液体活检在NSCLC诊疗中的应用

液体活检

在NSCLC诊疗中的应用周燕斌中山大学附属第一医院

呼吸内科精准医疗时代NSCLC诊疗面对的困境精准医疗时代下NSCLC诊疗面对的困境约1/3晚期NSCLC患者无法获得足够用于检测的组织样本肿瘤的异质性NEnglJMed.2012Mar8;366(10):883-92

不同患者的分子遗传信息个体差异明显；

同一患者的疾病不同部位分子遗传信息存在差异；

同一患者的疾病不同阶段分子遗传信息存在差异；

实时肿瘤个体化治疗依赖于由实时样本提供实时分子遗传信息；肿瘤实时个体化治疗精准医疗时代下NSCLC诊疗的临床问题约1/3晚期NSCLC患者无法获得用于检测的组织样本组织异质性，活检样本无法反映肿瘤突变的全貌时空异质性，无法实时监测患者的病情血液标本是首选的实时样本！什么是液体活检

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84游离DNActDNA和cfDNACTC循环肿瘤细胞什么是液体活检？SchwarzenbachH,etal.Nat.Rev.Cancer.2011,11,426循环肿瘤DNA（CirculatingTumorDNA）循环肿瘤DNA（ctDNA)携带有实体瘤细胞基因突变/变异、甲基化、微卫星序列改变等信息游离DNA（cfDNA）CellfreeDNA，外周血中一种无细胞状态的胞外DNAKrebsetal.,NatRevClinOncol.2014;11(3):129-44.保留完整的细胞形态，可以提供数量、遗传、细胞生物学特性等信息，指导预后循环肿瘤细胞（CirculatingTumorcells，CTC）ctDNA与CTC在临床应用中的比较类别临床应用优势临床应用劣势CTCs有完整的细胞形态疾病转移或进展的预后判断下游基因检测或免疫研究可体外培养低丰度和易破碎CTC分离，步骤繁琐假阳性和假阴性，表面抗原CTC的异质性ctDNA数量多，容易检测多可克服异质性检测到疾病进展更加敏感基因检测指导用药可能影响治疗方案假阳性和假阴性无法分离ctDNActDNACTC异质性无有技术难点灵敏度CTC分离，灵敏度检测内容基因突变，突变丰度，浓度数量，基因突变临床应用伴随诊断指导用药预后预后动态监测ctDNA检测的临床应用更加简单、成熟ctDNA与CTC技术指标比较ctDNA的特点—片段化Heitzeret.al.,ClinicalChemistry2015,61(1)：112–123提示其来源为坏死和凋亡细胞ctDNA的特点—个体差异大肿瘤患者体内ctDNA浓度0.01-90%不等，与临床分期、分化程度密切相关Guoetal.,OncoTargetsTher.2015Nov6;8:3289-3296.Bettegowdaetal.,SciTranslMed.2014February19;6(224):224ra24如何检测ctDNA的特点—代谢快半衰期约2h，可以实时反映肿瘤的变化情况

Crowleyet.al,Nat.Rev.Clin.Oncol.，2013Aug;10(8):472-84ab现有检测技术比较技术检出限检测区域技术特点Sanger>10%全基因序列双脱氧链终止法qPCR1%已知位点荧光素标记ARMSPCR0.1%已知位点扩增阻滞突变NGS0.1-1%全基因序列SBS/半导体测序数字PCR0.01%或更低已知位点微滴反应数字PCR：超灵敏的精确定量方法“Divide

and

Conquer”

Digital

PCR是一种基于单分子模板PCR扩增，进行核算拷贝数精确定量的分析方法数字PCR平台结果判读可检测低至0.04%的EGFR790M突变更高灵敏度更适合ctDNA的检测精确定量更适合做动态监测操作简便，周期短适合临床应用数字PCR与其他方法的比较Thressetal.,LungCancer,2015,90(3):509-515驱动基因并行检测与NSCLC治疗Shamesetal.,JPathol.2014Jan;232(2):121-33一代EGFRTKI和克唑替尼获得性耐药机制Camidgeetal.,NatRevClinOncol.2014Aug;11(8):473-81.EGFRTKI耐药机制：信号通路KRAS等