第2章试验材料与方法2.1病料来源2010年9月高密某孵化场送检的疑似大肠杆菌的病料若干，病死鸡死亡时间不超过24h。2.2采取病料病料采集。从新鲜尸体中无菌操作采样。采集心脏和肝脏.注射器自心脏采血1ml用于细菌分离培养和肉汤增殖。用烧过的外科手术刀片烧烙脏被膜后。再用灭菌棉拭子或接种3环刺入肝实质取肝样做分离培养。如出现脓性纤维素性渗出物，则用棉拭子从心包腔、气囊以及关节腔中取样做细菌分离。2.3涂片镜检无菌挑取病鸡的肝脏直接涂片，进行革兰氏染色。2.4细菌分离培养无菌采集病死鸡的心肝组织，分别接种在普通琼脂平板、麦康凯、双SS各一个，37°C恒温培养24h培养观察后。挑取表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明的单个微隆起小菌落，划线接种肉汤中，在37C恒温培养24h，三糖铁琼脂培养，将可凝菌落接种于三糖铁琼脂斜面培养基上，接种时先涂布于斜面，再刺接种于管后观察⑶。2.5生化试验取可疑菌分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37C培养2〜3d，观察结果。2.5.2吲哚试验取可疑菌接种蛋白胨水，37C培养2〜3d，加入吲噪指示剂，观察结果[4]。2.5.3MR试验和VP试验取可疑菌接种葡萄糖蛋白胨水，37C培养2〜3d，分别加AMR和VP指示剂，观察结果。2.5.4枸橼酸盐试验取可疑菌接种枸椽酸盐培养基上，37°C培养18〜24h,观察结果2.5.5硫化氢试验取可疑菌接种醋酸铅琼脂，37C培养18〜24h,观察结果。2.6药敏试验用常规纸片法进行。直接挑取已分离出的菌落3铂金耳，置于装有3〜4mL生理盐水中，制成混悬液，再用灭菌的棉花拭子沾取菌液直接涂布于新鲜普通琼脂平板上，将药物纸片均匀贴布于培养基表面，纸片间距不能小于20mm，37C培养24h，观察抑菌结果。测量药物纸片的抑菌圈直径。抑菌圈直径大于20mm者为高度敏感，抑菌圈直径16〜20mm为中度敏感，抑菌圈直径11〜15mm者为低度敏感，抑菌圈直径小于10mm者为耐药。第3章试验结果分析3.1镜检结果取标本片用油镜观察中等大小两端钝圆的革兰氏阴性杆菌，无芽胞菌株有肉芽、鞭毛和菌毛，可活泼运动。3.2细菌分离鉴定结果：经37C恒温培养24h后，形成中等大小圆形，微凸起边缘整齐直径为1-3mm表面光滑湿润，呈浅灰色，透明菌落。麦康凯琼脂平板上，多数呈现中央凹陷的粉红菌落，双SS培养基上，菌落为黑色，带金属光泽。肉汤中生长情况，分离菌中肉汤中培养24h，呈均匀浑浊三糖铁琼脂培养基，在斜面上生长，产酸产气使培养基发，穿刺培养在管底产酸产气不产生H2S:5］。3.3生化试验结果分解糖苷葡萄糖麦芽糖甘露醇产酸产气不分解蔗糖MR试验阳性，VP试验阴性，枸橼酸盐试验阴性，吲噪试验阳性，硫化氤试验阴性。此结果符合大肠杆菌的特性。3.4药敏试验结果经对选取药物所做的药敏试验，根据各种药的抑菌直径，此次分离的大肠杆菌对硫酸安普霉素、阿米克星、新霉素、庆大霉素、对环丙沙星、氟苯尼考敏感程度见表3-1。表3-1鸡大肠杆菌药敏实验结果药敏片抑菌直径敏感性硫酸安普霉素25mm高敏感阿米卡星23mm高敏感新霉素18mm中敏庆大霉素16mm中敏环丙沙星6mm耐药氟苯尼考4mm耐药药敏试验结果显示，我地区大肠杆菌对硫酸安普霉素、阿米克星高度敏感，对新霉素、庆大霉素中度敏感，对环丙沙星、氟苯尼考耐药。曾经对致病性大肠杆菌敏感的药物出现了不敏感或不同程度的耐药，提示在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素。在近十几年的肉鸡生产中，养殖户为了控制大肠杆菌及某些细菌感染，在饲料添加剂及治疗中盲目使用一些抗菌药物，导致耐药菌株越来越多并日趋严重。而且大肠杆菌可通过菌毛将其抗药性质粒传递给其他大肠杆菌，所以大肠杆菌的抗药性形成较快，环境中大肠杆菌耐药性菌株越来越多⑹。本次试验无菌采取疑似大肠杆菌病的病、死鸡的心血、肝、脾、肾，进行病原菌的分离、生化鉴定和药敏试验。生化鉴定结果显示引起试验鸡只发病的病原为大肠杆菌，药物敏感性试验结果显示，我地区大肠杆菌对硫酸安普霉素、阿米克星高度敏感，对新霉素、庆大霉素中度敏感，对环丙沙星、氟苯尼考耐药。曾经对致病性大肠杆菌敏感的药物出现了不敏感和不同程度的耐药，提示在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素，在使用药物治疗大肠杆菌病时，要充分利用药敏试验，根据药敏试验结果，选择敏感药物，为鸡大肠杆菌病的防治提供科学的理论依据，并注意交替用药，按疗程投药才能收到较好的治疗效果。[7]大肠杆菌是条件性致病菌，防制该病的关键在于加强饲养管理，做好各个环节的卫生消毒，落实卫生防疫措施，减少各种诱发因素。严格执行卫生防疫措施，创造一个良好的饲养环境⑻。有效控制容易并发和继发该病的病原是防止本病发生的有效措施。由于各地大肠杆菌的血清型，特别是优势血清型存在差异，有效而通用的菌苗尚未出现，因此筛选地区性免疫原性优良的大肠杆菌菌株制作菌苗，乃是防制鸡大肠杆菌免疫预防的基础。建议有条件的鸡场，最好采用自家灭活苗，这样效果可靠，更适用于血清型复杂的地区⑼。5.1免疫抑制因素：主要是由鸡新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、支原体的感染造成。往往会破坏呼吸道和消化道的黏膜屏障系统的完整性，致使被感染禽不同程度地出现免疫抑制等，从而为大肠杆菌的人侵打开了门户。5.2应激因素：某些应激反应可引发大肠杆菌病的发生。如接种疫苗时鸡群产生的应激反应以及免疫程序设计不当都会引起鸡群抵抗力下降或呼吸道症状，从而造成大肠杆菌感染和继发感染。5.3有害环境因素：有害的环境因素也是引起大肠杆菌感染主要原因之一。饲养管理差，环境污染严重，应激因素长期存在，都能促进该病的发生和流行。如气候突变、寒冷、闷热、通风换气不良、氨味过浓等应激因素，使鸡群抗病力减弱，大肠杆菌乘机侵入，引起机体发病。卫生条件差，粪便、污水、病死鸡等不能无害化处理，从而造成了鸡场环境污染严重，细菌、病毒大量存在。对消毒工作不重视或不严格，饲养密度过大，潮湿的环境又为大肠杆菌及其他致病性微生物的滋生创造了条件。5.4饮饲及营养状况因素：日常生产中，饲养方式、饮水等会直接影响到鸡群营养状况的好坏，日粮营养水平的高低以及不同营养成分之间的平衡状况等都是能否引发大肠杆菌感染的重要因素。如饲料营养缺乏（维生素等含量不足）、饲料霉变等，导致鸡抵抗力下降，对大肠杆菌易感性增加，引起大肠杆菌病的发生。第6章防治措施对本病的防控应坚持预防为主的原则。坚持尽早发现，尽快投药治疗的原则。6.1预防措施6.1.1加强饲养管理。对饲料进行合理搭配，保持饲料、饮水清洁，及时清除粪便等垃圾。饲养密度过大的鸡群，要适度调整，保持良好通风换气，保持适宜的温度和湿度，避免骤冷骤热，以减少各种应激等诱发因素。6.1.2加强消毒。定期对场地、器具等进行彻底消毒，注重带鸡消毒。污染严重或常发病鸡场，要根据情况适当缩短消毒间隔时间一般5-7天要进行一次彻底消毒。6.1.3疫苗接种预防。接种大肠杆菌疫苗可在一定程度上控制该病的发生，但因大肠杆菌血清型较多，其效果并不十分理想。对已发生污染的鸡场可以用本场分离的大肠杆菌菌株制作灭活菌苗进行免疫接种。6.1.4加强种蛋管理，建立健康的种鸡群。大肠杆菌可因种蛋带菌而垂直传播，因此必须做好种鸡群大肠杆菌病的净化工作。对病鸡不能留作种用，一律淘汰。另外，种蛋本身不带菌，但由于捡拾不及时或者产蛋箱卫生状况不良，使种蛋与粪便接触而受到污染。因此，孵化场还须作好对种蛋的消毒，以减少种蛋污染。在种蛋入孵前必须做好药物消毒工作。如果有条件，种蛋产出后两小时内应用药物熏蒸消毒或用0.3%的过氧乙酸进行带鸡喷雾消毒，确保种蛋有最高的孵化率和健雏率。也可以对刚出壳雏鸡在3—5日和4—6日龄分别给予2个疗程抗菌素预防。6.1.5实行全进全出制。全进全出的饲养方法是预防该病的有效方法，可有效避免不同日龄、不同批次鸡群间的交叉感染。同时鸡群尽可能采用封闭式管理，这样可减少或杜绝鸡群与大肠杆菌的污染物接触，防止本病发生。6.1.6加强饲料饮水的兽医卫生监测。饲料的采购、贮存和加工等环节要加强卫生管理，防止发霉、变质，减少大肠杆菌的污染。对水井、水塔和水箱等储水设施以及输水管道要经常清理、适时消毒，尤其要注意除去表面形成的生物膜。6.1.7药物预防具有一定意义。在饮水或饲料中按预防剂量投喂抗生素可对该病的发生起到预防作用。6.1.8有效控制其它疾病。在基层服务中发现，很多疾病导致大肠杆菌病的继发或混合感染。如鸡沙门氏菌病、霉形体病、传染性鼻炎、传染性支气管、喉气管炎、新城疫等。对于这些疾病，目前都有较好的疫苗或药物进行预防。因此应制定适合本场的防疫程序并认真实施，尽可能防止其他疾病的发生，这样也就间接的起到预防和减少了大肠杆菌病的发生。6.2治疗措施6.2.1首先要对病鸡采取必要的隔离措施并及时治疗，对急性经过的不及救治的病死鸡做好焚烧掩埋及消毒工作。6.2.2合理使用抗菌药。选择高度敏感的药物，最好的方法是通过药敏试验，选择高敏药物，克服盲目