植酸测定方法的筛选

植酸测定方法的筛选

植物酸是一种含有6个醇和6个磷酸酯的环己六醇酯，它的测定方法有很多。目前，国家和地区关于种植酸的标准制定了不同的规定。到目前为止，还没有统一的标准植物和测定方法。为此,我们选用国内外多种植酸标准品,采用多种测定方法进行对比测定,并进行评价,筛选了4种适合于不同情况下的植酸测定方法。现报告如下。1材料和方法1.1phs-2酸值计及lxj-空气LC-5A高效液相色谱仪(日本岛津);UV-260紫外可见光谱仪(日本岛津);721-B分光光度计(上海第三分析仪器厂);PHS-2酸度计;LXJ-Ⅱ离心机(上海医用分析仪器厂);THZ-82恒温振荡器(上海跃进医疗器械四厂)。植酸(瑞士Fluka公司、美国Aldrich公司、日本东京化成工业株式会社、上海试剂二厂);植酸钠(美国Sigma公司、Aldrich公司);三氯乙酸、硫酸钠、磷酸二氢钾、钼酸铵、三氯化铁、磺基水杨酸、硫酸、硝酸钠均为分析纯。1.2磺化、铁、分光光度法称取5g粉碎的样品(过40目筛)于提取器中,加入5%三氯乙酸及10%硫酸钠100ml,室温下振荡30min.以3600r/min离心10min,取上清液5ml,用蒸馏水稀释至25ml后,通过阴离子交换树脂。用0.1mol/LNaCl15ml洗脱除去溶液中无机磷和其他干扰物,再用0.7mol/LNaCl洗脱收集植酸溶液,并用蒸馏水稀释定容至100ml,待用。①硝酸钍滴定法:移取含植酸的样品溶液(约含植酸180mg)于250ml锥形瓶中,加入50ml蒸馏水,用0.02mol/LHCl调节pH至1.9～2.2,加热至60℃,加入1%二甲酚橙溶液1ml,迅速用硝酸钍溶液滴定,终点时溶液由橙黄色变为粉红色。②测磷分光光度法:移取含一定量植酸的样品溶液(含植酸5～20mg)于50ml烧杯中,加0.5ml浓硫酸和3ml的浓硝酸,控温200℃左右消化,冷却后,移至50ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。再取1.0ml稀释液置于50ml容量瓶中,加磷钼酸铵和硫酸混合试剂5ml,加水稀释至刻度,然后置于45℃水浴30min,冷却后在660nm处测定吸光度。由磷酸二氢钾标准曲线查出样品中植酸磷含量,再乘以因子3.55换算出植酸含量。③测铁分光光度法:移取含一定量植酸的样品溶液(含植酸0.2～1.0mg)于25ml比色管中,依次加入0.05%FeCl33ml,0.5%磺基水杨酸和缓冲液各5ml,再加蒸馏水定容至25ml.混匀后离心分离10min,取上清液,以试剂空白为参比,于500nm波长测其吸光度。由标准曲线查出植酸含量。④高压液相色谱法:取含植酸的样品溶液(植酸浓度为2～10g/L),通过0.45μm的醋酸纤维膜过滤,用10μl微量注射器,吸取滤液直接注入高压液相色谱仪内测定。色谱柱为ZorboxC8,流动相为0.025mol/LKH2PO4水溶液,流速为0.5ml/min,于254nm处测出植酸色谱峰的峰面积,由标准曲线查出植酸含量。1.3统计处理结果用x¯±sx¯±s表示,组间比较采用方差分析。2结果2.1采用分光光度法测定了不同植物酸的标准溶液不同植酸标准品实测含量与标签含量的差异程度不同,其中Aldrich植酸的差值最小。见表1.2.2硝酸盐滴定法与其他方法所测结果比较,见表1同种样品不同测定方法所测结果的差别均呈高度显著性(F=126.44～408.31;P均<0.001),经两两比较,硝酸钍滴定法所测结果均高于其他3种方法,差别均呈高度显著性(q=22.23～41.49,P均<0.001);其他3种方法的结果差别均无显著性(q=0.46～2.89,P均>0.05)。见表2.3讨论3.1两种植酸标准品的比较本文结果显示,不同植酸标准品实测含量与标签含量不同,其中以Aldrich植酸和Sigma植酸钠差值较小,适宜作为植酸标准品,而上海植酸和Fluka植酸的差值较大,不宜作为植酸标准品。本文结果为正确选用植酸标准品提供了依据,同时建议尽快确立统一的植酸标准品。3.2测磷分光光度法硝酸钍滴定法结果偏高,其原因可能是将样品中的植酸和无机磷同时测定,未能正确反映植酸的实际含量,但由于该方法操作简单快速,故适合于无植酸标准品情况下高含量分析及工业生产的快速粗略检测。测磷分光光度法采用高纯度磷酸二氢钾为标准,测定准确度高,精密度好,但消化较麻烦,适合于无植酸标准品的测定及微量测定。测铁分光光度法采用植酸为标准,测定准确度与测磷法相近,但它不需消化