草珊瑚总黄酮提取及含量检测

草珊瑚总黄酮提取及含量检测（一）【摘要】目的研究草珊瑚总黄酮的提取工艺。方法以草珊瑚为原料，用乙醇为溶剂，利用超声波辅助提取和水浴法提取草珊瑚总黄酮，利用L9（33）正交实验方法优化总黄酮提取工艺，采用单因素实验，测定了乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度等单因素实验，考察总黄酮提取率与各因素的关系。根据单因素实验得出的显著条件进行正交设计，确定最佳工艺条件。结果超声波法的最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1：15、提取时间45min,根据确定的最佳工艺条件，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量为69.25mg/g。水浴法的最佳工艺条件为乙醇浓度50%、料液比1：20、提取温度80C、提取时间2h，按实验中的测定方法测得提取的总黄酮含量49.60mg/g。结论超声波提取不仅在时间上比水浴提取大大缩短，而且实验过程易于控制，黄酮提取率也比水浴提取提高28.38%。TOC\o"1-5"\h\z【关键词】草珊瑚；总黄酮；提取工艺；含量〔 Abstract 〕ObjectiveTooptimizetheextractionprocessoftheflavonoidsfromsarcandraglaber.MethodsUsedsarcandraglaberasrawmaterials ,tookethanolextractionmethodsandusedultrasonicwaterbathtoextracttheflaVxtaeoiii（sedL9（ 33 ）orthogonalexperimenttooptimizetheextractionprocessofflavonoids.Oneoftheexperimentsisthesinglefactorexperiment.Accordingtothegivenconditionsandmeasuredflavones ,whatwewilldoistohavesinglefactorexperimentsaboutdifferentconcentratiopsfetaaiiiolextractiontimeandtemperature.Accordingtotheremarkableconditionsfromsinglefactorexperiments ，wewillhaveanorthogonaldesignandthenselectthebestconditions.ResultsTheoptimumconditionsofultrasonicmethodsarefortheconcentrationof50percentethanol feedrate!15 ，theextractedtime45minutes ，theflavonesin69.25mg/g.Theoptimumconditionsofwaterbathforethanolmethodsareforconcentrationof50percent ， feedratel20 ，theextractedtemperaturd80andtheflavonesin49.60mg/g.ConclusionThetimeusedinultrasonicextractionisgreatlyshorterthanthatofwaterbathandtheexperimentiseasiertocontrolthanthatofwaterbath,andtheextractionrateofflavonoidsalsoraise28.38%thanthatofwaterbath.〔Keywords〕sarcandraglaberflavonoidsextractionprocejssontent随着草珊瑚在医药、兽药、保健食品及保健用品领域中的应用越来越广泛，对其有效成分的提取分离显得越来越重要。黄酮类化合物是草珊瑚中含量最多、最主要的活性成分之一。目前，对草珊瑚总黄酮的提取分离工艺技术研究尚未见有详细报道，本学位论文拟对草珊瑚总黄酮提取分离工艺技术进行较系统的研究并筛选最佳新技术新工艺。采用正交实验方法考察沸水提取法及乙醇提取法对草珊瑚总黄酮提取效果的影响;采用中药高新工程技术大孔吸附树脂对草珊瑚总黄酮进行分离纯化研究，以确定草珊瑚总黄酮最佳提取分离工艺条件及方法。以确定的草珊瑚总黄酮最佳提取工艺对不同季节采收的草珊瑚中总黄酮含量的动态变化，草珊瑚自然存放时间不同对总黄酮含量的影响，贵州草珊瑚根、茎、叶中总黄酮的不同含量进行动态变化研究，以确定草珊瑚原料的最佳利用时机。从而为生产中最有效的开发利用草珊瑚，获得草珊瑚总黄酮的最大提取率，发挥草珊瑚的最大经济效益提供实验依据及指导，以达到提升草珊瑚药、食用产品的质量档次，使其更具三效（高效、速效、长效），三小（剂量小、毒性小、不良反应小），三便（便于贮藏，便于携带，便于服用）的特点，使其产品能走出国门、出口创汇，有着重要的经济和社会意义〔1〕。1材料与方法1.1实验材料原料:草珊瑚购于贵阳花果园药材市场；NaNO2（固体）（重庆北碚精细化工厂）；95%的乙醇溶液（分析纯）（遵义国营化学试剂厂）；Al（NO3）3（固体）（汇源化工有限公司）；NaOH（固体）（天津市化学试剂六厂三分厂）。1.2实验器材HH-S2s型恒温水浴锅（金坛市环保仪器厂）；UV2755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；抽滤机（金宇机械有限公司）；JY88（96）-IIN型数控超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技有限公司）;FA1004型电子分析天平（上海天平仪器厂）。1.3实验方法1.3.1黄酮类化合物的超声波法提取研究超声波提取方法：取原料草珊瑚5g按实验要求的料液比加入乙醇，放入准备好的烧杯中，超声波提取，抽滤液体，取0.3m】加入25ml容量瓶中，再在25ml容量瓶中加入1ml5%的NaNO2溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入0.5ml5%的Al（NO3）3溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入10ml5%NaOH溶液，并加入60%乙醇溶液定容。等待15min后在500nm处检测吸光度，然后记录数据〔做空白对比的不加Al（NO3）3〕。超声波提取过程：（1）称取草珊瑚5g分别装入准备好了的烧杯中，在烧杯上填上编号，并记录好数据。（2）用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中。（3）根据以上配置好的原料，放入超声波仪器中进行提取。（4）将以上提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。1.3.2黄酮类化合物的水浴提取研究取原料草珊瑚5g按实验要求的料液比加入乙醇，放入锥形瓶中，水浴锅加热，抽滤液体，取0.3m】加入25ml容量瓶中，再在25ml容量瓶中加入1ml5%的NaNO2的乙醇溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入0.5ml5%的Al（NO3）3的乙醇溶液，等待6min后，再在25ml容量瓶中加入10ml5%NaOH的乙醇溶液，并加入60%乙醇溶液定容。等待15min后在500nm处检测吸光度，然后记录数据〔作空白对比的不加Al（NO2）3〕。水浴提取的实验过程为：（1）称取草珊瑚5g分别装入准备好了的锥形瓶中，在锥形瓶上填上编号，并记录好数据；（2）用95%乙醇分别配制50%、60%、70%、80%的乙醇，按正交实验设计搭配装入对应号的锥形瓶中，并用保鲜膜密封好；（3）把锥形瓶放入已准备好的一定温度的水浴中加热，2h后取出抽滤液体转入干净的烧杯中，并用保鲜膜密封好；（4）将以上的提取物过滤，将滤液按照实验方法测出吸光度，并记录好数据。2实验结果与讨论2.1标准曲线的制备见图1。从芦丁对照储备液中分别吸取1ml，放入1号、2号容量瓶中（25ml），各加60%乙醇至5ml，加5%NaNO2溶液1.0ml，摇匀方攵置6min，再加10%Al（NO3）3溶液0.5ml（空白对照不加），摇匀再放置6min，加4%NaOH溶液10ml，摇匀放置15min，从400—600nm处测吸光值：可得出芦丁在500nm处存在最大吸收峰。回归方程：A=0.0095C+0.0016线性范围为0—59.82〃g/ml相关系数R2=0.9991图1标准工作曲线首先，精密称取芦丁对照品18.6mg，置于100ml量瓶中，加60%乙醇溶解至刻度，摇匀即得对照品溶液。然后，分别精密吸取1.。2.（、3.0.4.0和5.（、6.0.7.（、8.0ml对照品溶液置于25ml容量瓶中，各加60%乙醇至5ml，加5%NaNO2溶液1.0ml，摇匀放置6min，再加10%Al（NO3）3溶液0.5ml，摇匀再放置6min，加4%NaOH溶液10ml，摇匀放置15min，在500nm波长处测定吸光度值，以同法配制空白（不加硝酸铝）对照。显色剂的配置：含量测定，标准曲线的绘制。所用试剂均为分析纯，4%NaOH乙醇溶液（200ml）：称取8gNaOH置入烧杯中，用200ml60%乙醇溶解。10%Al（NO3）3乙醇溶液（25ml）:称取2.5gAl（NO3）3置于烧杯中，用25ml60%乙醇溶解。5%NaNO2乙醇溶液（50ml）：称取2.5gNaNO2置于烧杯中，用50ml60%乙醇溶液溶解〔2〕。2.2黄酮提取过程2.2.1提取方法（1）超声波提取：精密称取干燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于烧杯中，按实验要求的料液比加入乙醇溶液浸泡，然后用超声波提取。（2）水浴法提取：精密称取干燥、粉碎的草珊瑚粉末5g置于锥形瓶中，按实验要求的料液比加入乙醇溶液浸泡并用保鲜膜密封好，然后放在水浴锅上加热2h，滤去残渣。2.2.2羊品测定精密吸取黄酮提取液0.3ml于25ml容量瓶中，分别加入60%的乙醇6ml，再加入5%NaNO21.0ml，摇匀放置6min，加入10%Al（NO3）30.5ml（做空白对照的不加），摇匀放置6min，加入4%NaOH10.0ml，加入60%的乙醇定容至刻度。摇匀放置15min在500nm处测吸光度，利用标准回归方程计算出浓度。得到标准曲线回归方程：A=0.0095C+0.0016相关系数R2=0.9992根据标准方程可以推导出C=（A-0.0016）/0.0095C为物质浓度（单位为Mg/ml,提取黄酮的质量（mg）=C25/3HQV10-3提取总黄酮含量=提取黄酮的质量（mg）/原料草珊瑚质量（g）。2.3超声波法提取黄酮的单因素实验设计及正交实验数据处理2.3.1乙醇浓度对超声波法提取效果的影响在五个烧杯中各取5g草珊瑚放入，分别用40%、50%、60%、70%、80%乙醇溶液50ml浸泡后超声波萃取15min，按以上的含量测定方法测定吸光度值。见表1。表1表明：随着乙醇浓度的增加，黄酮的提取率也逐渐增加，但是当乙醇浓度超过60%的时候，黄酮的提取率反而降低，是因为随着乙醇浓度的增大，会使提取粗品中杂质含量增加，黄酮成分含量反而降低。表1乙