药物分析第11章 维生素类药物的分析

第十一章维生素类药物的分析TheAnalysisofVitamins一、化学结构与性质（化学性质与分析方法间的关系）二、鉴别试验三、特殊杂质检查四、含量测定学习内容

1.掌握维生素A、维生素B1、维生素C、维生素E的化学结构与分析方法间的关系；维生素A鉴别的三氯化锑反应、含量测定的紫外分光光度法；维生素B1鉴别的硫色素反应；维生素C基于还原性的鉴别和含量测定方法；维生素E含量测定的气相色谱法；

2.熟悉维生素B1的含量测定方法，维生素E的鉴别和检查；

3.了解维生素类药物的其他分析内容。目的要求第一节维生素A的分析一、结构与性质

性质：

1.溶解性不溶于水

2.不稳定性易被氧化

3.紫外吸收光谱特征325-328nm4.与三氯化锑反应呈色在三氯甲烷中能与三氯化锑作用，产生不稳定的蓝色。第二节鉴别实验1.

三氯化锑反应（Carr-Price反应）

Ch.P.(2010)维生素A及其制剂的鉴别：取本品1滴，加三氯甲烷10ml振摇使溶解；取2滴，加三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯甲烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐变成紫红色。第一节维生素A的分析二、鉴别试验第二节鉴别实验2.

紫外分光光度法第一节维生素A的分析二、鉴别试验3.

薄层色谱法（一）紫外分光光度法（三点校正法）

维生素A在325-328nm波长范围内有最大吸收第一节维生素A的分析三、含量测定立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）杂质（一）紫外分光光度法

维生素A在325-328nm波长范围内有最大吸收第一节维生素A的分析1）原理：

a.杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；

b.物质对光的吸收具有加和性，A样品

=AVA+A相关物质。1.三点校正法第一节维生素A的分析2）波长的选择：

1

：VitA的max；2、

3

：分别在

1的两侧各选一点第一法等波长差法---直接测定法（VitA醋酸酯，

max：328nm）

第二法等吸收比法---皂化法（VitA醇，

max：325nm）

1.三点校正法第一节维生素A的分析3）测定方法：第一法直接测定法（VitA醋酸酯）

a.方法：取维生素A醋酸酯适量，精密称定，加环己烷制成每1ml中含9-15单位的溶液。在300、316、328、340和360nm五个波长处分别测定吸收度，确定最大吸收波长。计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度比值。

b.A值的选择：

①如果最大吸收波长在326-329nm，分别计算5个波长下吸光度的比值，均不超过规定值的±0.02时，直接用328nm处测得的吸收度A328求。

第一节维生素A的分析第一法直接测定法（VitA醋酸酯）

b.A值的选择：②如果最大吸收波长在326-329nm，且所测各波长吸光度比值有一个以上超过规定值的±0.02，应按下式求出校正后的吸光度，并计算f值：03%－15%－3%第二法第二法328A(校正)328A③如果最大吸收波长不在326-329nm，也不能用本法测定，采用皂化法测定含量。第一节维生素A的分析第一法直接测定法（VitA醋酸酯）

c.计算：

①求样：由A=样×C×L，求得样=A/(C×L)②求效价（IU/g）：每克供试品中所含维生素A的国际单位数。

IU/g=样×1900③求标示量%：标示量%=效价×平均丸重标示量×100%=A×D×1900×WW×100×L×标示量×100%第一节维生素A的分析第一法直接测定法（VitA醋酸酯）

d.换算因子：单位数值所相当的效价换算因子=效价（IU/g）纯1900=每1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为：IU2907000g344.0g1016=mm×效价（IU/g）=2907000IU/g维生素A的国际单位规定：第一节维生素A的分析3）测定方法：第二法皂化法（VitA醇）

a.方法：取维生素A醋酸酯适量，精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶液乙醇溶液煮沸回流，得到的皂化液经乙醚提取、洗涤、过滤、浓缩和干燥等处理，用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A醇9-15单位的溶液。在300、310、325、334波长处测定吸收度，确定最大吸收波长（应为325nm）。第一节维生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

b.A值的选择：

①如果最大吸收波长在323-327nm，而且A300/A325的比值小于或等于0.73，应按下式求出校正后的吸光度，并计算f值：%100AAAf325325)(325-=校正03%－3%325A(校正)325A(校正)325A第一节维生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

b.A值的选择：

②如果最大吸收波长不在323-327nm，或A300/A325大于0.73，表示供试品中杂质含量过高，应先采用色谱法将未皂化部分纯化后再进行测定。第一节维生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

c.计算：

①求样：由A=样×C×L，求得样=A/(C×L)②求效价（IU/g）：IU/g=样×1830③求标示量%：标示量%=效价×平均丸重标示量×100%=A×D×1830×WW×100×L×标示量×100%第一节维生素A的分析第二法皂化法（VitA醇）

d.换算因子：单位数值所相当的效价换算因子=效价（IU/g）纯1830=

VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物0.2399g至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为：A300：0.354A316

：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299

求本品中维生素A的含量？第一节维生素A的分析A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299

+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====()()605052305610628025232523340316328328.....AAA.A=--×=--=(校正)%)3~%15(%7.3%100328328)(328--Î-=-=AAAf校正第一节维生素A的分析（二）三氯化锑比色法

在三氯甲烷中能与三氯化锑作用，产生不稳定的蓝色，在618-620nm波长处有最大吸收。第一节维生素A的分析三、含量测定（三）HPLC

具有分离分析功能，可排除维生素A中共存物质的干扰。第一节维生素A的分析

维生素A醋酸酯胶丸含量测定，取内容物Wg，加环己烷溶解并稀释至10mL，摇匀，精密量取0.1mL，再加环己烷稀释至10mL，使其浓度为9IU/mL~15IU/mL。已知内容物平均重量为80.0mg，其每丸标示量为10000IU。试计算取样量（Ｗ）的范围是多少？练习W=72-120mgW80.0×100001000=9~15第二节维生素C的分析一、结构与性质

性质：

1.溶解性溶于水，水溶液呈酸性

2.酸性表现为一元酸

3.还原性烯二醇

第二节维生素C的分析一、结构与性质

性质：

4.旋光性

5.水解性

6.糖类的性质

7.紫外吸收特性第二节鉴别实验1.

与硝酸银反应（Ch.P.(2010)）

原理：烯二醇基具有强还原性二、鉴别试验第二节维生素C的分析2.

与2,6-二氯靛酚反应（Ch.P.(2010)）

原理：烯二醇基具有强还原性第二节鉴别实验二、鉴别试验3.

与其它氧化剂反应（亚甲蓝、碱性酒石酸铜、磷钼酸等）

4.糖类的反应第二节维生素C的分析5.

UV、IR、TLC、HPLC第二节鉴别实验三、特殊杂质检查溶液澄清度与颜色检查（控制吸光度）第二节维生素C的分析铜、铁离子的检查（原子吸收分光光度法，控制吸光度）

取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀乙酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/l）滴定，至溶液显蓝色并在30秒内不褪色。每1ml碘滴定液（0.05mol/l）相当于8.806mg的C6H8O6。（一）碘量法（Ch.P.(2010)维生素C原料及制剂）1.原理：

2.方法四、含量测定第二节维生素C的分析四、含量测定第二节维生素C的分析（一）碘量法（Ch.P.2010）3.讨论：

（1）加入稀乙酸在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢。

（2）立即滴定维生素C在空气中易氧化，减少对测定的影响。

（3）加新沸过的冷水减少水中溶解的氧对测定的影响。（4）消除制剂中辅料对测定的干扰

片剂中的滑石粉、注射剂中的抗氧剂（二）2,6二氯靛酚滴定法1.原理：

2.讨论快速滴定：还原性物质对测定有干扰，但是维生素C的氧化速度远比干扰物质快，故快速滴定可减少干扰物质的影响。

四、含量测定第二节维生素C的分析第三节维生素B1的分析一、结构与性质

性质：

1.溶解性溶于水，水溶液呈酸性

2.硫色素反应

3.紫外吸收光谱特征

4.与生物碱沉淀试剂反应

5.氯化物的特性[]蓝色荧光硫色素正丁醇¾¾¾®¾¾¾¾®¾-OOH第二节鉴别实验1.

硫色素反应二、鉴别试验第三节维生素B1的分析第二节鉴别实验二、鉴别试验第三节维生素B1的分析2.

沉淀反应3.氯化物反应4.硝酸铅反应与氢氧化钠共热，分解生成硫化钠，可与硝酸铅反应生产黑色沉淀。5.IR（一）非水溶液滴定法（Ch.P.2010）

a.加入醋酸汞溶液

b.反应摩尔比：1:2c.喹那啶红－亚甲蓝（紫红→天蓝）三、含量测定第三节维生素B1的分析含量%=100%（V空–V样）×T×FW三、含量测定第三节维生素B1的分析（二）紫外分光光度法含量%=×100%×D×VWA×L×100（三）硫色素荧光法（四）HPLC待测组分+干扰组分不同pH，不同化学反应或光照等待测组分发生光谱变化测量ΔA，求C赋形剂或其它共存物不受影响它保留了通常的分光光度法简易、快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰。第三节维生素B1的分析差示分光光度法：差示分光光度法：第三节维生素B1的分析

246nm266233具体做法：

取2份相同供试品，分别使其处于不同环境中。然后将它们稀释至同样浓度，分别置于样品池与参比池中，于适当波长处测其ΔA

。A1＝A+A干扰A2=A’+A干扰ΔA=A-A’=(ε-ε’)Cl第三节维生素B1的分析差示分光光度法：第四节维生素E的分析一、结构与性质

性质：

1.溶解性不溶于水

2.水解性酸性或碱性溶液中加热水解

3.氧化性遇光、空气氧化（避光保存）

4.紫外吸收光谱特征第二节鉴别实验1.

硝酸反应（Ch.P.(2010)维生素E及其制剂）二、鉴别试验第四节维生素E的分析第二节鉴别实验二、鉴别试验第四节维生素E的分析2.

三氯化铁反应（Ch.P.(2010)维生素E）3.

GC和IR第二节鉴别实验三、特殊杂质检查1.

酸度（游离乙酸）酸碱滴定法

2.生育酚具有还原性，硫酸铈滴定法第四节维生素E的分析L=×100%×VWT3.

有关物质GC4.残留溶剂GC（一）GC（Ch.P.(2010)维生素E及其制剂）三、含量测定第四节维生素E的分析（二）HPLCf=AS/cSAR/cR含量%=×100%=cS×VWf××VAXAS’/cS’W×100%1．在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是（）A.氯氮卓B.维生素AC.普鲁卡因D.盐酸吗啡E.维生素C2.下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是（）

A.维生素AB.维生素B1C.维生素CD.维生素DE.维生素E练习3．既具有酸性又具有还原性的药物是（）

A.维生素AB.咖啡因C.苯巴比妥

D.氯丙嗪E.维生素C4.维生素C的鉴别反应，常采用的试剂有（）

A.碱性酒石酸铜B.硝酸银C.碘化铋钾

D.乙酰丙酮E.三氯醋酸和吡咯5.测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了（）

A.保持维生素C的稳定B.增加维生素C的溶解度

C.使反应完全D.加快反应速度

E.消除注射液中抗氧剂的干扰练习6.能发生硫色素特征反应的药物是（）

A.维生素AB.维生素B1C.维生素CD.维生素EE.烟酸7.使用碘量法测定维生素C的含量,已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于维生素C的量为（）

A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mg8．维生素A的鉴别试验为（）

A.三氯化铁反应