荧光分光光度计验收细则

岛津RF-5301PC荧光分光光度计的验收方案一、 荧光分光光度计的方法原理某些物质由于受到光照射而被激发之后，会发射出比照射波长稍长的光（荧光），荧光强度与该物质的浓度有如下关系：F二k④I（1一e-£Lc）0式中：F—荧光强度；k'—仪器常数；0—荧光量子效率I0—激发光强度e—荧光物质的摩尔吸收系数L—荧光物质液层的厚度c—荧光物质的浓度对于某个给定物质，激发光波长和强度固定，液层厚度固定，溶液浓度较低时，荧光强度和荧光物质的浓度有如下关系：F二kc二、 试剂1、试剂及标准物质：表试剂尺标准输质试捌名称施醱奎宁硫酸化学式HjSQ,相对分子质■782.93$8.03纯度国家二级标瞧物履分析纯

褰A.3碓建畫宁标准廨港配制方法做配标准溶港所取标准母襪质越诫度”g/mL）配制体积MiL圖■浓度Ke/mL}所取悴积/mb1x10s250251X10-7100lxid-1104X10'7100IX10sL48x10_tWO …1x10s..J8lxiO'*1001X1O_T2、标准溶液的配制：1）0.05mol/L硫酸标准溶液将lOOOmL的容量瓶中加入适量的二次蒸馏水，用滴定管取浓硫酸2.7mL，注入容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，并混合均匀后放置备用。2）500mL1X10-5g/mL的硫酸奎宁标准溶液将硫酸奎宁固体在干燥器中放置24h以上。在分析天平上称准至5.00mg的硫酸奎宁标准物质至于500mL容量瓶中，用适量的0.05mol/L硫酸标准溶液溶解，然后再用0.05mol/L硫酸标准溶液稀释至刻度，摇匀即可。注：用深色玻璃瓶储存高浓度的标准液。溶液应低温、避光、密封储存。稀标准溶液应该现配现用。浓溶液有效期为半年。3、设备及器材$A.X设■及规格名称规格名称规格烘箱(0-220)V容量瓶100,250,1OOOmL滴定骨10ml.量筒500mL5mL20mL分析夭平分度值0.01mg单标线吸管1*10*25mL三、验收标准及验收方法（仅对于色散型单色器（光栅）一）、波长示值误差及重复性1、 标准：波长示值最大误差±2.0nm；波长重复性V.Onm。2、 验证方法：氙灯亮线法

1）激发侧单色器波长示值误差和重复性将发色侧单色器置零级位置，将漫反射板（或无荧光的白色滤纸条）放入样品室，仪器的响应时间设置为：“快”扫描速度设置为“中”，狭缝宽度为1.5nm，对激发侧单色器在（350〜550nm）的波长范围内进行扫描，在谱图上找到450.1nm处的光谱峰，并确定其峰值位置。连续测量三次，按照式（1）和式（2）分别计算波长示值误差和重复性。波长示值误差：=1工九—九 （1）九3 in式中：九一波长测量值（nm）九一参考波长测量值（氙灯亮线参考波长测量值为：450.1nm）波长重复性：匸max®波长重复性：匸max®nm)2）发射侧单色器波长示值误差和重复性将激发侧单色器置零级位置，将漫反射板（或无荧光的白色滤纸条）放入样品室，仪器的响应时间设置为：“快”扫描速度设置为“中”，狭缝宽度为1.5nm，对激发侧单色器在（350~550nm）的波长范围内进行扫描，在谱图上找到450.1nm处的光谱峰，并确定其峰值位置。连续测量三次，按照式（1）和式（2）分别计算波长示值误差和重复性。二）、检出极限1、 标准：用硫酸奎宁标准溶液的检出极限为5X10-】0g/mL。2、 验收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，选取质量浓度为1X10-9g/mL硫酸奎宁标准溶液，灵敏度至最高档，狭缝宽度为1.5nm,激发波长350nm,发射波长为450nm,对空白液和标准液进行连续交替测量11次。如果测量中，有1次数据是由于外界干扰或是操作失误造成的误差，应该将此数据删除。每次测量的荧光强度：F=F-F式中：F—标准溶液的荧光强度F—空白溶液的荧光强度ni

i=1荧光强度测量的平均值：F=-艺F（n—ni

i=1cDL二=x2sF式中：F—11次测量的平均荧光强度c—标准溶液的质量浓度s一单次测量的标准偏差;三）、测量线性1、标准：仪器测量结果的线性Y值为.995。2、验收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，将灵敏度至于高档，狭缝宽度为1.5nm,激发波长350nm,发射波长450nm,依此测量下表4中各浓度硫酸奎宁标准溶液。表4硫酸奎宁标准溶液（g/L）标准溶液号1234标准溶液浓度（Cj）1X10-74X10-78X10-71X10-6分别对4中质量浓度工作标准溶液与空白溶液连续交替3次测量，计算每次测量的荧光强度的平均值。用最小二乘法对4中标准溶液的质量浓度和荧光强度测量平均值进行处理得到线性相关系数Y，几位测量线性的检定结果。最小二乘法的计算公式：Y=a+bXS—xxxya=Y-bXxx

yy(Zyy(ZxVY>XY——S二XY-xy注：片作为X,F作为Y即可进行计算。四）荧光光谱峰值强度的重复性1、 标准：仪器测量荧光光谱峰值强度的重复性口.5%。2、 验证方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，将灵敏度至于高档，狭缝宽度为1.5nm,激发波长350nm,发射波长450nm,用1X10-7g/mL的硫酸奎宁标准溶液，见光3min后，对发射波长从365〜500nm重复扫描三次。光谱强度的重复性由下式计算：maxmax式中：F—为光谱峰值强度的读数。五）稳定度1、 标准：在10min中内基线漂移＜0.5%；荧光强度示值上限在10min内的漂移三1.5%。2、 验证方法调节灵敏度为中等强度，关闭光闸门，记录10min内的漂移；至激发波长和发射波长为450nm，至激发狭缝和发射狭缝的宽度为10nm，漫