传染病实习报告

PAGEPAGE１４实习报告一、实习目的1、通过对雏鸡接种未知的细菌和病毒，待鸡发病后进行病理剖检和细菌病毒的分离，掌握临床诊断、病理剖检和实验室试验相结合，同时掌握对一般传染病进行诊断，确定感染的细菌和病毒种类；2、掌握传染病基本临床诊断过程和实验室诊断的基本策略和方法。二、实习安排与流程（一）实习安排时间地点内容2012年5月28日逸夫楼4017安排实习内容；分组；配制各种试剂和培养基；剖解雏鸡，观察脏器病理变化，并用病变脏器做组织触片；采集病变脏器；接种细菌至平板上分离培养；病料研磨匀浆，冻融。2012年5月29日逸夫楼4017细菌的染色镜检；细菌的纯培养；细菌的增殖培养；10%鸡红细胞制备；鸡胚接种。2012年5月30日逸夫楼4017药敏试验；生化试验；照蛋，观察鸡胚存活情况。2012年5月31日江浦农场；逸夫楼4017参观江浦农场；照蛋，观察鸡胚存活情况；观察生化试验结果；观察药敏试验结果。2012年6月1日逸夫楼4017提取尿囊液；琼扩试验；血凝试验。2012年6月2日逸夫楼4017观察琼扩实验结果；观察血凝试验结果。2012年6月3日逸夫楼4017总结实习结果，撰写实习报告（二）实习流程：平板划线分离、肉汤接种平板划线分离、肉汤接种纯培养生化实验准备实验器材，配制试剂药敏试验观察动物发病情况检测细菌检测病毒病料匀浆反复冻融接种鸡胚取尿囊液鸡胚接种血凝与血凝抑制三、实习内容上周五（5月25日）：准备试验、接种病毒、照蛋等。上周日（5月27日）：接种细菌周一（5月28日）1、配制试剂：（1）生理盐水：NaCl8.5g，加去离子水至1000ml，121℃高压15min灭菌备用。（2）PBS缓冲液：NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO41.44g、KH2PO40.24g，加去离子水至1000ml，121℃高压15min灭菌备用。（3）LB固体培养基和液体培养基：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g、琼脂15g，加去离子水至1000ml，121℃高压15min灭菌备用。（4）氯化镁孔雀绿增菌液：取商品化粉末50g，1%琼脂粉，加去离子水1000ml，加热溶解，121℃高压15min灭菌备用。（5）亚硒酸盐胱氨酸增菌液：亚硒酸盐胱氨酸粉23g，1%琼脂粉，加去离子水1000ml，混合加热至56℃，每个试管分装3ml，水浴加热至沸腾，再煮3～5min，冷藏备用。（6）伊红美兰琼脂：取商品化粉末42g，加去离子水1000ml，按1%比例加入琼脂粉，溶解后121℃高压15min灭菌备用。待冷至50℃时，按20～25ml/块倾注无菌平板，静置至凝固，倒置备用。平板内培养基充分凝固吼，置温箱内烘干表面水分。（7）麦康凯琼脂平板：取商品化粉末53g，加去离子水1000ml，按1%比例加入琼脂粉，溶解后121℃高压15min灭菌备用。待冷至50℃时，按20～25ml/块倾注无菌平板，静置至凝固，倒置备用。平板内培养基充分凝固吼，置温箱内烘干表面水分。（8）SS琼脂：取商品化粉末62g，加去离子水1000ml，按1%比例加入琼脂粉，加热煮沸至完全溶解，冷却至50℃左右，摇匀，按20～25ml/块倾注无菌平板，静置至凝固，倒置备用。（9）琼脂：8%NaCl24g，PBS300ml，琼脂粉4.03g（10）3.8%枸橼酸钠溶液：取3.8g的商品化粉末，加100ml水，溶解后121℃高压15min灭菌备用。2、雏鸡临床症状观察：体温升高，拉稀，粪便成白色糊状，有尿酸盐沉积，羽毛粗乱，腹部羽毛被粪便污染，呆立不动，精神萎靡，眼闭不睁，喜欢打堆，呼吸较急促。3、剖检：人工发病鸡编号为1、2，进行解剖，观察各个组织脏器的肉眼病变，做好记录，同时用部分组织器官做触片经染色确定组织器官中是否有细菌存在。(1)剪断病鸡的颈静脉处死，然后在大腿与腹壁之间各剪一剪，将大腿向两侧用力压，直至股骨头露出，使其平衡仰卧放置。在腹壁划开皮肤，将其向两边掀开，注意肌肉有无出血或坏死。沿腹壁至胸侧两边向前剪断肋骨，然后用力将胸骨向头部掀开，暴露胸腹腔，观察肝、脾、心及心包、肺、肾等器官的病变。结果：肝脏稍有肿大，其他器官无明显病变。(2)用火焰消毒过的剪刀剪下约1cm3的肝片组织在洁净的载玻片上触一下。自然干燥后革兰氏染色镜检。染色步骤：火焰固定→滴加草酸铵结晶紫溶液，1~2min→水洗→滴加革兰氏碘液1~3min→水洗→95%酒精脱色约，0.5～1min→水洗→石炭酸复红（沙黄水）10~30s→水洗→干燥→镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。4、细菌的分离培养：对于病变明显的脏器无菌分离细菌，划线接种伊红美蓝和麦康凯平板。用点燃的酒精棉在肝脏表面消毒，然后在酒精灯上加热手术刀片，趁热用刀片在肝脏表面划一切口，用灭菌接种环伸入切口的组织内。划线接种在麦康凯、伊红美蓝琼脂平板上，37℃培养24h后观察。5、病料处理：采集病变的脏器（脾脏、法氏囊）放入小青瓶，用剪刀粗略剪碎，加PBS缓冲液至不超过2/3小青瓶量，转移到匀浆器，匀浆，将红色匀浆液倒回小青瓶，标记，冻融3次。周二（5月29日）1、鸡胚接种：（1）制作病毒液：将昨天冻融备用的小青瓶中的混合脏器研磨液解冻，将上层透明红色液体装入EP管中，6000r/min，离心10min。取上清液，用小滤器（0.22um滤膜）过滤入灭菌的小青瓶中。此操作严格在超净工作台完成，以免有细菌污染，导致试验失败。（2）照蛋：通过照蛋选取5个活的7-10日龄的SPF鸡胚，避开血管，画出即将打孔与相应气室处的两点位置。（3）打孔：碘酊和酒精消毒后用打孔器在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室处和气室下的无血管处各钻一小孔。（4）尿囊腔接种：针头从气室下的小孔处插入，深0.5cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距离，注射量为0.1~0.2ml。（如图1）（5）封孔：点燃酒精灯融化石蜡，用小刷子沾取少量石蜡涂布在两个小孔上，注意先封气室下沿的孔再封气室处的孔，等待其凝固后，置孵育箱中直立孵育。每24h后，每天照蛋1次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死。死亡的鸡胚置冰箱中1-2h后即可取出收毒并检查鸡胚病变。图1尿囊腔接种2、细菌的观察：肉眼观察麦康凯和伊红美蓝平板上分离细菌的菌落形态，颜色、大小是否一致。3、细菌的染色：在玻片上滴加一滴生理盐水，然后分别挑取可疑菌落，涂布玻片，进行革兰氏染色，观察细菌染色特征，同时与将昨天涂布且自然干燥好的组织触片染色镜检，将两个细菌进行比较，观察其是否为同一细菌。革兰氏染色方法：火焰固定→滴加草酸铵结晶紫溶液，1~2min→水洗→滴加革兰氏碘液1~3min→水洗→95%酒精脱色，约0.5～1min→水洗→石炭酸复红（沙黄水）10~30s→水洗→干燥→镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。4、细菌纯培养：取两块SS琼脂平板，挑取经染色后初步鉴定的细菌的典型菌落接种到平板上进行纯培养。5、液体细菌增殖培养：取装有氯化镁孔雀绿增菌液、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、LB液体培养基的试管，一种细菌接种一套。6、10％的鸡红细胞制备在注射器内事先加入枸盐酸钠1ml（抗凝剂与血液按1：4比例使用），抽取1只成年无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血液4ml。将血液放入离心管内，与等体积PBS稀释液混合至离心管刻度线10ml处，于离心器内2000r/min离心5min后，弃去上层透明血浆和白细胞层，继续加PBS稀释液至10ml离心进行红细胞的洗涤。重复3次洗涤后用10倍PBS稀释液配成10%（V/V）红细胞悬液。4℃保存备用。周三（5月30日）1、照蛋观察鸡胚：死亡的淘汰，没死的继续培养。2、观察SS琼脂平板菌落的形态及颜色，并记录。3、观察LB液体培养基、氯化镁孔雀绿增菌液、亚硒酸盐胱氨酸增菌液中细菌增长情况。4、药敏试验：取两块LB平板，分别用胶头吸管吸取LB液体培养基中的液体两滴，玻璃推棒均匀涂布在LB平板上。将抗菌药物圆纸片均匀贴于培养基表面，各片距离应相等。其中一块平板为：氨苄西林、哌拉西林、麦迪霉素、氨曲南、链霉素、氧氟沙星、头孢曲松；另一块平板为卡那霉素、妥布霉素、链霉素、氧氟沙星、氨曲南、头孢吡肟、头孢他啶。37ºC培养24h观察结果。5、细菌生化鉴定：将所有生化管中的液体都甩向一侧，然后用砂轮在生化管上端约1/3划痕，折断。然后用灭菌接种针取纯菌接种至硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、葡磷胨水、枸橼酸盐、尿素、半固体、赖氨酸、鸟氨酸、山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖靛基质、氨对14根生化管中。倒置在小烧杯中37℃培养24~48h，观察发酵管的反应情况，并记录结果。（1）糖类（山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖和棉子糖）分解试验：原理：接种细菌若发酵某种糖或醇，可产酸，使培养液颜色由紫色变为黄色；如发酵的同时又产生气体，培养液颜色由紫色变为黄色的同时，在微量发酵管顶部积有气泡。结果判定：接种后24h观察结果。产酸，培养液颜色由紫色变为黄色；产酸产气，培养液颜色由紫色变为黄色，并在微量发酵管顶部积有气泡。（2）靛基质试验：原理：细菌能分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰吲哚。结果判定：接种后24－48h观察，阳性呈红色，阴性不变色（3）葡磷胨水（MR,甲基红）试验：原理：细菌分解培养基中葡萄糖产酸，当产酸量大，使培养基的pH值至4.5以下，加入甲基红指示剂变红。结果判定：接种后24h观察结果，阳性呈红色；橙色为可疑；黄色为阴性。（4）枸橼酸盐利用试验：原理：培养基中以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，细菌若能利用这些盐作为碳源和氮源而生长，则利用枸橼酸钠产生碳酸盐，与利用铵盐产生的氨气反应，形成NH4OH，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由草绿色变为深蓝色。结果判定：接种培养后48～72h观察，阳性培养基变为深蓝色，否则为阴性。（5）硫化氢试验：原理：细菌分解含硫氨基酸，产生硫化氢，与培养基中的醋酸铅或硫酸亚铁发生反应，形成黑色的硫化氢或硫化亚铁。结果判定：接种后24h观察结果，培养液变黑为阳性，不变色为阴性。（6）苯丙氨酸脱氨酶试验：原理：若细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，能将培养基中的苯丙氨酸脱氨变成苯丙酮酸，酮酸能使三氯化铁指示剂变为绿色。结果判定：接种后24h观察，变绿色者为阳性。（7）氨基酸脱羧酶试验：原理：若细菌能从赖氨酸或鸟氨酸脱去羧基，导致培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝就显示出蓝色，试验结果为阳性，若不脱羧，培养基不变为黄色。结果判定：接种后覆盖灭菌液体石蜡，培养4d，每天观察结果，阳性者培养液先变黄后变为蓝色。（8）脲酶试验：原理：细菌分解尿素产生两分子氨，培养基pH升高，指示剂酚红显示出红色，即证明细菌有脲酶。结果判定：用接种环将细菌培养物接种与尿素琼脂斜面，不要穿刺到底，下部留作对照。1～6h观察，有时需要24h到6d。阳性反应，则琼脂斜面有粉红到紫红色。周四（5月31日）1、参观江浦农场（图5-7）：通过参观江浦农场畜牧试验站，进一步增进对行业的了解，增进理论与实践的结合，为以后的临床工作奠定良好的基础。（1）畜牧试验站奶牛场首先参观的是奶牛场，奶牛场有牛场3栋，每栋1000平米，奶牛200头，小种牛100头，场内设有青贮池等设施。奶牛场采用负压自动挤奶装置，有效的避免了奶牛乳房炎等疾病的发生，并保证了牛奶的卫生。在配种方面，采用人工受精，从而减少了奶牛阴道炎以及子宫炎等疾病的发生，并能确保良种繁育的进行。每栋牛场配有各自的运动场，从而使奶牛有足够的活动空间。而场区设有两条通道，一条为净道，为饲料，用具以及牛奶的出入通道，一条为污道，为牛粪等的通道，从而保证了牛场的卫生。由于目前食品安全问题愈发受到关注，牛奶的质量必须得到保证，根据国家规定，使用抗生素药物的奶牛必须有一段停药期才能采奶，因此奶牛场的奶牛要尽量保证不得病，不使用抗生素药物，要给奶牛创造良好的生活条件，并提供足够的营养。（2）南京禾嘉吉升农牧发展有限公司种猪场种猪场同样分净道和污道两条路，进入场区首先要进行消毒。消毒后，首先参观的是保育舍，每个保育床上有10头左右的保育猪。后面是哺育舍，仔猪和母猪在一个哺育床上，而哺育床设计确保小猪不会被母猪压到。随后是种猪舍，种母猪采用单圈饲养，并标注配种时间，和妊娠预测日期。而种公猪很少，优良种公猪的活动空间很大，采用单圈饲养，负责场区的配种工作。后面一栋是备用猪舍，选取体型良好的作为后备种母猪或种公猪，一圈饲养10头左右，采用全自动饮水器。在污道旁有一个展示厅，供买家选猪使用，将猪分批赶到展示厅中，让买家透过玻璃选取，从而避免了外界病毒细菌传入场区，有效的规避了传染病的发生。（3）金陵黑鸡孵育场金陵黑鸡孵育场现有禽场8幢，每幢1000平米；其中3幢为鹅场，可按家系饲养；4幢为鸡场，规模化标准化鸡笼和喂食喂水采蛋卫生设施一应俱全；1幢为人工孵化室，全自动控温控光。而目前主要是孵育金陵黑鸡，饲养舍采用笼养，鸡舍两端有风机从而控温，每只鸡年产蛋170多枚。孵化室采用全自动控温控光，从而保证了金陵黑鸡的苗鸡质量。通过此次参观，了解了奶牛场的基本设施以及操作规程，了解了种猪场的猪圈设置和管理流程，了解了种禽孵育场的管理规程，学到了很多书本上没有接触到的知识，为以后的临床实践工作奠定了良好的基础。而且这次参观江浦农场，让我们如此近距离的接触一线工作，加深了我们对养殖场传染病的防控及疾病的了解。2、药敏试验结果观察，记录；3、生化鉴定结果观察，记录。4、鸡胚观察：照蛋发现，5个鸡胚仍未死亡，血管清晰明显，胚体有轻微运动。拿出两个血管较为细弱的鸡胚放入4℃冰箱冷藏致死，直至照蛋发现血管不明显时即可提取尿囊液。周五（6月1日）1、尿囊液的收集（1）在超净台内，点上酒精灯，用酒精棉消毒双手，然后用火焰灼烧后的镊子夹取碘酊棉消毒鸡胚，再用酒精脱碘；（2）用火焰灼烧过的镊子柄敲破气室外的卵壳，并小心地一块块地取下蛋壳，开口直径为整个气室的大小；（3）再次灼烧镊子后撕去一气室下的蛋膜，用消毒过的小镊子夹起尿囊膜，然后用消毒过的小剪刀剪开一个小口；（4）用镊子压住鸡胚用消毒吸管吸取5~8ml尿囊液放入消毒过的小青瓶中，液体应清亮，浑浊或有血液则不合格，应废弃，用消毒盖盖好。五个鸡胚的尿囊液分别做好标记。2、1%红细胞制备：用移液枪量取10％红细胞悬液400ul，稀释到4000ul。3、HA试验：①于V型血凝板的每孔滴加PBS50ul，共滴5排；②分别滴加五瓶病毒尿囊液原液（抗原）于第一列孔，每孔50ul，然后由左至右顺序倍比稀释至第11列孔，再从第11列孔吸50ul弃去，最后一列不加抗原作为对照；③于每孔中加入1％红细胞悬液50ul，绕圈混匀；④室温下30～40min，根据血凝图象判定结果，以出现完全凝集的抗原最多稀释度为该抗原的血凝滴度，每次4排重复，以几何平均值表示结果。4、HI试验：以4个单位HA单位的抗原（HA试验中出现完全凝集的抗原最大稀释度向左退两孔的抗原稀释度）进行HI试验（1）先取PBS0.05ml加入第1孔，再取4个HA单位的抗原加入3～12孔，每孔0.05ml，再取8个HA单位抗原0.05ml加入第2孔；（2）吸被检血清0.05ml放入第1孔（血清对照）混匀后吸0.05ml放入第2孔，依次倍比稀释至12孔，吸0.05ml弃去；（3）室温下作用20min；（4）每孔加入0.05ml红细胞悬液，混匀后室温静置30～40min，判定结果，记录血清滴度；（5）每次测定应设定已知滴度的标准阳性血清对照。5、琼扩试验：（1）从五个小青瓶中选取最清亮的一瓶病毒尿囊液（抗原）备用。取12支EP管，分为两组，分别编号1，2，3，4，5，6；（2）在1号中加入200ul一种抗原，在2，3，4，5，6各加入200ul的PBS溶液，然后在2号管内再加入200ul的抗原，吹打后后吸出200ul加入3号管如此倍比稀释到6号管，因此病毒尿囊液浓度分别为：原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32；（3）取一块已凝固的琼扩平板，平均分为四区，在各区上打梅花孔（如图2），孔径约3mm，孔距约5-6mm，不宜太远，打好孔后在火焰上经过，封底；在琼扩板的底面上做好标记，每区梅花孔的周围孔标好1、2、3、4、5、6；（4）每区中间孔加不同标号的标准血清抗体，周围孔1~6号分别加倍比稀释的病毒尿囊液（原液、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32）。置37℃湿盒24h后观察结果。12○○6○○○3○○54图2梅花孔实习结果及分析1.临床症状的观察病鸡体温升高，拉稀，粪便成白色糊状，有尿酸盐沉积，羽毛粗乱，腹部羽毛被粪便污染，呆立不动，精神萎靡，眼闭不睁，喜欢打堆，呼吸较急促。2、剖检病理变化：1、2号鸡的病变不明显，肝脏稍肿大，有点状出血；脾脏稍有肿大；法氏囊肿胀明显。其他脏器并无明显症状。3、组织触片染色镜检（图2）：肝组织触片染色后在镜下观察到大量被染成红色的杆菌，两端钝圆，散在或成对，有的可见菌体两端深染，疑似大肠杆菌。4、鸡感染细菌鉴定：（1）细菌分离培养的菌落观察及染色镜检：培养基菌落观察结果：培养基细菌生长情况固体平板麦康凯平板菌落形态：粉红色，表面光滑湿润的连续菌落。伊红美蓝菌落形态：中央黑、边缘带有绿色金属光泽的连续菌落；边上长有少量灰白色的杂菌。染色镜检结果：镜下有许多红色杆状无芽孢的直杆菌，两端钝圆，散在或成对，有的可见菌体两端深染。分析：染色镜检可以确定该菌未革兰氏阴性菌，初步判断为大肠杆菌和沙门氏菌，但是两者镜检形态基本相同，且均无芽孢，无荚膜或荚膜不明显，因此，通过涂片镜检很难将二者区分开来，需进行进一步检查。我们在伊红美蓝琼脂平板上看到有黑色金属光泽的菌落生成，是大肠杆菌的典型特征；在麦康凯平板上也有粉红色的菌落生成，更进一步说明该菌是大肠杆菌；染色镜检发现其特征与大肠杆菌很符合，所以，结合以上试验结果可以说明试验所用鸡感染了大肠杆菌，至于有没有沙门氏菌还得进一步鉴定。（2）纯培养细菌观察结果：培养基细菌生长情况液体培养基LB液体培养基培养液变浑浊，底部有沉淀。亚硒酸盐胱氨酸增菌液未见变化氯化镁孔雀绿增菌液未见变化固体培养基SS琼脂平板较多的玫红色菌落，圆形、边缘光滑、半透明。分析：首先，亚硒酸盐胱氨酸增菌液和氯化镁孔雀绿增菌液作为沙门氏菌的选择性增培养，均有细菌的增殖，说明该试验用鸡未感染了沙门氏菌。5、药敏试验见下表（见图4）抑菌圈直径敏感度>20mm极敏15-20mm高敏10-14mm中敏<10mm低敏0不敏第一组（大肠杆菌）：抗生素氨苄西林呱拉西林麦迪霉素氨曲南链霉素氧氟沙星头孢曲松抑菌圈径（mm）181281401013-抗生素卡那霉素妥布霉素链霉素氧氟沙星氨曲南头孢吡肟头孢他啶抑菌圈径（mm）1213016141220分析：药敏试验结果说明，头孢他啶、氨苄西林及氧氟沙星对该菌高度敏感，呱拉西林、氨曲南、头孢曲松、卡那霉素、妥布霉素及头孢吡肟对该菌中度敏感，麦迪霉素对该菌有较低的抑制作用，链霉素对该菌不敏感，所以可用头孢他啶、氨苄西林及氧氟沙星来治疗该病。6、生化试验结果见下表（见图3）：硫化氢苯丙氨酸脱氨酶葡萄糖酸盐葡磷胨水枸橼酸盐尿素半固体赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶山梨醇侧金盏花醇木胶糖氨对靛基质--eq\o\ac(○,+)eq\o\ac(○,+)-++++--eq\o\ac(○,+)--注：“＋”表示产酸；“○”表示产气；“⊕”表示既产酸又产气；“－”表示不产酸也不产气。分析：大部分大肠杆菌菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木胶糖、等产酸产气，大肠杆菌不产生H2S，不利用枸橼酸盐且有运动力，葡磷胨水（MR）试验呈阳性，而沙门氏菌能产生H2S，不分解尿素且大多数无运动力，葡磷胨水（MR）试验呈阴性。由结果显示，未出现典型的沙门氏菌生化试验特征反应，故判断本小组实验用鸡不受沙门氏菌感染，判定该鸡感染的致病菌为大肠杆菌。7、照蛋结果①周三（5月30日）没有发现死亡鸡胚。②周四（5月31日）将鸡胚置于4℃冰箱中，将其冻死。③周五（6月1日）收集尿囊液。本组的鸡胚尿囊液均很透明清亮，没有被细菌污染。5个鸡胚胚体均正常，没有见到出血点。8、HA和HI试验结果与分析：结果判定标准：板倾斜，观察有无红细胞呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释度代表一个血凝单位（HAU）。试验结果：本次的血凝试验并未出现有血凝现象，从第一孔开始，红细胞就未被凝集，都沉于孔底形成小点，倾斜时都有流淌现象。分析：该待检的病毒尿囊液中病毒量过小，或者尿囊液中没有新城疫病毒，该鸡群并未受到新城疫病毒的感染。9、琼脂扩散试验：结果判定标准：被检孔与中心孔形成清晰的沉淀线，并与周边已知抗原或血清的沉淀先相互融合者，判定为阳性；抗原和血清之间产生的沉淀线末端弯向被检样品孔内侧，判定为弱阳性；有的被检材料会出现2条以上的沉淀线，其中一条与已知抗原或阳性血清的沉淀线融合者，也被判为阳性；未出现沉淀线者，为阴性。试验结果：本组的琼扩试验无沉淀线。则说明鸡胚尿囊液中无法氏囊病毒。五、诊断通过细菌接种、分离培养鉴定及生化试验和药敏试验，可以确定，我们所分离到的细菌为大肠杆菌，所以本小组的结果为：实验鸡感染了大肠杆菌。同时，鉴于病毒学的诊断结果（无血凝结果及血凝抑制结果、琼脂扩散试验为阴性），我们小组认为，实验鸡并没有感染病毒。六、防控大肠杆菌病急性时往往不及救治。所以控制本病重在预防。粪便污染时鸡大肠杆菌病传播的主要方式，。所以要严格的对养殖场进行消毒，对鸡舍及时打扫和消毒，尽量减少粪便污染；积极防控原发病也是关键，在购买雏鸡时要选取消毒严格的孵化厂家，避免孵化期大肠杆菌的感染，选取健雏，适时的注射疫苗，若发现患鸡，必须隔离并进行治疗，可根据我们的药敏试验选用敏感度比较好的药物。由于3周以后的鸡生长速度特别快，机体的主动免疫功能不能同步发育，因此3~6周龄的鸡最易