公开课讲课用微生物的实验室培养省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件

到当前为止，几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖都与微生物学相关第1页微生物类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌单细胞动植物如草履虫、单细胞藻类等无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻原核细胞◆微生物共同特点：个体微小、结构简单第2页1.细菌形态第3页拟核，大型环状DNA质粒(小型环状DNA，含抗生素等抗药性和固氮基因)其成份为肽聚糖2.细菌结构特殊结构第4页细菌主要是以二分裂方式进行增殖（如右图）3.细菌繁殖第5页芽孢

有些细菌在一定条件下，细胞里面形成一个椭圆形休眠体，叫做芽孢。芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣环境有很强抵抗力。（抗逆性极强）注：不是繁殖体第6页比如，有细菌芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，能够随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）时候，芽孢又能够萌发，形成一个细菌.第7页

真菌是经过产生大量孢子来繁殖后代，霉菌直立菌丝顶端生有孢子，蘑菇菌褶处也生有孢子，孢子随风飘散，在适宜环境条件下，能发育成一个新个体。单细胞酵母菌还可进行出芽生殖。孢子生殖和出芽生殖都是无性生殖。

第8页课题1微生物试验室培养专题2:微生物培养与应用第9页培养微生物需要处理两个问题是什么？1、为其提供适当营养条件和环境条件2、预防杂菌入侵培养基、培养条件无菌技术(取得纯净培养物）思索:第10页1.何为培养基？3.不一样培养基有不一样配方，不过其基本成份都相同，都包含哪些营养元素？有何作用？请举例说明。阅读教材P14~15相关内容，回答以下问题：

2.按照不一样培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？一、培养基第11页（一）培养基

培养基（培养液）是人们按照微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质1.培养基概念

第12页2.培养基种类液体培养基半固体培养基固体培养基据物理性质分天然培养基合成培养基据化学成份分选择培养基判别培养基基础培养基据用途分惯用于工业生产惯用于观察微生物运动、判定菌种用于微生物分离、计数用化学成份不明确天然物质配成如加入血清血浆等依据细胞生存所需要种类和数量用人工方法模拟合成在培养基中加入（或缺乏）某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需要微生物生长。比如，在培养基中加入青霉素，以抑制细菌、放线菌生长，从而分离到酵母菌和霉菌。又如，在培养基中加入高浓度食盐能够抑制各种细菌生长，但不影响金黄色葡萄球菌生长。依据微生物代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以判别不一样种类微生物。比如，在培养基中加入伊红和美蓝，能够用来判别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌：假如有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。含有普通微生物生长繁殖所需要基本营养物质（牛肉膏蛋白胨培养基）第13页液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长第14页半固体培养基：无动力有动力(弥散)第15页固体培养基：菌落第16页单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功效：1.定义：菌落判定菌种主要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体第17页几个菌落及其形态第18页几个菌落及其形态第19页3.基本成份：思索：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-糖类等含碳有机物质

自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-、N2

、NH3牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：有机C源为异养型微生物提供碳源和能源含CHON有机物是异养型微生物碳源、氮源、能源N2（固氮微生物唯一氮源）NH3（既是硝化细菌氮源又是能源）硝酸盐、铵盐几乎全部微生物能利用

不一样微生物往往需要采取不一样培养基配方第20页特殊营养物质：生长因子(3)常见生长因子：(1)概念：(2)作用：微生物生长不可缺乏微量有机物。酶和核酸组成成份。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。

一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子（4）起源：第21页注意：最惯用碳源是糖类，尤其是葡萄糖最惯用氮源是铵盐、硝酸盐对异养生物而言，含C、H、O、N化合物既是碳源，又是氮源，如蛋白质之所以补充生长因子，是因为缺乏合成这些物质酶或合成能力有限第22页另外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（如:生长因子)以及氧气等要求。第23页牛肉膏蛋白胨培养基是一个应用最广泛和最普通细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g分析营养组成？第24页

牛肉膏是用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到一个棕黄色至棕褐色膏状物。牛肉膏主要含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类水溶性物质。另外含硫氨酸较多，而且含有更多细菌生长需要维生素和其它生长因子，是生物制药发酵及和种培养基制备基础原材料。

蛋白胨是有机化合物。蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成外观呈淡黄色粉剂，含有肉香特殊气息。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它能够作为微生物培养基主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中用量均很大。第25页选择培养基加入青霉素培养基加入高浓度食盐培养基

不加氮源无氮培养基不加含碳有机物无碳培养基分离酵母菌、霉菌等真菌（抑制细菌、放线菌生长）分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物第26页4.配制标准

⑴目标明确：⑵营养全方面、浓度适宜、百分比恰当⑶适宜pH值：有机碳源异养型：依据微生物种类、培养目标选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）生产科研第27页C课堂练第28页２.自养型微生物与异养型微生物培养基主要差异是()A．碳源B．氮源C．无机盐D．特殊营养物质A课堂练第29页1.何为无菌技术？无菌技术包含哪些方面？2.什么是消毒？灭菌？二者有何区分？3.惯用消毒与灭菌方法有哪些？有何要求？4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法操作步骤。二、无菌技术阅读教材P15-P16相关内容，回答以下问题：

第30页取得纯净培养物关键是什么？二、无菌技术预防外来杂菌污染1.目标：2.方法：消毒与灭菌消毒与灭菌概念和区分？第31页

（１）消毒定义：

利用较为温和化学或物理方法，杀死大部份致病微生物过程。

2.消毒与灭菌概念及二者区分

第32页

（2）灭菌定义：

以强烈化学剂或物理方法毁灭全部微生物，包含全部细菌繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而到达完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物相关工作中最普通也是最主要技术。第33页1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min

或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(1)消毒方法：3.惯用消毒与灭菌方法第34页1、灼烧灭菌(2)灭菌方法：第35页2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.第36页

最惯用灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它能够杀灭全部生物，包含最耐热一些微生物休眠体，同时能够基本保持培养基营养成份不被破坏。有些玻璃器皿也可采取高温干热灭菌。为了预防杂菌，尤其是空气中杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采取适宜塞子塞口，通常采取棉花塞，也可采取各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气经过，而空气中其它微生物不能通过。培养基分装完成以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能预防杂菌污染，确保通气良好，加棉塞时，应使棉塞长度2／3在试管口内，如上图所表示。加棉塞第37页第38页高压蒸气灭菌原理是（）A．高压使细菌DNA变性B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌D．高温使细菌DNA变性B第39页关于灭菌和消毒不正确了解是A．消毒和灭菌实质上是相同B．灭菌是指杀死环境中一切微生物细胞、芽孢和孢子C．接种环用烧灼方法灭菌D．惯用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法A第40页1.无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。（1）培养细菌用培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）试验操作者双手答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考第41页2.无菌范围：试验操作空间消毒操作者手、衣着消毒试验用具灭菌试验操作过程二.无菌技术：预防外来杂菌污染1.消毒与灭菌：酒精灯旁操作超净工作台第42页三、试验操作（大肠杆菌纯化培养）（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）第43页1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．6

4．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引发污染。5．加塞6．包扎操作步骤第44页包器材第45页包器材第46页7．灭菌:

将装有培养基三角锥瓶，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。

8．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见书本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.9．无菌检验：

将灭菌未接种（或者接种无菌水）培养基放入37℃温室中培养24—48小时，以检验灭菌是否彻底。第47页第48页（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法微生物接种技术：原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来肉眼可见菌落，即取得较纯菌种。第49页涂布器接种环接种针第50页三.大肠杆菌纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌（目标）⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环预防划破培养基（重复试验）（空白对照）第51页问题讨论

1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？

答：操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。第52页2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。第53页6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液第54页第55页⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超出0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼冷涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍第56页问题讨论涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？

应从操作各个细节确保“无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。第57页⑴平板划线法：三.大肠杆菌纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.接种：⑵稀释涂布平板法：2.培养：将接种后培养基和一个未接种培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并统计第58页接种方法判断？？？第59页四.菌种保藏：1.暂时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长久保留：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃第60页本课题知识小结:第61页【典例解析】例:关于微生物营养物质叙述中，正确是()A.是碳源物质不可能同时是氮源

B.凡碳源都提供能量

C.除水以外无机物只提供无机盐

D.无机氮源也能提供能量解析：不一样微生物，所需营养物质有较大差异，要针对微生物详细情况分析。对于A、B选项，它表示是不完整。有碳源只能是碳源，如二氧化碳；有碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有碳源同时是能源，如葡萄糖；有碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外无机物种类繁多，功效也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量情况还是存在，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。D第62页例2：下面对发酵工程中灭菌了解不正确是()A.预防杂菌污染

B.毁灭杂菌

C.培养基和发酵设备都必须灭菌

D.灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程一个主要步骤。A说是灭菌目标，因为发酵所用菌种大多是单一纯种，整个发酵过程不能混入其它微生物（杂菌），所以是正确；B是错误，因为灭菌目标是预防杂菌污染，但实际操作中不可能只毁灭杂菌，而是毁灭全部微生物。C是正确，因为与发酵相关全部设备和物质都要灭菌；发酵所用微生物是灭菌后专门接种，灭菌必须在接种前，假如接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。B第63页编号成份含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml例3．右表是某微生物培养基成份，请据此回答：（1）右表培养基可培养微生物类型是

。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入

.（提醒：金黄色葡萄球菌具耐盐性）自养型微生物

含碳有机物

第64页（3）若除去成份②，加入（CH2O），该培养基可用于培养

。（4）表中营养成份共有

类。（5）不论何种培养基，在各种成份都溶