猪链球菌2型人工感染对balbc小鼠的致病作用

猪链球菌2型人工感染对balbc小鼠的致病作用

猪链霉菌2号在世界许多国家都有报道。近年来，这种疾病在中国的危害日益增强。一些猪关节炎、神经症状和并发症在一些车间出现。一些人导致当地感染和当地人感染。猪链球菌2型的致病性与它的毒力因子关系密切,其毒力因子比较复杂,有溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素和荚膜等,其中MRP、EF是许多致病性强毒株拥有而许多非致病性菌株没有的2个重要毒力因子。猪链球菌2型以常在菌的形式存在猪体某些部位,如扁桃体等。调查结果表明,从非疫区健康猪扁桃体所分离的猪链球菌2型菌多呈MRP-、EF-,而从疫区健康猪分离的多呈MRP+、EF+。通常认为该菌对猪、兔、山羊敏感,而对普通小白鼠、雏鸡、雏鸭、豚鼠等不敏感。该菌的动物致病性研究是对其毒力因子研究和疫苗研究的基础,为此我们选择了不同来源和不同MRP、EF表现型的5个菌株,对它们进行了BALB/c小鼠、猪、兔和普通小白鼠的致病性试验。1材料和方法1.1材料表面1.1.1子表现型及毒力因子SS2-1、SS2-H、SS2-006444株:均分离自发病猪内脏器官和组织,毒力因子表现型SS2-1、SS2-H株均为MRP+、EF+,SS2-006444株为MRP-、EF-;SS2-7株:分离于健康猪扁桃体,毒力因子表现型为MRP-、EF-;SS2-N株:从国内引进的参考株,毒力因子表现型为MRP+、EF*(为EF的类似物)。1.1.2体重5gBALB/c小鼠:购自南京军事医学研究所,小鼠体重15—20g;猪、普通小白鼠、兔:均为本所猪场和实验动物场提供,猪体重为50日龄,小白鼠体重为20g,兔体重为1.5—2.0kg。1.1.3h,h以单个菌落接种含2.0g/L葡萄糖、10mL/L牛血清的马丁肉汤,37.5℃培养18—20h;在进行人工感染前取细菌培养原液0.1mL加入灭菌生理盐水0.9mL,依次稀释至10-6,然后取0.2mL菌液涂布于已制备的血琼脂或巧克力琼脂平皿,在37℃培养18—20h后计算平皿上生长菌落,以其菌落数乘以0.5×107即为活菌浓度(CPU)。1.2方法1.2.1猪同剂量注射组猪:试验用猪12头,分为6组,2头/组,CPU依次为13.3×108/mL(原液组)、13.3×107/mL、13.3×106/mL、13.3×105/mL、13.3×104/mL和对照组,均为猪耳静脉注射,1mL/头,对照组猪同剂量注射灭菌生理盐水。兔和普通小白鼠:将培养菌液CPU调为8.0×108/mL,分别于兔背部皮下及小白鼠腹腔注射,1mL/只,2只/组。BALB/c小鼠:试验用小鼠10只,分为5组,2只/组,CPU依次为6.5×108/mL(原液组)、6.5×107/mL、6.5×106/mL、6.5×105/mL和对照组,均采用腹腔注射,1mL/只,对照组小鼠同剂量注射灭菌生理盐水。1.2.2小鼠的攻毒试验将SS2-H、SS2-006444、SS2-7、SS2-N株菌液CPU分别调至9.8×108/mL、5.3×108/mL、9.4×108/mL、2.8×108/mL,定为各组的各株菌原液组,再将各株菌CPU按1∶10、1∶100、1∶1000稀释,同时设各株菌的对照组,2只/组,1mL/只,腹腔注射,对照组注射同剂量灭菌生理盐水。于攻毒后21—40d对部分耐过BALB/c小鼠用SS2-1株菌液CPU为3.5×107/mL腹腔注射,1mL/只,同时设2只小鼠为攻毒对照组。以上试验动物于攻毒后观察其死亡、症状等,观察21d;对死亡动物取心血接种血平板分离培养,进行菌落形态和革兰氏染色等方法鉴定。2结果2.1sd-1对四种动物的疾病2.1.1猪s2-1对猪的致病性将不同稀释度SS2-1接种试验猪后,在试验期内CPU为13.3×108/mL(原液)组死亡2头;13.3×107/mL组死亡2头;13.3×106/mL组1头猪无明显变化,另1头猪于2—6d出现跛行、减食等,以后症状消失;13.3×105/mL组1头猪无变化,另1头猪在2d出现跛行于第6d症状消失,并出现头偏向一侧的神经症状;13.3×104/mL组和对照组猪均表现正常。从试验结果可以看出,SS2-1株对猪有致病性,经计算LD50为4.2×107;ID50为1.33×106。同时从病死猪内脏分离到与接种菌相同的细菌。2.1.2小鼠接种后感染用CPU为8.0×108/mL接种兔和普通小白鼠,接种后兔和普通小白鼠仅出现一过性精神萎顿,6h后即恢复正常。结果显示,兔和普通小白鼠对SS2-1株不敏感。2.1.3ss2-1对balb/c小鼠有较高的抗性用SS2-1株CPU不同稀释度接种BALB/c小鼠,接种后最低至1∶100稀释度组小鼠均出现死亡,表明SS2-1株对BALB/c小鼠有较高的敏感性。结果见表1。2.2表1显示了sd2-h、sso2-00744、sso2-7和ss2-n对bb-c大鼠的敏感结果2.3小鼠悬液攻击ss2将部分耐过SS2-N、SS2-1、SS2-0064444株攻击的BALB/c小鼠用致死量SS2-1株悬液接种,其中耐过SS2-N和5.3×107/mLSS2-006444组的BALB/c小鼠对SS2-1株攻击具有明显的保护率(100%),结果见表2。3对balb/c小鼠的致病性3.1猪链球菌2型可以人工感染猪和BALB/c小鼠,引起发病;其MRP和EF毒力因子的表现型与其对BALB/c小鼠的致病性无相关关系。3.2本试验结果显示:SS2-1株对兔不敏感,这与许多报道不一致,可能是此菌株的1个特性;而对普通小白鼠不致病则与其它报道一致。3.3从病猪分离