6-果蝇的三点测交讲解

实验六果蝇的三点测交湖州师范学院生命科学学院生物系雌雄一、实验目的1、掌握三点测交的原理及方法；2、学习三点测交的数据统计处理及分析方法；3、了解绘制遗传学图的原理和方法二、实验材料黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)品系：野生型果蝇〔+++〕：红眼、长翅、直刚毛三隐性果蝇〔wmsn3〕：白眼、小翅、焦刚毛三隐性个体：白眼〔w〕、小翅〔m〕、焦刚毛〔sn3〕，这三个基因都位于X染色体上。三、实验仪器设备、药品体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。位于同一条染色体上的基因是连锁的，而同源染色体上的基因之间会发生一定频率的交换，使子代中出现一定数量的重组型。重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的上下。而根据基因在染色体上直线排列的原理，基因交换频率的上下与基因间的距离有一定的对应关系。基因图距就是通过基因间重组值的测定而得到的。如果基因座位相距很近，重组率与交换率的值相等，直接将重组值作为基因图距；如果基因间相距较远，两个基因间往往发生两次以上的交换，必须进行校正，来求出基因图距。四、实验原理三点测交：用野生型纯合体与三隐性个体杂交，获得三因子杂种〔F1〕，再使F1与三隐性基因纯合体测交，通过对测交后〔Ft〕代表现型及其数目的分析，分别计算三个连锁基因之间的交换值，从而确定这三个基因在同一染色体上的顺序和距离。通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置，即相当于进行三次两点测验，而且能在试验中检测到所发生的双交换。四、实验原理四、实验原理如果两个基因间的单交换并不影响邻近两个基因的单交换，那么预期的双交换频率应当等于两个单交换频率的乘积，但实际上观察到的双交换值往往低于预期值，因为每一次发生单交换，它邻近也发生一次交换的时机就减少，这叫干预。一般用并发率表示干预的大小。并发率＝

观察到的双交换频率

两个单交换频率的乘积+++msn3wmsn3w

×msn3wmsn3wmsn3w

+++×（♂）♀（♂）♀msn3w+++msn3w+++msn3w+++msn3w

m+++sn3w+++msn3w

msn3+++w++++sn3

+msn3w

m+w+++P：F1：（测交）四、实验原理雄蝇产生两种配子雌蝇X染色体上三对基因之间发生交换重组，产生8种雌配子因为F1代雄蝇为三隐性个体，所以F1代雌雄蝇自交时，即测交，F2〔Ft〕代可以得到8种表型。F2〔Ft〕中亲组合最多，而发生双交换的表现型个体数应最少。四、实验原理五、实验步骤

1、选处女蝇：每组正、反交各1瓶，在8-12h内收集处女蝇5-6只，可提前2-3天收集。2、杂交：将处女蝇、雄蝇各5-6只，麻醉、转移到新的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好标签，注明杂交组合、日期、姓名，于25℃培养；3、释放亲本：7d后，处死杂交亲本〔一定要干净〕。4、观察F1：再过4-5天，F1成蝇出现，连续观察2—3天，或在处死亲本7天后，集中观察记录F1表型。要求每组至少统计250只果蝇。4、F1互交：选取5-10对F1果蝇，转入一新培养瓶〔不需处女蝇，正交和反交F1不能混〕，贴好标签，于25℃培养。5、释放亲本：7d后，杀死F1代亲本果蝇。6、观察F2：再过4-5d，F2成蝇出现，开始观察眼色，翅形及刚毛形态，同时记录F2各种性状果蝇的数目，连续统计7-8d。注意：〔1〕要求每组至少统计250只果蝇。〔2〕如果做正交只需统计雄性个体。〔3〕统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死。五、实验步骤

六、实验报告

1、将观察到的F2代〔包括正交和反交〕各表型个体数填入书本P17表5-1中，确定基因间重组发生的情况；2、计算基因间的重组值及双交换值；3、根据计算结果画出遗传学图。注意用双交换值对位于两端的基因间距离进行校正；4、计算并发系数和干预值。七、思考题正交组合F2统计为什么只需统计雄性个体？其雌性个体F2代个体的表型如何？内容单因子杂交双因子杂交伴性遗传三点测交杂交蝇处女蝇雄蝇处女蝇雄蝇处女蝇雄蝇处女蝇雄蝇正交（2人）野生型（长翅）突变型（残翅）灰体残翅黑檀体长翅野生型(红眼)突变型(白小焦)突变型白小焦野生型反交（2人）突变型（残翅）野生型（长翅）黑檀体长翅灰体残翅突变型(白小焦)野生型（红眼）野生型白小焦4个果蝇杂交实验选择的处女蝇〔4人/组110921/22班〕收集处女蝇的种类：每个杂交至少5只雌蝇。

1.野生型15只，放1个培养瓶；2.残翅10只，放入1个培养瓶；

3.黑檀体5只，放1个培养瓶；4.白小焦5只，放1个培养瓶。

5.白眼5只，放1个培养瓶。收集雄蝇的种类：每个杂交至少5只雄蝇。1.野生型15只，放1个培养瓶；2.残翅10只，放入1个培养瓶；3.黑檀体5只，放1个培养瓶；4.白小焦5只，放1个培养瓶。5.白眼5只，放1个培养瓶。内容单因子杂交双因子杂交伴性遗传三点测交杂交蝇处女蝇雄蝇处女蝇雄蝇处女蝇雄蝇处女蝇雄蝇正交（2人）野生型（长翅）突变型（残翅）灰体残翅黑檀体长翅野生型（红眼）突变型（白眼）白小焦野生型反交（2人）突变型（残翅）野生型（长翅）黑檀体长翅灰体残翅突变型（白眼）野生型（红眼）野生型白小焦4个果蝇杂交实验选择的处女蝇〔4人/组〕收集处女蝇的种类：每个杂交至少5只雌蝇。

1.野生型15只，放1个培养瓶；2.残翅10只，放入1个培养瓶；

3.黑檀体5只，放1个培养瓶；4.白小焦5只，放1个培养瓶。