暖宫孕子丸中白芍、黄芩的鉴别研究

暖宫孕子丸中白芍、黄芩的鉴别研究

暖宫怀孕子丸是该部批准的《第二卷》的品种。它由10种中药组成：水煮土、当归、川药、白芍、黄药。滋阴养血、温经散寒、益气止痛。可用于血虚气滞,腰酸疼痛,经水不调,赤白带下,子宫寒冷,久不受孕等症。其中白芍含有芍药苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷及苯甲酸、蔗糖、挥发油等。芍药苷在水饱和正丁醇中有特殊溶解性。黄芩含多种黄酮类衍生物,其中主要有黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素等。现施行国家食品药品监督管理局标准(试行)YBZ03492004,在进行暖宫孕子丸的薄层鉴别研究中,发现鉴别项不能很好的对白芍、黄芩进行鉴别。原供试品溶液制备方法,薄层色谱中斑点有拖尾,主斑点不清晰。为此,我们对试行标准鉴别方法加以改进,并且增加了白芍对照药材作为对照,获得满意的效果。1药品、试剂、仪器上海顾村电表仪器厂ZF-I三用紫外分析仪;暖宫孕子丸(山东齐都药业有限公司,批号041201);对照药材:白芍对照药材(RadixpaconiaeAlba)(中国药品生物制品检定所0905-200106);对照品:黄芩苷(Baicalin)(中国药品生物制品检定所批号110715-200514);芍药苷(paeoniflorin)(中国药品生物制品检定所批号0736-200117);硅胶G(青岛海洋化工厂);甲醇、氯仿、甲酸、丙酮、正丁醇、甲苯、丁酮、乙酸乙酯、无水乙醇等试剂均为分析纯;注射用水:本厂自制。2方法和结果2.1当归和川芎的区别2.1.1供试品溶液配制试行标准制备方法:取本品5g,加乙醇30ml,超声15min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。改进方法:取本品5g,加水饱和的正丁醇40ml,加Al2O36g水浴回流1h,放冷,滤过,滤液用正丁醇饱和水洗(20ml×2),取正丁醇层,用乙酸乙酯萃取(20ml×2),弃去乙酸乙酯液,余液回收正丁醇,残渣加1ml乙醇溶解,供试。2.1.2标准物质的制备取对照药材0.2g,加乙醇超声处理30min,滤过,滤液浓缩至干,加乙醇溶解,备用。2.1.3对照溶液的制备取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,备用。2.1.4准分离溶液的制备取缺白芍的本品,同供试品溶液制备方法制备阴性对照液,备用。2.1.5同一薄层板上的行材色谱照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取阴性对照液10μl、供试品溶液10μl、对照药材溶液8μl、对照品5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液(试行标准采用10%硫酸乙醇溶液),105℃加热至显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照液无此斑点(见图1)。2.2黄鼠的识别2.2.1供试品溶液的制备试行标准制备方法:取本品5g,加甲醇30ml,超声30min,滤过,滤液蒸干,用1ml甲醇溶解作为供试品溶液。改进方法:取本品5g,加70%乙醇30ml,加热回流1h,滤过,滤液用水饱和的正丁醇液萃取,回收正丁醇,残渣加乙醇1ml使溶解,备用。2.2.2对照溶液的制备黄芩苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,备用。2.2.3准分离溶液的制备取缺黄芩的本品5g,同样品液制备方法制备阴性对照液,备用。2.2.4氯化铁乙醇溶液的制备试行标准方法:照薄层色谱法《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液,105℃加热至显色清晰。改进方法:照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,105℃加热至显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照液无上述斑点(见图2)。3每次1000公里3.1色谱中心原因试行标准中白芍供试品处理方法采用乙醇处理,而芍药苷属于水溶性成份,据我们高效液相测定研究在无水乙醇和稀乙醇中,芍药苷的量可相差一倍。原处理方法所得供试品溶液与对照药材、对照品溶液色谱相应的位置上,斑点不清晰,有较深的背景及拖尾现象。原因可能是处理方法与生产工艺制法有出入,生产工艺采用水提,保留的为水溶性成份、去除醇溶水不溶性成份;供试品处理方法中采用乙醇,保留了醇溶水不溶性成分,造成薄层色谱上主斑点不清晰,杂质较多,相互掩盖。现对供试品溶液、对照药材提取方法与制剂工艺相一致,结果在供试品色谱中,在与对照药材,对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。3.2色谱条件及色谱显色剂的选择采用10%硫酸乙醇溶液显色,试剂空白溶液色浅,但显色不明显,杂质斑点较多,有拖尾现象。而5%香草醛硫酸溶液,显色灵敏,杂质斑点较少,主斑点清晰,呈方形,较为规则,分离度及重现性较好。试行标准采用乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开