147个藜芦生物碱成分的分离与鉴定

147个藜芦生物碱成分的分离与鉴定

富士李天竺葵和水生李地鲁酯是又名的。分布于江西省、浙江省、安徽省、福建省、湖北省、广东省和广东省其他省区。与黎芦(V.nigrumL.)、毛叶黎芦(V.grandiflorumLoes.f.)、蒙自黎芦(V.mengtzeanumLoes.f.)、狭叶黎芦(V.stenophyllumDiels)、大理黎芦(V.talienseLoes.f.)、毛穗黎芦(V.maackiiRegel)、兴安黎芦(V.dahuricumLoes.f.)、黑紫黎芦(V.japonicumLoes.f.)等统称为中药藜芦入药应用。我国有20余种藜芦植物,经研究比较发现藜芦属植物品种不同其生物碱化学结构差别较大,为了安全、合理用药,值得深入研究。目前对于天目藜芦生物碱的研究报道较少,朱任宏等从中分离得到天目藜芦碱甲和天目藜芦碱乙(仅报道化学组成C27H43ON、C34H51O8N,未鉴定分子结构)。赵伟杰等分离鉴定了其中的一种生物碱当归酰棋盘花胺(angeloylzygadenine)。笔者对天目藜芦生物碱成分进行了研究,分离得到了多个甾体生物碱,根据其理化性质和光谱数据分析鉴定,化合物Ⅰ～Ⅴ分别是:异红介藜芦碱(isorubijervine)、藜芦胺(veratramine)、介藜芦碱(jervine)、藜芦酰棋盘花碱(veratroylzygadenine)、藜芦托素(veratrosine)。上述5个化合物均为首次从该植物中分离得到。1体外仪器测定BüchiB-540显微熔点测定仪(温度未校正),BrukerAMX500超导核磁共振仪,MicromassLCT液相色谱-质谱联用仪,色谱用硅胶板GF254(青岛海洋化工厂),实验用原植物采自浙江天目山,经上海中医药大学周秀佳、李西林教授鉴定为天目藜芦(VeratrumSchindleriLoes.f.)。2氯的提取物的制备天目藜芦干燥根800g,粉碎后乙醇冷浸3次,减压回收乙醇得浸膏120g。5%酒石酸水溶液处理,过滤除去不溶物。滤液调节至pH4,用乙醚萃取3次,乙醚层通过干燥后,减压回收溶剂。水相用氨水碱化至pH10,然后以氯仿萃取3次,无水硫酸钠干燥,减压回收溶剂,得到氯仿萃取物15g。柱色谱分离上述氯仿萃取物,分别采用石油醚-丙酮-二乙胺及氯仿-甲醇-二乙胺系统梯度洗脱,TLC检测合并相同流分,分得化合物Ⅰ(25mg),Ⅱ(900mg),Ⅲ(80mg),Ⅳ(12mg),Ⅴ(60mg)。3c-nmr的合成化合物Ⅰ:无色针状结晶(石油醚-丙酮),mp215.2～217.8℃,Dragendorff试剂显黄色。EI-MSm/z(%)413(M+3.10),398(3.45),383(2.70),275(3.16),164(1.48),150(8.23),125(100),98(32.51),推测其分子式为C27H43NO2。13C-NMR(500MHz,CDCl3)δ:37.28(C1),33.04(C2),71.75(C3),42.37(C4),140.87(C5),121.41(C6),31.98(C7),30.77(C8),50.49(C9),36.71(C10),21.30(C11),36.71(C12),45.47(C13),57.25(C14),29.39(C15),68.38(C16),62.28(C17),62.96(C18),19.37(C19),35.95(C20),19.23(C21),73.77(C22),30.48(C23),31.69(C24),31.76(C25),57.77(C26),19.31(C27)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ:0.84(3H,d,J=6.2Hz,C21),1.01(3H,d,J=6.7Hz,C27),1.03(3H,s,C19),3.50(H,m,C3)。以上数据与文献对照相符,推定化合物结构为异红介藜芦碱(isorubijervine)。化合物Ⅱ:无色细针状结晶(石油醚-丙酮),mp203.5～205.1℃,Dragendorff试剂显黄色。ESI-MS:m/z410[M+H]+,推测其分子式为C27H39NO2。13C-NMR中的低场信号δ133.34,143.71,144.60,120.55,125.95,140.99,提示有一四取代苯环存在,在低场中另外的信号δ143.01,121.66,提示有环双键存在,13C-NMR(500MHz,CDCl3)见表1。对照参考文献,与藜芦胺(veratramine)及其异构体20-异藜芦胺(20-isoveratramine)接近。通过HMQC及1H-NMR,H-20与H-22存在明显的耦合作用,H-20(qd,J=7.1,4.6Hz);H-22(dd,J=9.1,4.5Hz)与藜芦胺(veratramine)的文献报道一致。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.84(3H,d,J=6.6Hz,C27),1.14(3H,s,C19),1.39(3Hd,J=7.2Hz,C21),2.32(3H,s,C18),3.50(H,m,C3)。根据以上数据分析,确定该化合物结构为藜芦胺(veratramine)。化合物Ⅲ:无色针状结晶(石油醚-丙酮),mp236.2～238.0℃,Dragendorff试剂显黄色,UVλmax=250.1nm,ESI-MS:m/z426[M+H]+,推断分子式为C27H39NO3。化合物Ⅲ的13C-NMR在低场δ:207.54,137.87,140.55,结合紫外吸收可推断此结构中存在α、β不饱和共轭双键。13C-NMR(500MHz,CDCl3)δ:37.51(C1),31.90(C2),72.42(C3),42.16(C4),143.01(C5),121.66(C6),31.42(C7),38.63(C8),63.25(C9),37.74(C10),207.54(C11),137.87(C12),140.55(C13),45.58(C14),25.07(C15),31.70(C16),86.22(C17),12.83(C18),19.19(C19),41.12(C20),11.50(C21),67.33(C22),77.18(C23),39.64(C24),32.30(C25),55.45(C26),19.52(C27)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ0.95(3H,d,J=6.4Hz,C27),0.96(3H,d,J=6.9Hz,C21),1.01(3H,s,C19),2.18(3H,s,C18)。以上数据与文献对照相符,此化合物为介藜芦碱(jervine)。化合物Ⅳ:无色针状结晶(石油醚-丙酮),mp260.2～262.5℃,Dragendorff试剂显黄色,IRνmaxcm-1:3460,2960,2930,2850,2760,1720,1610。ESI-MS:m/z658[M+H]+。13C-NMR(500MHz,CDCl3)δ:33.53(C1),27.56(C2),76.65(C3),105.62(C4),47.22(C5),19.72(C6),17.90(C7),44.70(C8),96.96(C9),46.56(C10),33.95(C11),47.07(C12),34.88(C13),81.46(C14),70.44(C15),70.99(C16),45.05(C17),62.38(C18),19.72(C19),73.98(C20),20.53(C21),70.55(C22),19.13(C23),29.67(C24),28.11(C25),62.08(C26),17.78(C27),167.88(C1′),123.04(C2′),110.99(C3′),149.50(C4′),154.16(C5′),113.07(C6′),124.50(C7′),56.77(COMe-4′),56.77(COMe-5′)。1H-NMR(500MHz,CDCl3):δ1.01(3H,s,C19),1.08(3H,d,J=7.1Hz,C27),1.23(3H,s,C21),3.93(3H,s,OMe-4′),3.95(3H,s,OMe-5′)。以上数据与文献对照相符,推定化合物结构为藜芦酰棋盘花碱(veratroylzygadenine)。化合物Ⅴ:白色针状结晶(MeOH),mp239.8～242.1℃,Dragendorff试剂显黄色,EI-MSm/z(%)571(M+0.50),457(0.38),392(0.40),279(1.24),114(100),推测其分子式为C33H49NO7。13C-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:100.83(单糖中与O连接的碳),73.44,77.05,70.11,76.77,61.09(单糖中其余5个碳),其余碳的化学位移与化合物Ⅱ