吸光光度法物质对光的选择性吸收课件

第十章吸光光度法

原理：基于物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法。

包括：可见吸光光度法、紫外-可见吸光光度法和红外光谱法等。

特点：

1.灵敏度高一般可达1-10-3%的微量组分。对固体试样一般可测到10-4%。如果对被测组分事先加以富集，灵敏度还可以提高1-2个数量级。

1谢谢观赏2019-8-27第十章吸光光度法1谢谢观赏2019-8-27

2.准确度较高一般吸光光度法的相对误差为2-5%，其准确度虽不如滴定分析法及重量法，但对微量成分来说，还是比较满意的。

3.操作简便，测定速度快

4.应用广泛几乎可以测定所有的无机离子和有机化合物。2谢谢观赏2019-8-272谢谢观赏2019-8-27第一节物质对光的选择性吸收一、光的基本性质波长、频率与速度之间的关系为：E=hν=hc/λh：普朗克常数，其值为6.63×10-34J·s二、物质对光的选择性吸收

1.固体物质如果物质对各种波长的光完全吸收，则呈现黑色；如果完全反射，则呈现白色；如果对各种波长的光吸收程度差不多，则呈现灰色；如果物质选择性地吸收某些波长的光，那么，这种物质的颜色就由它所反射或透过光的颜色来决定。

3谢谢观赏2019-8-27第一节物质对光的选择性吸收3谢谢观赏2019-8-27

对溶液来说，溶液呈现不同的颜色，是由于溶液中的分子或离子选择性的吸收某种颜色的光所引起的。如果各种颜色的光透过程度相同，这种物质就是无色透明的。如果只让一部分波长的光透过，其他波长的光被吸收，则溶液就呈现的是与它吸收的光成互补色的颜色。（三）吸收曲线（吸收光谱）以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到的一条吸光度随波长变化的曲线。4谢谢观赏2019-8-274谢谢观赏2019-8-27

KMnO4溶液的吸收曲线浓度:a<b<c<d

5谢谢观赏2019-8-27KMnO4溶液的吸收曲线5谢谢观赏2019-8-27第二节光吸收的基本定律一、朗伯-比耳定律（一）朗伯-比耳定律的推导

使用条件：1.平行单色光2.垂直照射3.均匀、非散射的介质（固体、液体或气体）

I0：入射光的强度；Ia：吸收光的强度；

It：透过光的强度；Ir：反射光的强度

I0＝Ir+Ia+It

logI0/I=Kbc令：A=logI0/I

A=KbC

6谢谢观赏2019-8-27第二节光吸收的基本定律6谢谢观赏2019-8-27

A：吸光度，K：比例常数

I/I0：为透光率，用T表示。

A=lg1/T（二）吸收系数和桑德尔灵敏度

1.吸收系数

(1)吸收系数ac的单位为g/L，b的单位为cm时,K用a表示，称为吸收系数，其单位为L/g·cm，这时朗伯-比耳定律变为：A＝abc

(2)摩尔吸收系数κ

c的单位为mol/L，b的单位为cm，κ表示，称为摩尔吸收系数，其单位为L/mol·cm。

A＝κbc

7谢谢观赏2019-8-27A：吸光度，K：比例常数7谢谢观赏2019-8-

2.

桑德尔灵敏度（μg·cm-2）

定义：当光度仪器的检测极限为A=0.001时，单位截面积光程内所能检出的吸光物质的最低质量。8谢谢观赏2019-8-272.桑德尔灵敏度（μg·cm-2）8谢谢观赏2019-83.标准曲线

绘制：配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定条件下进行测定。然后以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标作图。

应用：曲线的斜率为κb，由此可得到摩尔吸收系数κ；也可根据未知液的Ax,在标准曲线上查出未知液的浓度cx。二、引起偏离朗伯-比耳定律的原因(一)物理因素1.单色光不纯所引起的偏离2.非平行入射光引起的偏离

9谢谢观赏2019-8-273.标准曲线9谢谢观赏2019-8-273．介质不均匀性引起的偏离（二）化学因素1．溶液浓度过高引起的偏离当溶液浓度较高时，吸光物质的分子或离子间的平均距离减小，从而改变物质对光的吸收能力。浓度增加，相互作用增强，导致在高浓度范围内摩尔吸收系数不恒定而使吸光度与浓度之间的线性关系被破坏。2.化学变化所引起的偏离溶液中吸光物质常因解离、缔合、形成新的化合物或在光照射下发生互变异构等，从而破坏了平衡浓度与分析浓度之间的正比关系。10谢谢观赏2019-8-273．介质不均匀性引起的偏离10谢谢观赏2019-8-27第三节吸光光度法的仪器一、基本部件

光源单色器（分光系统）吸收池检测系统和信号显示系统（一）光源常用的光源为6-12伏低压钨丝灯，光源具有足够的强度和稳定性。11谢谢观赏2019-8-27第三节吸光光度法的仪器11谢谢观赏2019-8-27（二）单色器（分光系统）单色器由入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦镜和出射缝组成。（三）吸收池（比色皿）比色皿为长方形，也有圆柱形的。一般厚度为0.5、1、2和3厘米。（四）检测系统(又叫光电转化器)

常用的是硒光电池，对于波长为500-600nm的光线最灵敏。而对紫外线，红外线则不能应用。光电管和光电倍增管用于较精密的分光光度计中。具有灵敏度高、光敏范围广及不易疲劳等特点。

12谢谢观赏2019-8-27（二）单色器（分光系统）12谢谢观赏2019-8-27

（五）信号显示系统现代分光光度计采用数字电压表、函数记录仪、示波器及数据处理台等。二、吸光度的测量原理通过转换器将测得的电流或电压转换为对应的吸光度A。测定步骤：

1．调节检测器零点，即仪器的机械零点。

2．应用不含待测组分的参比溶液调节吸光零点。

3.待测组分吸光度的测定。13谢谢观赏2019-8-27（五）信号显示系统13谢谢观赏2019-8-27三、分光光度计的类型（721、722、751型）(一)单光束分光光度计

原理：由光源(钨丝灯或氢灯)发出的光线由反射镜反射，使光线经狭缝的下半部，经准光镜进入单色器棱镜色散底，由准光镜将光聚焦于狭缝上半部而射出，经液槽照射于光电管上。(二)双光束分光光度计14谢谢观赏2019-8-27三、分光光度计的类型（721、722、751型）14谢谢观赏第四节吸光光度法分析条件的选择一、显色反应及其条件的选择（一）显色反应和显色剂

1.显色反应将试样中被测组分转变成有色化合物的反应。显色反应：络合反应和氧化还原反应选择显色反应应注意的:(1)选择性要好(2)灵敏度要高(3)对比度要大(4)有色化合物的组成要恒定,化学性质要稳定(5)显色反应的条件要易于控制。15谢谢观赏2019-8-27第四节吸光光度法分析条件的选择15谢谢观赏2019-8-2.显色剂(1)无机显色剂(2)有机显色剂（二）显色反应条件的选择

1.显色剂的用量

M+R=MR(被测组分)(显色剂)(有色化合物)2.溶液的酸度

(1)酸度对被测物质存在状态的影响

(2)酸度对显色剂浓度和颜色的影响

(3)对络合物组成和颜色的影响

16谢谢观赏2019-8-272.显色剂16谢谢观赏2019-8-27

3.时间和温度

4.有机溶剂和表面活性剂（1）溶剂影响络合物的离解度（2）溶剂改变络合物颜色（3）溶剂影响显色反应的速度

5.共存离子的干扰及消除

17谢谢观赏2019-8-273.时间和温度17谢谢观赏2019-8-27

消除干扰的主要措施：（1）控制酸度（2）加入掩蔽剂（3）采用萃取光度法（4）在不同波长下测定两种显色配合物的吸光度,对它们进行同时测定。（5）寻找新的显色反应（6）分离干扰离子此外，还可以通过选择适当的测量条件，消除干扰离子的影响。

18谢谢观赏2019-8-2718谢谢观赏2019-8-27二、吸光光度法的测量误差及测量条件的选择

（一）仪器测量误差主要是指光源的发光强度不稳定，光电效应的非线性，电位计的非线性、杂散光的影响、滤光片或单色器的质量差(谱带过宽)，比色皿的透光率不一致，透光率与吸光度的标尺不准等因素。透射比读数误差ΔT（绝对误差）与T本身大小无关，对于一台给定仪器基本上是常数，一般在0.002-0.01之间，仅与仪器本身的精度有关19谢谢观赏2019-8-27二、吸光光度法的测量误差及测量条件的选择19谢谢观赏2019

20谢谢观赏2019-8-2720谢谢观赏2019-8-27（二）测量条件的选择

1.测量波长的选择

“吸收最大，干扰最少”原则

2.吸光度范围的控制吸光度在0.15-0.80之间

3.参比溶液的选择（1）当试液、试剂、显色剂均无色时，可用蒸馏水作参比液。（2）试剂和显色剂均无色时，而样品溶液中其他离子有色时，应采用不加显色剂的样品溶液作参比液。（3）试剂和显色剂均有颜色时，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，然后把显色剂、试剂均按操作手续加入，以此做参比溶液。

21谢谢观赏2019-8-27（二）测量条件的选择21谢谢观赏2019-8-27

第五节吸光光度法的应用

一、定量分析（一）单组分的测定1.一般方法

A-c标准曲线法2.示差法：以浓度比试液cx稍小的标准溶液cs作参比，然后再测定试液的吸光度。

As=-lgTs=κbcsAx=-lgTx=κbcx

实际测得吸光度Af为

Af=Ax-As=κb(cx-cs)=κbΔc

cx=cs+Δc

示差法相对普通光度法提高测量准确度的原因是扩展了读数标尺。

22谢谢观赏2019-8-27第五节吸光光度法的应用22谢谢(二)多组分的同时测定同时测定一种试样中的多种组分的基础是吸光度具有加合性，即总吸光度为各个组分吸光度的总和。二、络合物组成和酸碱离解常数的测定（一）络合物组成的测定

1.摩尔比法设络合反应为M+nR＝MRn23谢谢观赏2019-8-27(二)多组分的同时测定二、络合物组成和酸碱离解常数的测定23

固定金属离子M的浓度，逐渐增加络合剂的浓度。得到[R]／[M]为1，2，3……的一系列溶液测定其吸光度，绘制曲线，用作图法求得络合比。24谢谢观赏2019-8-27固定金属离子M的浓度，逐渐增加络合剂的浓度。得到[R]2.等摩尔连续变化法保持溶液中cM+cR为常数，连续改变cR/cM配制出一系列溶液。分别测量吸光度A，以A对cM/(cM+cM)作图，曲线折点对应的cR/cM值就等于络合比n。适用于络合比低、稳定性较高的络合物。

25谢谢观赏2019-8-272.等摩尔连续变化法25谢谢观赏2019-8-27（二）酸碱离解常数的测定设有一元弱酸HB，按下式离解：

HB=H++B-Ka=[B-][H+]/[HB]配制三种分析浓度c=[HB]+[B-]相等而pH不同的溶液。第一种溶液的pH在pKa附近，此时