祛风湿中药的镇痛抗炎的药理学研究

祛风湿中药的镇痛抗炎的药理学研究

中医经典著作《本草经》如下：。“风、感冒、脾胃以上。脾胃控制肌肉，受到邪的影响。气和关节封闭而致密，而寒热关节无关。它总是伴随着辛热和散寒，所以它可以驱风、感冒和其他疾病。”。”道出了辛温(热)合归脾胃经中药应该具备温经止痛、祛风寒湿痹功效之意。温里药味辛,性温(热),主归脾胃经。在国家自然科学基金资助(No.3860838,温里药温里药理研究)下实验证实,所研究的8味温里药(附子、干姜、肉桂、丁香、吴茱萸、荜澄茄、高良姜、花椒)都具有镇痛抗炎药理作用,印证了《本草经疏》的上述论断,肯定了温经止痛除痹是温里药的共同药效谱之一。以后又在国家自然科学基金资助[No.39370838,辛温(热)合归脾胃经中药药性实验研究]下将未被归划为温里药的辛温(热)合归脾胃经中药(芳香化湿药苍术、厚朴、砂仁,化痰药半夏,行气药木香)与辛温(热)非脾胃经中药、非辛温(热)脾胃经中药、非辛温(热)非脾胃经中药进行药性实验研究比较。研究结果发现这5味辛温(热)合归脾胃经中药与温里药一样都具有镇痛抗炎(急性渗出性炎症作用)之温经止痛除痹药理作用,而5味辛温(热)非脾胃经对照中药没有一味同时具有镇痛抗急性渗出性炎症作用,5味非辛温(热)归脾胃经对照中药和5味非辛温(热)非脾胃经对照中药仅各有一味(火麻仁或浙贝母)同时具有镇痛抗急性渗出性炎症作用,显示了镇痛抗炎是辛温(热)合归脾胃经中药相对特有的共同药效谱之一。本课题在陕西省科技厅自然科学基金资助(祛风湿中药药性理论的实验研究)下,将辛温(热)合归脾胃经中药新设立为第4类祛风湿中药——温经强肢肌药(根据《本草经疏》的上述论述而设)与1978年版高校统编教材《中药学》设立的3类祛风湿中药(祛风湿止痹痛药防己、秦艽、独活、寻骨风、菝葜,舒筋活络药木瓜、络石藤、海风藤、桑枝、豨莶草,祛风湿强筋骨药五加皮、狗脊、骨碎补、续断、桑寄生)进行系统的、平行的多种镇痛抗炎药理实验比较,总结出它们共同的药效谱,并试图证明辛温(热)合归脾胃经中药(包括在教材中未被列为温里药的中药)也应作为温经强肢肌药被列为祛风湿类中药。现总结报道如下。1中药的鉴定和提取1.1杨智锋鉴定药材的方法本课题涉及祛风湿药20味,均购自西安市万寿路药材市场,经本院中药所生药研究室杨智锋副研究员依据《中华人民共和国药典》、《现代中药材鉴别手册》及《中药鉴定学》进行鉴定,结果如下。(1)苍术本品为饮片。经鉴定来源于菊科植物北苍术Atractylodeschinensis(D.C.)Koidz.的干燥根茎。品质良。(2)具有可干均有力的种子本品为壳砂。经鉴定来源于姜科植物阳春砂AmomumvillosumLour.或绿壳砂AmomumvillosumLour.var.xanthioidesT.L.WuetSenjen.的干燥成熟果实。品质良。(3)最佳干燥根的确定本品为饮片。经鉴定来源于伞形科植物重齿毛当归AngelicapubescensMaxim.f.biserrataShanetYuan.的干燥根。品质良。(4)叶嘴唇叶绿素smiloa-nm.sm别名:红萆薢。本品为饮片。经鉴定来源于百合科落叶攀援灌木植物黑果菝葜Smilaxglauco-chinaC.H.Wright.或菝葜SmilaxchinaL.的干燥根状茎。品质一般。(5)预防和准备本品为饮片,厚片。来源于防己科植物粉防己StephaniatetrandraS.Moore.的干燥根。品质良。(6)藤本植物种本品为短节。来源于夹竹桃科常绿攀援木质藤本植物络石Trachelospermumjasminoides(Lindl)Lem.的干燥带叶藤茎。品质优。(7)海上风藤本品为短节。来源于胡椒科植物风藤Piperkadsura(choisy)Ohwi.的干燥藤茎。品质优。(8)骨碎补液为饮片。来源于水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎。品质良。(9)桑寄生本品为短节。来源于桑寄生科植物槲寄生Viscumcoloratum(Komar.)Nakai的干燥带叶茎枝。品质优。(10)半夏本品为个子货。来源于天南星科植物半夏Pinelliaternate(Thunb.)Breit.的干燥块茎。品质良。(11)黄瓜本品为饮片。来源于蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomelesspeciosa(Sweet)Nakai.的干燥近成熟果实。品质差。(12)桑芝本品为饮片。来源于桑科植物桑MorusalbaL.的干燥嫩枝切片。品质优。(13)si-elitysi及si-ms.as本品为饮片。来源于川续断科植物川续断DipsacusasperoidesC.Y.ChengetT.M.Ai.的干燥根。品质良。(14)狗背本品为饮片。来源于蚌壳蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的干燥根茎。品质良。(15)秦凯本品为个子货。来源于龙胆科植物小秦艽GentianadahuricaFisch.的干燥根。品质良。(16)干燥根皮及杆皮本品为个子货。来源于五加科植物红毛五加AcanthopanaxgiraldiiHarms.的干燥根皮及杆皮。属同属近缘植物。由于药典规定品种西安市场没有卖的。(17)香本品为饮片。来源于菊科植物木香AucklandialappaDecne.的干燥根。品质优。(18)inalisrehd.或凹叶厚入叶、可混叶、可混叶、可混血皮本品为饮片。来源于木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.或凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.var.bilobaRehd.etWils.的干燥枝皮。(19)寻求骨风本品为饮片。来源于马兜铃科植物绵毛马兜铃AristolochiamollissimaHance.的干燥全草。(20)wour本品为饮片。来源于菊科植物腺梗豨莶SiegesbeckiapubescensMakina.的干燥地上部分。1.2第2次不同用量的2取药材称重,加水8倍量(加水量可随药材体积而调整),浸泡1h,煎煮两次,第1次2h;第2次加水6倍量,煎煮1.5h。煎煮液4层纱布过滤,滤液静置过夜;上清液及沉降层二层无纺布(100目)过滤,滤液常压浓缩,75℃干燥成型,再真空干燥(66℃,0.095Pa)至无水蒸汽产生,称重,记录,结果见表1。2中药急性毒性和疗效的确定2.1动物急性毒性试验ICR小鼠,体重18～22g,雌雄各半,由陕西省中医药研究院实验动物中心提供,合格证号:医动证字第08-24号(下面的药效实验小鼠也都由该实验动物中心提供)。试验条件:室温20～22℃,湿度45%～60%,空调调温,排气扇通风,3天打扫一次鼠舍,保持清洁,光/暗时间为12/12h。根据预试验结果,取小鼠,雌雄各半,禁食过夜,不禁水。20味祛风湿药水提物分别灌胃给药,按李仪奎主编的《中药药理实验方法》(1991年版)一书测定小鼠急性毒性。用水将各味祛风湿药水提物配制成最大浓度,每次给小鼠灌服最大体积为40mL/kg,如果动物不死,可以每隔4h灌服一次,如果20只小鼠累积服药剂量大于100g生药/kg仍无死亡或仅死亡1、2只,就作为最大耐药量或最小致死量不再测定下去,如果能测出半数致死量(LD50),则每组动物数10只,以1∶0.85等比级数设计剂量,分4～6组给药。给药后即刻密切观察1周内动物的一般活动情况及存活情况,连续观察8天,详细记录中毒症状及死亡情况。给药后正常颗粒料饲养,自由饮水,8日后处死动物,对中毒死亡动物及处死动物进行尸检,肉眼逐只观察处死小鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、精囊、前列腺、睾丸、卵巢、膀胱各脏器,有异常发现进行病理组织学检查。用Bliss法计算LD50及95%可信限,结果见表2。结果独活、菝葜、木瓜、桑枝、狗脊、骨碎补、木香、苍术、半夏、厚朴10味药测不出LD50。余下10味测出LD50,具体数据见表2。所有中毒死亡小鼠立即解剖,肉眼观察内脏各器官都未见异常病理改变。饲养8日后观察处死小鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、精囊、前列腺、睾丸、卵巢、膀胱各脏器,也都未见异常病理改变。动物中毒症状表现:砂仁组小鼠呼吸加快,抽搐而死;续断、海风藤组小鼠活动减少,呼吸减慢加深而死;防己组小鼠活动减少,呼吸减慢而死,小鼠死亡时有腹泻现象;络石藤组小鼠活动减少,呼吸加快、加深,抽搐而死;桑寄生、寻骨风、秦艽、豨莶草组小鼠静卧不动,呼吸减慢,抽搐而死;五加皮组小鼠静卧不动,呼吸减慢而死。2.2药物剂量的确定药效剂量的选择:急性毒性实验无法测出LD50及LD50大于100g生药/kg的药味,则选用20g生药/kg和10g生药/kg两个剂量组。LD50小于100g生药/kg的药味,则选用1/10LD50g生药/kg和1/5LD50g生药/kg2个剂量组。每个祛风湿中药的具体药效实验剂量见表2。3药理学的实验方法和结果3.1缓解疼痛研究3.1.1单次给药后小鼠的扭体次数取ICR小鼠,体重18～23g,雌雄皆有,按体重性别随机分组,每组12只,实验分两批进行。水对照组,受试药小、大两个剂量组,除吗啡组在实验当天20mg/kg皮下注射外,其余各组均按剂量每天灌胃1次,连续4天,末次给药后45min,每只鼠腹腔注射0.7%乙酸0.01mL/g体重,5min后开始记录10min内小鼠的扭体次数,数据以ˉx±s表示,组间t测验以及进行作用强度等级划分,以判断药物的镇痛作用。实验结果见表3,所有20味祛风湿药与对照组比较都具有显著的减少动物扭体次数的作用。但达到++以上有价值的中药有豨莶草、木香、砂仁、续断、菝葜、木瓜、防己、狗脊、半夏、络石藤、桑枝、桑寄生、海风藤13味,也就是说这13味祛风湿药对乙酸致小鼠腹痛具有有价值的镇痛作用。3.1.2疼痛持续时间测定取ICR小鼠,体重20～23g,雌雄各半,分组、给药剂量及给药时间同扭体法(第2批实验阳性对照药用复方阿司匹林0.5g/kg),末次给药后45min和90min,将小鼠尾部距末端2cm放入55℃水浴锅中,分别记录小鼠尾自放入水中至甩尾的时间,作为小鼠的疼痛潜伏期。从表4中可以看出,除秦艽、苍术、半夏3药无延长小鼠热水甩尾反应疼痛潜伏期(其中秦艽、苍术在某时相还缩短甩尾反应疼痛潜伏期)外,其余17味中药都有明显延长作用,但达++以上有延长热痛刺激甩尾反应潜伏期价值的中药有独活、豨莶草、寻骨风、木香、厚朴、砂仁、菝葜、络石藤、防己、桑枝、狗脊、骨碎补、海风藤、桑寄生等14味。3.1.3对小鼠的疼痛作用取ICR小鼠,体重20～23g,雌雄各半,分组、给药剂量及给药时间同扭体法,末次给药后45min和90min,将小鼠尾部距末端2cm放入电子压痛仪的扁型压头(下压重量约为6kg)下,分别记录小鼠尾受压至动物疼痛后出现嘶鸣的时间,作为小鼠的疼痛潜伏期(即痛阈),延长表示药物有镇痛作用。从表5中可以看出,防己和菝葜两药无延长小鼠压痛潜伏期,木瓜,砂仁和半夏虽有明显延长小鼠压痛潜伏期的作用,但作用强度低,仅为+,无明显价值。其余15味中药都有明显延长小鼠压痛潜伏期作用,作用强度在++以上,有明显镇痛价值。3.2抗急性渗出性炎症的研究3.2.1抗二甲苯小鼠耳水肿作用取ICR小鼠,体重20～23g,雌雄各半,分组、给药剂量及给药时间同扭体法,阳性对照药用阿司匹林0.25g/kg,末次给药后45min,右耳滴二甲苯20μL,20min后处死动物,沿耳廓精心剪下左、右耳,称重,两耳片重量之差为耳廓肿胀度,数据以ˉx±s表示,组间t测验,结果见表6。所有20味祛风湿药都有明显的抗二甲苯性小鼠耳肿胀作用。其中只有续断作用强度为+,不达标外,其余19味都有抗二甲苯性小鼠耳肿胀价值。3.2.2测定密度od值取ICR小鼠,体重20～22g,雌雄各半,分组、给药剂量及给药时间同扭体法,阳性对照药用阿司匹林0.25g/kg,末次给药后45min,尾静脉注射0.5%伊文斯蓝0.01mL/g,再立即腹腔注射0.7%乙酸(0.2mL/只),过20min后脱椎处死,打开腹腔,注入10mL生理盐水冲洗,吸出洗涤液,3000r/min离心10min,再取上清液于590nm处测光密度(OD)值,(OD值间接表示通透性),数据以ˉx±s表示,组间进行t检验,结果见表7。达++以上有降低乙酸提高小鼠腹腔毛细血管通透性价值的祛风湿药有秦艽、苍术、木香、砂仁、菝葜、木瓜、桑枝、防己、半夏、狗脊、骨碎补、海风藤、桑寄生等13味,尽管独活、厚朴和五加皮都明显降低腹腔毛细血管通透性,但作用强度为+,不达标,没有价值。3.2.3角叉菜胶性小鼠足跖水肿取ICR小鼠,体重20～22g,雌雄各半,分组、给药剂量及给药时间同扭体法,阳性对照药用阿司匹林0.25g/kg,末次给药后立即在右后足跖皮下注射1%的角叉菜胶50μL,用千分卡尺测量右后足跖厚度,每隔1h测量1次,共6h,以致炎后的厚度减去致炎前的厚度作为肿胀度,数据以ˉx±s表示,在同一时相进行组间t检验,结果见表8。五加皮、狗脊、续断、桑寄生4药虽有明显抑制角叉菜胶性小鼠足跖肿胀作用,但作用持续时间短,作用强度低,仅为+,无明显价值。余下16味都在++以上有抑制角叉菜胶性小鼠足跖肿胀价值。3.3小鼠佐剂综合征足跖损伤模型的制备取ICR小鼠,体重20～22g,雌雄各半,分组、给药剂量及给药时间同扭体法,阳性对照药用地塞米松1mg/kg,每只小鼠右后足跖皮下注射Freund完全佐剂0.1mL,制备佐剂关节炎模型,分别按剂量灌胃给药,每天1次连续24天,分别在第12、16、20、24天用千分卡尺测量各组小鼠左右后足跖厚度,并计算肿胀度(mm),数据以ˉx±s表示,在同一时相进行组间t检验,结果见表9。可以看出半夏无明显抑制小鼠佐剂关节炎足跖肿胀作用,豨莶草、海风藤、砂仁和厚朴虽有明显抑制角叉菜胶性小鼠足跖肿胀作用,但作用持续时间短,作用强度低,仅为+,无明显价值。余下15味祛风湿药都有明显抑制小鼠佐剂关节炎足跖肿胀作用之价值。3.4桑枝、海风藤、思想政治教育取ICR小鼠,体重20～22g,雌雄各半,分组、给药剂量同扭体法,阳性对照药用阿司匹林0.25g/kg,末次给药后45min,小鼠用戊巴比妥钠50mg/kg麻醉后,俯卧,背部消毒,沿正中线左右两侧腋下皮下各埋入重量为3.9～4.0mg的虑纸片(直径6mm,厚0.3mm,干燥灭菌1h),缝合,术后24h开始给药,连续10天,每日1次,末次给药12h处死动物,剥出周围已包裹肉芽组织的虑纸片,在60℃烘箱内烘24h后称重,减去原有纸片的重量,即为肉芽净重。从表10可以看出菝葜、海风藤和厚朴无明显抑制小鼠滤纸肉芽肿形成。桑枝尽管明显抑制小鼠滤纸肉芽肿形成,但作用强度为+,价值意义不大。余下16味祛风湿药都有明显抑制小鼠滤纸肉芽肿形成之价值。4其他类中药的作用如果将上述表3～10的实验结果分别按4类祛风湿中药的作用强度等级汇总,可以得到一览表11,从中可清楚地看出4类祛风湿中药都有镇痛作用,相比较,其中舒筋活络药和祛风湿强筋骨药镇痛作用较强。祛风湿止痹痛药和辛温(热)合归脾胃经药(温经强肢肌药)镇痛作用相对较弱,然而在抗急性渗出性炎症方面,这2类药作用更强,祛风湿强筋骨药相对最弱。20味药中只有续断1味抗急性渗出性炎症作用强度等级之和为3个+,没有达标,即其抗急性渗出性炎症的作用价值不大。5味祛风湿止痹痛药和5味祛风湿强筋骨药抗佐剂性关节炎的作用强度全部达标,都在++以上,而在5味温经强肢肌药中却有半夏、砂仁、厚朴3味未能达标。在抗滤纸肉芽肿中,5味祛风湿强筋骨药的作用强度全部为+++,温经强肢肌药也有较强的抗肉芽肿作用。可见镇痛抗急性渗出性炎症是这4类祛风湿中药的共同药效谱。抗佐剂性关节炎可能是祛风湿止痹痛药和祛风湿强筋骨药的共同药效之一。抗肉芽肿可能是祛风湿止痹痛药、祛风湿强筋骨药和温经强肢肌药的共同药效之一。所以辛温(热)合归脾胃经药也是可以作为温经强肢肌药融入到祛风湿类药物中,此类药的祛风湿共同药效谱包括镇痛、抗急性渗出性炎症和抗肉芽肿。舒筋活络药的祛风湿共同药效谱包括镇痛、抗急性渗出性炎症和抗佐剂性关节炎。而祛风湿止痛药和祛风湿强筋骨药的共同药效谱则广些,包括上述4大项。4类祛风湿中药还各有特点:第一类的祛风湿止痹痛药抗急性渗出性炎症和抗佐剂性关节炎的作用比较突出,其止痹痛可能主要是通过抗炎而产生。第二类的舒筋活络药镇痛作用最为突出,体现了中医通络止痛(不通则痛,通则不痛)观点。第三类祛风湿强筋骨药除抗急性渗出性炎症作用相对较弱外,抗肉芽肿、抗佐剂性关节炎和镇痛作用都比较突出,这类药似乎对慢性或变态反应性炎症更有效,体现了中医强筋骨这类药的特色。第四类温经强肢肌药[辛温(热)合归脾胃经药]抗肉芽肿和抗急性渗出性炎症作用强,与以前笔者报道它们的75%乙醇提取物的镇痛、抗急性渗出性炎症的作用强度大致相同。中医的祛风湿药是指祛除肌肉、经络、筋骨间的风湿,以解除风湿痹痛为主要功效的药物。中医理论认为脾主四肢、肌肉。辛能散、能行、能燥,温能祛风散寒、宣散除湿、通行气血。当药性由辛、温(热)与脾胃经组合而成时,辛温就能祛散中医脾胃经系统(包括四肢、肌肉)内的风寒湿之邪,表现出温中散寒的消化系方面和温经强肢肌除风寒湿痹方面的功效。本研究加上以前的一系列实验研究证实了中医这一药性理论的正确,发现了利胆、抗溃疡、抗腹泻是辛温(热)合归脾胃经中药温中散寒的共同药效谱,镇痛、抗炎是辛温(热)合归脾胃经中药祛风湿的共同药效谱,因此将辛温(热)合归脾胃经中药划归为第四类祛风湿药——温经强肢肌药也可以说是符合中医理论的。1978年版《中药学》统编教材收载了约500味中药,而在有性味、归经记载的456味中,有69味为辛温(热)合归脾胃经药。由于辛温(热)合归脾胃经药药性比较广,加上每味药药性有所偏倚或它们兼有的其他药性,使它们分布在《中药学》16个章节(总共22章)中,但主要分布在7个章节中,它们是:(1)温里药全部为辛温(热)合归脾胃经药(11/11味,100%)。(2)在8味芳香化湿药中有7味,占87.5%。(3)在18味行气药中有13味,占72.2%。(4)在3味温经止血药中有2味,占66.7%。(5)在8味温化寒痰药中有5味,占62.5%(6)在16味发散风寒药(辛温解表药)中有8味,占50.0%。(7)在12味麻醉止痛药中有6味,占50.0%。然而在29味祛风湿药中仅有蚕砂1味是辛温(热)合归脾胃经药,占3.5%。笔者粗略地查阅了有关中医古籍,发现《中药学》所载的69味辛温(热)合归脾胃经中药中至少44味(占63.8%)在古籍中有类似祛风湿寒痹功效的记载。说明古人对辛温(热)合归脾胃经中药的祛风湿寒痹功效的认识与他们的中医理论是一致的。而现今中医药界有不少人对脾主四肢、肌肉,仅理解成脾为后天之本,生化气血濡养四肢、肌肉,脾与四肢、肌肉之间只是简单的营养关系。这种认识是不够正确的,因为气血也濡养其他脏腑和器官,脾不就成了主一切了?这与中医理论中的肾主骨、肝主筋等之说不相一致,与中医脾系统是由脾与胃、肌肉、四肢、口唇等共同构成的基本看法相矛盾,也与缪希雍语录“盖以风寒湿之邪,多从脾胃而入,脾主肌肉,为邪所侵,则腠理闭密,而寒热诸痹所从来矣,辛温走散开发,故能使风寒湿之邪从腠理而出”相矛盾。由于这种认识,导致《中药学》教材的编写出现了一些遗憾。至今各版《中药学》在编写过程中并未充分运用性味归经药性理论,使得某些章节的概述不够完善,缺少中医理论对中药的分析,未能体现该章节中药物的共性。如温里药章节,列入该章节的中药都是辛温(热)合归脾胃经药,然而在该章节的概述中却不指出这一共性,在共同功效的论述中却不用共有的辛温(热)合归脾胃经药性阐述温里药为什么会有温中散寒和回阳救逆功效。还忽视温里药都有温经止痛除风寒湿痹的事实和《本草经疏》中的辛温(热)合归脾胃经药性祛风寒湿痹的理论,在概述中不论述温里药的第三种功效——温经强肢肌。究其原因恐与将脾主四肢、肌肉错误理解为仅濡养四肢、肌肉有关,使得温里药这一章节的概述没有完全涵盖各温里药的共性。同样在祛风湿药章节的概述中不提辛温(热)合归脾胃经中药的温经强肢肌祛风寒湿痹药性和药效,也不介绍祛四肢、肌肉间风湿的药物,使这一章节的内容似乎缺乏完整性。中医坚持认为:只有在中医理论指导下应用的天然药物,才可称得上为中药。也就是说,《中药学》的编写必须以中医理论为基础,根据中药的药性(性、味和归经等)分析、解释和总结各味中药功效,进行中药分类及概述各章节的共同功能(即共同药效谱)和主治。笔者的一系列药性实验研究不只是发现了辛温(热)合归脾胃经中药的共同药效谱,更重