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实验五蛋白质及氨基酸的呈色反应实验五1实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位和主要连接方式2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法实验目的2实验原理(一)双缩脲反应(Biureareaction)所谓双縮脲反应是指在碱性条件下,双缩脲与二价铜离子作用,生成紫红色配合物的反应。当加热至180℃左右时,两分子尿素缩合脱去一分子氨,生成双缩脲。在肽和蛋白质分子中具有肽键,其结构与双縮脲类似,也能发生此反应,生成蓝紫色或紫红色的配合物。该反应常用于蛋白质的定性或定量测定。应当指出,该反应的千扰因素较多,一些含有一个肽健和一个-C0NH2、-C-NH2、-CH2-NH2等基的物质也有双编脲反应。并且NH3对此反应具有严重的千扰,因为H3与铜离子可生成深蓝色的铜氨配合物。因此我们可以说蛋白质和多肽都有双缩脲反应,但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。此反应所产生颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质分子量及氛基酸成分无关。实验原理3NH2NH.NHNH3↑acNH双账NH3HCut,+hNNH昌喜♂需红色化合物NH24(二)茚三酮反应(Ninhydrinreaction)除脯氨酸、羟脯氨酸和革三酮反应生成黄色物质外,所有的a氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行,首先是氨基酸被氧化,产生CO2、NH3和醛,而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质.此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。该反应十分灵敏,1:1500000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应,因此是一种常用的氨基酸定量方法。但也有些物质对革三酮也呈类似的阳性反应,如β丙氨酸氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中,应严防干扰物存在(二)茚三酮反应(Ninhydrinreaction)5实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件6实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件7实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件8实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件9实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件10实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件11实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件12实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件13实验蛋白质及氨基酸呈色反应课件14实验

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