微生物基础知识

1微生物基础知识2编辑ppt2要点提纲凝集试验金黄色葡萄球菌大肠埃希菌乙型溶血性链球菌白色假丝酵母菌编辑ppt3凝集试验凝集试验：颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。数分种后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便快速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。

编辑ppt4正离子负离子层负电荷负电荷抗原㈠负电荷

抗原

细菌和红细胞等颗粒抗原在悬液中带弱负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子层，构成一个双层离子云。在松散层内界和外界之间的电位差形成Z电位。溶液中的离子强度愈大，Z电位也就愈大。Z电位使颗粒相互排斥。当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒聚集在一起编辑ppt5抗原抗体反应的原理基本原理：特异性（AD----HVR）可见性（凝集、沉淀、溶血等）结合力(4种)编辑ppt6高度互补紧密接触产生结合力抗原

抗体带电离子异性相吸静电引力分子极化范德华引力形成氢键氢键引力形成疏水基团疏水作用力作用最小最具特异性作用最大抗原抗体结合可见反应比例合适编辑ppt7编辑ppt8血型血型红细胞抗原血清中的抗体AABBBAABAB无ABO无ABAB血型是指血液成分（包括红细胞、白细胞、血小板及血浆蛋白）表面的抗原类型。通常所说的血型是指红细胞膜上特异性抗原类型，而与临床关系最密切，人们所熟知的是红细胞ABO血型系统及Rh血型系统。编辑ppt9金黄色葡萄球菌定义：在BairdPaiker培养基或血平板上生长良好，分解甘露醇产酸，血浆凝固酶阳性，革兰氏阳性葡萄状球菌。（GB/T18204.4-2013)标准限值：《理发店、美容店卫生标准》9666-1996规定美容工具、理发工具、胡刷用后应消毒，不得检出大肠菌群和金黄色葡萄球菌。

编辑ppt10生物学性状形态和染色革兰氏染色阳性，球形，直径约1微米，呈葡萄串状排列。无芽孢，无鞭毛，无荚膜。在某些化学物质如青霉素作用下，可裂解或变成L型菌。在衰老、死亡、陈旧培养物中或被中性粒细胞吞噬后常转为革兰阴性。培养特性需养或兼性厌氧。营养要求不高，普通培养基37摄氏度生长良好。生化反应多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病性菌株能分解甘露醇，产酸。触酶（过氧化氢酶）阳性，可与链球菌相区分。编辑ppt11所致疾病化脓性感染皮肤化脓性感染、各种器官化脓性感染、全身感染如败血症、脓毒血症毒素性疾病食物中毒、烫伤样皮炎综合征、毒素性休克综合征编辑ppt12毛囊炎脓疱疮编辑ppt13金葡菌性烫伤样皮肤综合征编辑ppt14微生物学检测增菌：氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤接种BP或血平板革兰氏染色、镜检甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验编辑ppt15增菌：氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤

编辑ppt16接种BP或血平板编辑ppt17革兰氏染色、镜检：革兰阳性、葡萄串珠状球菌革兰染色：结晶紫染色卢氏碘液媒染酒精脱色沙黄复染编辑ppt18金黄色葡萄球菌电镜观察葡萄串珠状球菌编辑ppt19甘露醇发酵试验编辑ppt20血浆凝固酶试验0.5ml灭菌生理盐水与冻干血浆混匀溶解，挑取适量菌苔与溶解血浆混匀，36℃培养，6小时内观察，如果血浆里有凝块现象，即为凝固酶阳性。编辑ppt21肠杆菌科细菌是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居在人和动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中。目前已有44个属，170多个种。但该科引起人类95％以上感染的菌种却不到20个。编辑ppt22肠杆菌科细菌共同生物学特性：1.形态与结构中等大小G－杆菌。大多有菌毛，多数有周鞭毛，少数有荚膜，不产生芽胞。2.培养兼性厌氧或需氧。3.生化反应乳糖发酵试验可初步鉴别志贺菌、沙门菌等致病菌和其他大部分非致病肠道杆菌，前二者不发酵乳糖。4.抗原结构主要有菌体O抗原、鞭毛H抗原和荚膜抗原。5.抵抗力对理化因素抵抗力不强。6.变异肠杆菌科细菌易出现变异菌株，其中最常见的是耐药性变异。编辑ppt23埃希菌属埃希菌属（Escherichia）有6个种，只有大肠埃希菌（E.coli）是临床最常见、最重要的一个菌种。①大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群②在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机会致病菌，引起肠道外感染③一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎④在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检测指标。编辑ppt24志贺菌属感染几乎只局限于肠道，一般不侵入血液。典型的急性细菌性痢疾：潜伏期1～3天，突然发病，常有发热、腹痛、脓血黏液便，伴有里急后重（tenesmus）。

编辑ppt25沙门菌属1.肠热症(entericfever,

typhoidfever)

包括伤寒沙门菌引起的伤寒，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌（原称乙型副伤寒沙门菌）和希氏沙门菌引起的副伤寒。2.胃肠炎（食物中毒）常见食物主要为肉类食品、蛋类、奶和奶制品，系动物生前感染或加工处理过程污染所致。多见于老人、婴儿和体弱者。3.败血症多见于儿童和免疫力低下成人。经口感染后，病菌即侵入血循环。败血症症状严重4.无症状带菌者

约1％～5％伤寒或副伤寒患者，在症状消失后一年仍可在其粪便中检出沙门菌，转变为无症状（健康）带菌者。编辑ppt26其他菌属一、克雷伯菌属二、变形杆菌属三、肠杆菌属四、沙雷菌属五、枸橼酸杆菌属六、摩根菌属编辑ppt27总大肠菌群一个卫生学概念，作为饮水、食品等粪便污染的指标之一总大肠菌群：指在37摄氏度24小时内发酵乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌（GB/T5750.12-2006之2.1）。包括埃希氏菌属、枸橼酸杆菌、克雷伯杆菌属及肠杆菌属等标准限值：《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006规定总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌不得检出编辑ppt28大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌多管发酵法：多管发酵法总大肠菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上44.5℃培养24小时产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌，以此来检测水中的大肠埃希氏菌的方法。（GB/T5750.12-2006之4.1）编辑ppt29大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌（E.coli）通常被称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核微生物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为6类：肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠出血性大肠杆菌（EHEC）、肠黏附性大肠杆菌（EAEC）和弥散粘附性大肠杆菌(DAEC)。编辑ppt30耐热大肠菌群和粪大肠菌群

北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。

项目依据定义耐热大肠菌群NMKL、ISO在44.5℃培养，24h天内能产酸产气的细菌粪大肠菌群NMKL在胰蛋白胨肉汤中于44.5℃，24h内产生吲哚的耐热大肠菌群AOAC于LST中36℃培养48h内产气，并于EC内培养44℃24h产气的一群细菌编辑ppt31在认证活动中，经常有实验室将耐热大肠菌群等同于粪大肠菌群，标准的解释比网络解释更具权威性。编辑ppt32耐热大肠菌群的卫生学意义

作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。

作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。

通常情况下，耐热大肠菌与大肠菌群相比，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐热大肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而，耐热大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。

耐热大肠菌群比大肠菌群能更贴切地反应食品受人和动物粪便污染的程度，且检测方法比大肠杆菌简单地多，而受到重视编辑ppt33总大肠菌群的检测（GB/T5750.12-2006之2.1）乳糖发酵试验（15管法）：根据污染程度，对水样进行稀释，选择3个适当的稀释度，每个稀释度接种5管。培养基：乳糖蛋白胨培养液，有单料、双料之分。（GB/T18204.4-2013检测用品用具的大肠菌群用到的是乳糖胆盐发酵培养基）分离培养：伊红美蓝培养，革兰氏染色，镜检证实试验：挑取以上革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落，进行乳糖蛋白胨培养液复发酵。编辑ppt34乳糖发酵编辑ppt35接种EMB培养基深紫黑色，有金属光泽的菌落深紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落淡紫红色，中心较深的菌落编辑ppt36革兰氏染色、镜检：革兰阴性、无芽孢杆菌编辑ppt37证实试验初发酵产酸产气，革兰氏染色阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖发酵管，37摄氏度24小时产酸产气者，即证实为有大肠菌群存在编辑ppt38结果报告查MPN（MostProbleNumber，最可能数）检索表，报告每100ml水样中的总大肠菌群可能数MPN稀释样品查表后乘以稀释倍数报告之所有乳糖发酵管均阴性时，报总大肠菌群未检出MPN检索表应用到的是泊松分布的统计方法编辑ppt39β-溶血性链球菌

集中空调通风系统送风中采集的样品，经35~37℃，24~48h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落。（WS394-2012附录F）标准限值：WS394-2012规定β-溶血性链球菌不得检出编辑ppt40根据溶血现象将练球菌分类溶血环现象名称类别致病性草绿色溶血环α溶血甲型溶血性链球菌多为条件致病菌完全溶血环β溶血乙型溶血性链球菌溶血性链球菌致病力强不溶血丙型链球菌不溶血性链球菌无致病性编辑ppt41A群（化脓性）链球菌（β溶血性链球菌）

本属细菌的代表种，致病性强，对人致病的链球菌有90%属此种。

编辑ppt421.形态与染色

球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性（G＋），无芽胞，无鞭毛。

编辑ppt432.培养要求高：血平板或含血清培养基3.生化反应分解葡萄糖，产酸不产气。分解葡萄糖。不分解菊糖，不被胆汁溶解（可鉴别甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。链球菌不产生触酶，与葡萄球菌不同。编辑ppt444.抵抗力

一般链球菌均可在60℃被杀死，对常用消毒剂敏感。在干燥尘埃中生存数月。乙型链球菌对青霉素、红霉素，四环素、杆菌肽和磺胺药都很敏感。编辑ppt455.所致疾病A群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染的90%

淋巴管炎、蜂窝组织炎、扁桃体炎等。猩红热（红色杨梅舌）(3)超敏反应性疾病(1)化脓性感染(2)中毒性疾病风湿热急性肾小球肾炎编辑ppt466.血平板培养35-37℃,24-48小时。灰白色，0.5-0.7mm菌落，表面光滑有乳光，周围有2-4mm完全透明溶血环。编辑ppt477.革兰染色、镜检

革兰阳性无芽孢球菌，