习题2核酸分子杂交技术

印迹杂交印迹杂交第二章核酸杂交技术（一）名词解释（一）名词解释1．原位杂交2．核酸分子杂交技术3．探针4．反向点杂交5．缺口平移标记法6．随机引物标记法．末端标记法. 杂交9．荧光原位杂交10.菌落杂交（二）选择题【型题】.链的 值主要取决于核酸分子的（ ）含量含量含量含量印迹杂交实验.研究得最早的核酸分子杂交种类是（）菌落杂交杂交杂交液相杂交原位杂交. 杂交通常是指（）和 杂交和 杂交和 杂交蛋白质和蛋白质杂交和蛋白质杂交.最容易降解的核酸探针是（）探针探针探针探针-含量.液相杂交是下列哪一种（）印迹杂交.探针基因芯片技术的本质就是（）核酸分子杂交技术印迹杂交印迹杂交蛋白质分子杂交技术非共价键结合聚合酶链反应技术非共价键结合基因重组技术酶切技术探针的长度通常为~个碱基~个碱基400~50个0碱基100~40个0碱基.＜个1碱0基0．寡核苷酸探针的最大的优势是（）杂化分子稳定可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列易标记易合成易分解.在 印迹中常用的核酸变性剂是甲醛乙醛氢氧化钠碳酸钠盐酸0．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）脆性大本底低高结合力.最常用的 探针标记方法是随机引物切口平移3末端标记5末端标记法12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）A探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过B探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过C探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过D探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过E探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过.'一末端的 探针标记主要依靠的酶是（）多聚核苷酸激酶B末端转移酶共价键结合II．血友病是一种（）染色体病II．血友病是一种（）染色体病连锁遗传病先天性代谢缺陷病先天畸形常染色体I!性遗传病．预杂交中最常用的封闭剂是（溶液XXXX.检测目标是 的技术是（杂交杂交杂交杂交杂交淋巴瘤.检测靶序列是的技术是（杂交杂交杂交杂交E杂交淋巴瘤. 双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，分子成为单链，这一过程称（）A变性B复性C复杂性D杂交）E探针19.具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）A变性B复性）C复杂性D杂交E探针20.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（）A变性）B复性C复杂性杂交

探针.寡核苷酸探针的 简单计算公式为探针.寡核苷酸探针的 简单计算公式为．点/狭缝杂交可以用于（）快速确定是否存在目的基因不仅可以检测样品中是否存在某一特定不仅可以检测样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息用于基因定位分析阳性菌落的筛选蛋白水平的检测．放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是℃0℃0℃0℃0. 印迹杂交可以用于（）快速确定是否存在目的基因不仅可以检测 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息检测的目标是用于基因定位分析阳性菌落的筛选26.荧光原位杂交可以用于（）. 印迹杂交可以用于（）不仅可以检测样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息检测的目标是用于基因定位分析阳性菌落的筛选蛋白水平的检测A快速确定是否存在目的基因检测的目标是C 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E蛋白水平的检测27.以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）正常人利用通过在体外反转录可制备杂合体患者大量的探针纯合体患者携带者纯合体患者携带者探针不包含内含子探针不包含大量的高度重复序列不能确定由于探针自身所携带的），有.在 为下述何种范围时， 值变化不明显可能产生非特异性杂交的问题探针合成方便，成为探针的重要来源.一般来说核酸杂交的温度低于其 值的多少度进行5℃5℃0℃．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）0℃0℃．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其0℃0℃0．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）0℃0℃．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其0℃0℃0℃.变性剂可使核酸的 值降低，常用的变性剂5℃甲酰胺．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应氢氧化钠常在多少℃下进行浓盐酸稀盐酸甲醇氢氧化钠常在多少℃下进行浓盐酸稀盐酸甲醇．下列有关探针的描述不正确的为（）．下列有关探针的描述不正确的为（）．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行.随机引物法标记探针常用的、聚合．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加，则值下降℃5℃5℃5℃5的杂交体的 值一般应增加体的数目是【型题】．下列哪些是影响复性的因素温度浓度的分子量碱基组成0℃的来源5℃．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行.随机引物法标记探针常用的、聚合．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加，则值下降℃5℃5℃5℃5的杂交体的 值一般应增加体的数目是【型题】．下列哪些是影响复性的因素温度浓度的分子量碱基组成0℃的来源5℃0℃探针的优点有（）5℃制备方法简单．杂交的时间一般为探针易降解探针的标记方法成熟，有多种方法可以选克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽0倍以上．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加单链，不存在竞争性的自身复性．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（ ）加尾法切口平移标记法随机引物标记法末端标记尾端标记・关于 变性的描述正确的是二级结构破一级结构破坏黏度降低生物活性丧失浮力密度增加.以下哪些因素可以使变性()增加溶液的浓度加热改变溶液的值有机溶剂冷藏．预杂交中，下列能起封闭作用的是()ssDNABSA小牛胸腺脱脂奶粉DTT.变性的 会发生哪些理化性质的变化(粘度下降B 沉降速度增加C 浮力下降D 紫外光吸收增加E 紫外光吸收减少48下.列物质适于非放射性探针标记的是( )A AKPB ACPC 生物素D 地高辛E 荧光素49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是()A特异性高B 可依赖氨基酸序列推测其序列C 分子量小D可用于相似基因顺序差异性分析可用末端转移酶进行‘端标记50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度()A 采用大片段探针B 少量的反应体积C 高反应温度D 不断的振摇E 大量的反应体积51．关于切口平移法下述正确的是( )可标记线性可标记松散螺旋可标记超螺旋可标记存在缺口的双链可标记随机引物以下哪些方法可以用于从凝胶上转移 （）毛细转移真空转移负压转移电泳转移冷冻转移．关于随机引物法标记探针下述正确的是（ ）可标记单链可标记双链可标记单链比活性高达 /!!以上常经过 纯化才可使用．可以采用哪些方法来标记探针（）杂交标记法切口平移标记法可’-末端的标记3’-末端的标记化学法延长标记．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）预杂交洗脱固定转移6．放射自显影可以被分为（）直接放射自显影氧化显影封闭显影间接放射自显影固定显影7．关于电转移下列描述正确的是（）快速、高效需要特殊设备缓冲液用或可产生高温常用膜作为支持介质8．预杂交的主要目的是（）平衡滤膜封闭非特异性杂交的位置提高杂交信号的检测效率便于从滤膜上除去探针清除用于杂交反应检测的显色物质9关.于非放射性探针标记，下列描述正确的是对人体危害小杂交 B需要特殊设备C可长时间使用灵敏度不如放射性探针．下列哪些可以作为核酸探针使用（）E重新杂交新探比较容易.对于改变片段长度的突变，可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限制性片段长度改变。可以通过哪些方法检测（）扩增BRAPD印迹杂交印迹杂交E以上都不是.重组的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测的杂交方法有哪些（）A菌落印迹杂交印迹杂交印迹杂交D原位杂交E斑点杂交.关于探针的描述下列正确的是A可用于随机引物标记B特异性高C灵敏度高D可用非同位素标记法标记单链C寡核苷酸DmRNA双链64．关于核酸探针的描述下列正确的是（）可以是可以是C可用放射性标记D可用非放射性标记E必须是单链核酸（三）问答题1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围.试述 杂交的操作步骤？4．什么是肽核酸？并简述其应用？5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。6．请叙述杂交探针标记方法的种类。7．简述直接放射自显影的原理。不易降解参考答案聚合酶的’―’外切酶活性和’一聚（一）名词解释1．原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进行特异性结合形成杂交体，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内基因定位或基因表达的检测技术。2．核酸分子杂交技术：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。利用核酸分子杂交检测靶序列的一类技术称核酸分子杂交技术。3．探针：是一段单链或双链核苷酸，用放射性核素或非放射性物质标记其末端或全链，可依碱基配对规律与具有互补序列的待测核酸进行杂交，以探测它们的同源程度。这一段标记的核苷酸被称为探针。.反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，同时参与检测的样品 又互不干扰，故能一次性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交法，一次仅能检测一个未知序列。.缺口平移标记法：该法是利用低浓度在 双链上随机切开若干个切口，然后利用合酶活性，使链上的核苷酸不断被切除，而带放射性核素标记的 不断地被填入缺口位置，从而形成两条链被均匀标记的高放射活性的探针。.随机引物标记法：随机引物是各种可能序列的寡核苷酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺的 降解物。随机引物在较低的退火温度下，能与各种单链 模板结合。首先使双链 分子变性成为单链，然后退火使随机引物结合于两条单链模板上，当反应液中存在的4种 中有一种带放射性核素标记时，在聚合酶催化下合成新的带标记的 链。反应结束后经纯化即可得到标记的 探针。.末端标记法：寡核苷酸探针由于较其他类型的探针短，需要采用末端标记法。该法需要分子的末端带有羟基，而人工合成寡核苷酸的5’端本身即为羟基。其原理是利用多核苷酸激酶将y分子上位磷酸基转移至寡核苷酸链的’末端，末端标记也可在3’端进行。. 杂交：是研究 图谱的基本技术，在遗传诊断、 图谱分析及 产物分析等方面有重要价值。印迹杂交的方法是将 交后，洗脱未结合的探针，将滤膜暴露于 线胶片等方面有重要价值。进行放射自显影；⑤将自显影胶片、滤膜、培养平板相比较，就可以确进行放射自显影；⑤将自显影胶片、滤膜、培养平板相比较，就可以确定阳性菌落。（二）选择题【型题】【型题】9．荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的探针与待测样本的进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。【型题】（三）问答题1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪（三）问答题1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪，用 标记的探针与菌落进行杂交；④杂几类？①根据杂交核酸分子的种类，可以分为．什么是肽核酸？并简述其应用？与杂交，与杂交，与杂交；②根据杂交探针标记的不同，可以分为同位素杂交和非同位素杂交；③根据杂交介质的不同，可以分为液相杂交、固相杂交和原位杂交；其中固相杂交又可以分为菌落杂交、 杂交、杂交、点杂交和狭缝杂交。2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围反义核酸技术是近几年发展起来的一项新的生物技术。它是根据碱基互补的原理，设计出能特异地同相应靶基因结合的 或 ，从而影响靶基因的转录和翻译，以达到调控靶基因表达的目的。反义核酸技术包括反义 技术，反义技术及核酶技术。.试述 杂交的操作步骤？①的变性琼脂糖电泳；②将硝酸纤维薄膜放在含有 电泳条带的凝胶上；③转印盘中的转移缓冲液将逐渐为胶和膜上覆盖的吸水纸吸收，从而利用④毛细作用将胶中的变性分子转移到硝酸纤维薄膜上；⑤转印完成后，使分子固定到膜上；⑥膜上的 分子与探针杂交；⑦经放射自显影或其他检测技术显示出杂交区带。肽核酸是一种全新的 类似物，在世纪90年代由丹麦科学家发明。肽核酸中以中性的肽链酰胺氨基乙基苷氨酸键取代了 中的戊糖磷酸二酯键，其余结构与 相似。 可以通过碱基互补配对的形式识别并结合 或序列，形成稳定的双螺旋结构。由于 不带电荷，与和 之间不存在静电斥力，因而结合的稳定性和特异性都大为提高； 与或的杂交能力远远优于 、或A杂交，表现在很高的杂交稳定性、优良的特异性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鉴于上述诸多优点，近年来， 被广泛应用在许多高科技领域。如：病原体、遗传病的检测，抗癌、抗病毒反义核酸的研究和应用。特别是 可取代核酸用于基因芯片的制备，被认为是基因芯片的升级产品。还可用于定量 分析。随着对研究的不断深入， 将显示出更大的优越性和更为广阔的应用前景。5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用在临床检验科，杂交技术最常用于基因诊断的例子是镰状细胞贫血病的基因诊断。主要缺点是容易造成放射性污染，而且放射性核素镰状细胞贫血是一种单基因遗传性疾病，病因是编码血红蛋白的基因发生点突变导致编码B链第位的谷氨酸被缬氨酸取代，表示为B谷一缬。在血红蛋白基因的碱基序列上表现为第6位密码子突变为，也就是在这一位点发生了到的点突变。由于这一突变导致基因内部一个限制性酶切位点丢失，因而针对这一情况，可以设计与B珠蛋白基因杂交的核酸探针。先扩增靶片断，并用 消化扩增的片断，电泳分离消化的片断。将片断转印到硝酸纤维素薄膜上采用 杂交技术检测片断。以此将正常人、携带者和患者区分开来。此外还可以用凝血因子IX基因探针检测型血友病，凝血因子XIII基因探针检测型血友病，用胰岛素基因探针检测糖尿病，用苯丙氨酸羟化酶基因探针检测苯丙酮尿症。以上都是杂交技术在临床检验科进行基因诊断的例子。6．请叙述杂交探针标记方法的种类探针的标记方法可分为放射性核素标记法和非放射性核素标记法两大类。（1放）射性核素标记的探针，灵敏度高、特异性强，的半衰期较短，必须随用随标。标记手段主要有：缺口平移法、随机引物合成法和末端标记法。（2非）放射性核素标记法：非放射性核素标记法无