梅毒感染的实验室检测流程及策略(上海2015.8.7)

浙江大学医学院附属第二医院检验科陶志华E-mail:zrtzh@

梅毒感染的实验室检测流程与策略

梅毒流行病学简介

梅毒实验室检测流程罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果梅毒实验室检测策略主要内容

据最新估计，全球每年有1200万新发梅毒感染病例，其中200万为孕妇WHO.2011;WHO.2012;UNICEF.2011.梅毒感染新发病例(单位：百万)全球梅毒流行现状梅毒起源于美洲，然后从美洲到西班牙，从欧洲到亚洲印度，1505年从印度传入广东岭南（“广东疮”），后传到全国各地。少数民族地区居民梅毒感染率=10%牧区人群梅毒感染率=48%部分城市地区人群梅毒感染率=5%部分农村地区人群梅毒感染率=2-3%（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授）我国梅毒流行现状

通过三大措施，梅毒在我国实现基本消灭健康教育和宣传运动免费梅毒筛查（梅毒血清制动试验、荧光抗体试验）治疗我国梅毒基本消灭(1950-1964年)作为重大防治成就、学术成就，赢得国际上的广泛认可。1978年获得全国科学大会奖发表论文《我国对梅毒的控制和消灭》、《梅毒的传播及在中国的消灭》（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生教授）我国梅毒流行现状中国梅毒报告发病趋势梅毒报告病例数448620例，居甲乙类传染病第3位梅毒报病较2011年增长4.41%，隐性梅毒增长的贡献率99.6%（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心龚向东教授）我国梅毒流行现状6梅毒是一个可以临床治愈的传染病病例诊断依据病史症状实验室检查实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义我国梅毒流行现状我国政府梅毒控制相关政策卫生部于2010年6月3日下发了关于《中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）》卫生部2011年2月12日下发《预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案》国务院2012年1月13日《中国预防控制艾滋病五年行动计划（21011-2015年）》2013年1月实施《性病防治管理办法》梅毒控制主要措施：提高梅毒实验室检测质量加强梅毒筛查力度我国梅毒流行现状

梅毒流行病学简介梅毒实验室检测流程

罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果梅毒实验室检测策略主要内容常用梅毒实验室检测方法病原学检测

血清学检测病原学检查原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：（1）暗视显微镜检查

（2）镀银染色法

（3）核酸检测（血液标本？）注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。

病原学检查的临床意义螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。梅毒血清学检测方法非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）

梅毒螺旋体抗原血清学试验

（特异性梅毒抗体）两类方法。非梅毒螺旋体抗原血清学检测方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)

（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验(VDRL)等。基本成分是心磷脂卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似梅毒螺旋体抗原血清学检测抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)

梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)

梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光免疫分析法（CLIA）

梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)

荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）梅毒螺旋体免疫学检测的发展历程1980s2000EIA被FDA批准用于确认试验和血液筛查英国公共健康实验室指南：EIA可以作为替代VDRL/RPR+TPHA的选择之一2001FDA批准EIA用于临床诊断2008欧盟指南推荐：EIA/CIA/TPPA用于筛查，不再推荐VDRL/RPR2009美国CDC-APHL报告：EIA/CIA用于筛查.Europeanguidelineonthemanagementofsyphilis2008STDtreatmentguideline2006–USCDC2014欧洲梅毒管理指南自动化的化学发光检测已经用于许多大型的欧洲实验室，尤其适合对无症状的人群和献血者进行高通量的筛查。该检测流程更能检测非常早期的梅毒感染。Europeanguidelineonthemanagementofsyphilis2014美国梅毒检测类型的变化

化学发光的测试数量逐年增加为何选择ECLIA/CLIA?自动化（高通量）低成本（高样本量的情况下）更少的实验室职业危害没有假阴性结果客观检测IgM抗体，可用于诊断非常早期的感染VSUSCDC:reversesequencesyphilisscreening

检测原理:双抗原夹心法(DAGS)，检测时间18分钟

IgG:样本中，抗-TpN17,或抗-TpN15抗体钌标记的TpN17,TpN47抗原9分钟测定IgM:样本中，抗-TpN17,或抗-TpN47抗体生物素标记的TpN17,TpN15抗原9分钟快速高效全自动电化学发光(ECLIA)免疫检测原理

梅毒流行病学简介梅毒实验室检测流程罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果梅毒实验室检测策略主要内容国际多中心研究ClinicalandVaccineImmunologyJanuary2015Volume22Number1意大利德国（3家中心）土耳其中国（华西医院）泰国奥地利全球共8家研究中心（6个国家）国际多中心研究

研究设计

ElecsysLiaison®Serodia®Immulite®ArchitectLiaison®Serodia®Immulite®Architect敏感性评估特异性评估VitrosEnzygnost样本信息国家/中心样本量ElecsysLiaison®Serodia®Immulite®ArchitectTM德国lab1301100%100%100%德国lab283100%100%98.8%98.8%意大利218100%100%100%泰国124*100%100%中国202100%总体928*100%100%100%99.67%99.51%研究结果敏感性结果*Elecsys梅毒检测试剂在所有实验室中的敏感度结果均达到100%*2例样本结果为“不确定”，4例为“无反应性”梅毒分期样本量确认阳性ElecsysI期梅毒101101100%II期梅毒124124100%隐性梅毒470470100%未知分期229227*100%总体924#922*100%研究结果梅毒分期样本的敏感性结果*Elecsys梅毒检测试剂在能100%检测出不同分期梅毒样本#排除4例疑似操作错误的样本最终计算结果时排除2例确证试验结果为未确定的样本*排除2例确证试验结果为未确定的样本样本LotP1LotP2LotP3常规样本99.80%99.90%100.00%献血员样本99.93%99.82%99.82%总体特异性99.88%99.85%99.89%研究结果总体特异性结果（3批次试剂）*Elecsys梅毒检测试剂的总体特异性大于99.85%

研究结果特异性结果-献血员样本*Elecsys梅毒检测试剂在献血员样本中的总体特异性达到99.93%

研究结果特异性结果-常规样本*Elecsys梅毒检测试剂在常规样本中的总体特异性达到99.80%

研究结果干扰样本结果*Elecsys梅毒检测试剂在可能的干扰样本中的敏感性和特异性均更高EBV(+)/Syphilis(-)特异性HIV(+)/Syphilis(-)EBV-Lyme(+)/Syphilis(-)n=225,100%n=8