浙贝母三种炮制规格的质量评价

浙贝母三种炮制规格的质量评价

浙贝母是百合科植物浙贝母。我是ronima工具的干燥叶子。这是道地材料的“浙江八味”之一。主要产于金华省、宁波市殷墟地区。具有清热化痰止咳、解毒散结消痈等功效。主要有效成分为生物碱和皂苷,其中贝母素甲和贝母素乙的含量是《中国药典》规定检测的指标成分。近年来浙贝母的炮制方法不一,厚片在常规煎煮时常有白心难以煎透,影响药效。为了符合2009年国家中医药管理局颁布的《医疗机构中药煎药室管理规范》药料应充分煎透,做到无糊状块、无白心、无硬心的要求,本文通过HPLC-ELSD法检测浙贝母三种主流炮制规格(鲜切烘干薄片、鲜切无硫厚片、硫熏厚片)的贝母素甲、贝母素乙含量,明确质量最佳的炮制品;考察煎膏得率和有效成分含量的相关性,确定合理的煎煮方法。1实验材料1.1浙贝母常用植物生长特性同批浙贝母原药材均来自浙江磐安县新渥镇浙贝母标准化生产基地,由浙江中医药大学饮片厂郑建宝和温州市第三人民医院曾国武药师鉴定为百合科植物浙贝母FritillariathunbergiiMiq.的鳞茎。鲜切烘干薄片:原产地趁鲜切薄片,通过带式干燥机80℃干燥,外观平展呈黄白色;鲜切无硫厚片:原产地趁鲜切厚片,晒干,外观皱缩呈灰褐色;硫熏厚片:原产地趁鲜熏硫,切厚片,晒干,外观光洁呈粉白色。1.2测试剂1.3色谱加入系统U-3000高效液相色谱仪(配Chromeleon色谱工作站,美国戴安公司);AlltechELSD3300蒸发光散射检测器(美国奥泰科技有限公司)。2方法和结果2.1三种原料和一种浙江贝母饮料的有效成分含量2.1.1流动相、流速色谱柱:DIONEXAcclaimC18色谱柱(4.6mm×250mm,5um);流动相:乙腈-0.1%二乙胺(70:30);流速:1.0mL/min;ELSD条件:漂移管温度为42℃,载气(高纯N2)流速为1.0L/min。2.1.2对照品溶液的制备精密称取贝母素甲2.92mg、贝母素乙2.16mg置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成含贝母素甲0.292g/L、贝母素乙0.216g/L对照品溶液。2.1.3混合液-液法取各样品粉末(过四号药筛)约2g,精密称定,置烧瓶中,加浓氨试液4mL浸润1h,精密加入三氯甲烷-甲醇(4:1)的混合溶液40mL,称定重量,混匀,置80℃水浴中加热回流2h,放冷,再称定重量,加上述混合溶液补足减失的重量,滤过。精密量取续滤液10mL,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至2mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀过0.45μm微孔滤膜即得。每个样品平行制备两份供试液。2.1.4外标法测定贝素甲、苯乙的含量分别精密吸取对照品溶液5μL、10μL、20μL,供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,每份样品液进样两次测定,用外标法对数方程分别计算各样品贝母素甲、贝母素乙的含量。2.1.5标准曲线的绘制分别进样对照品溶液5μL、10μL、20μL各测定两次,以进样量(μg)对数值为横坐标,峰面积对数值为纵坐标绘制标准曲线。得到贝母素甲的线性方程为Y=1.3032X+0.9163(r=0.09996);贝母素乙的线性方程为Y=1.3858X+0.0.8261(r=0.09997)。浙贝母的三种炮制规格中,鲜切无硫厚片的贝母素甲和贝母素乙的含量最高,见表1。2.2制备0.5%小糖酸钠的最佳配方精密称取浙贝母鲜切无硫厚片10g,分别置于烧杯中浸泡0.5h、1h、2h后煎煮两次:第一次加10倍量的水煎煮30min,不时补足水量;第二次加8倍量的水煎煮15min,不时补足水量。煎煮后药渣称重,用剪刀小心剥离出白心部分,60℃烘干3h后称重,比较白心部分占所取饮片的质量比率;煎液分别用三层纱布过滤,合并滤液浓缩至适量置以干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105℃干燥3h,置干燥器中冷却30min,迅速精密得到煎膏重量,并计算煎膏占饮片的含量(煎膏得率)。每种浸泡时间平行制样两份。2.2.2外标法测定贝素甲和方案取前面制得的各煎膏加2%HCl溶解,酸水溶液以石油醚萃取,弃去石油醚层,以氨水调pH值至9以上后再以氯仿萃取,取氯仿萃取液合并后水浴蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移2mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀过0.45μm微孔滤膜即得供试品溶液。按同样的色谱条件,取各供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,每份样品液进样两次测定,用外标法对数方程分别计算各样品贝母素甲、贝母素乙的含量。随着浙贝母鲜切无硫厚片浸泡时间的延长,煎煮后药渣的白心比率降低,而煎膏得率及其中贝母素甲、贝母素乙总含量均是增高,见表2,图1。3特性的筛选和条件确定通过HPLC-ELSD法检测浙贝母三种主流炮制规格的贝母素甲、贝母素乙含量,结果鲜切无硫厚片>硫熏厚片>鲜切烘干薄片,而且其单独含量和总量都是上述的排序,初步判定,鲜切无硫厚片质量最佳,硫磺熏蒸次之,后者虽然饮片外观美白,有一定的防霉作用,但有效成分含量降低,残留硫有损人体健康,不宜采用;鲜切烘干薄片有效成分含量最低,可能是浙贝母生物碱不耐高温的原因,建议采用低温干燥技术。浙贝母的煎膏量与有效成分含量成正相关。浙贝母饮片在常规煎煮前应先浸泡1h以上,才能使有效成分溶出更多。建议将“厚片”改为“薄片”,避免饮片白心、硬心、煮不透,这样既能提高临床疗效,又能节约资源。本文通过摸索一系列的漂移管温度和载气流速,比较对照品溶液的图谱响应值和峰面积大小,最终确定漂移管温度42℃、载气(高纯N2)流速1.0L/min为最佳ELS