健康食品之‘改善过敏体质’功能评价方法

#健康食品之轼助髀整遇敏膻寰功能部估方法960712衢署食字第0960403113琥公告壹、前言健康食品的「轼助舒整遇敏艘期」功能部估，是泸少遇敏免疫反廛之功能部估。所司低遇敏免疫反廛，处封同遇敏型式有各稹遇敏反廛的指梯，如：低血清遇敏抗艘含、低瑟炎反廛、泸少遇敏反廛相相输胞激素或介节的分、舒^「箍胞分、输胞激素、 低呼吸阻等。但必须在影鬻正常免疫反廛的情汛下，封遇敏指佛有泸他作用，封健康才有助 。 以萨物置膝可以遇敏原致敏萨物，再追抗原特性免疫反廛的王佑。至於人艘的改善遇敏的萨估，可由正常人更遇敏慎向的人分叼追。我、置藤方法一、萨物置雕置藤萨物：建充羲遑用小鼠，常用的Balb/c或是B6小鼠皆可，6-8在大，雄鼠或雌鼠皆可，每.他曼 ・置一，性叼至少10展。(一)致敏小鼠本萨物置雕之遇敏免疫反廛是以腹腔注射遇敏原的模式追 ，探用遇敏原作・抗原，可以富氧化场吕作・佐蒯(adjuvant)，在注射抗原前及注射抗原一在移以眼南探血，取得血清追抗原特性抗膻滤之分析，植萨物遇敏模式之建 ，必要特阳致敏三至四次。封於呼吸道遇敏之萨物模式，宜另以隐籍致敏法使彳笑呼吸道接陶遇敏原，鼻腔遇敏之萨物模式宜以鼻腔接圈遇敏原等各稹同遇敏萨物模式。.血液抗艘滤(1)可用sandwich-ELISA免疫呈色反廛法或Radialimmunodiffusion(RID^，定血清中免疫球蛋白IgE、IgG、IgM、IgA和盥抗膻含用免疫呈色反廛法浪］定免疫球蛋白滤：将血清加入表面已覆蓄免疫球蛋白抗膻的96孔著中，静直反廛移，再加入梯有呈色酵素的抗艘作用，最够加入呈色蒯豆更梯型值封照，建由可光吸光浪］定分析^算可以算出免疫球蛋白滤。RID方法・：将血清放入培着孔中，静宜24至48小靖移，再浪J其直在大小，翼梯型值封照，算出免疫球蛋白滤 。⑵遇敏原急公的特性抗艘£生用免疫呈色反廛法浪］定抗原特性免疫球蛋白滤 ：将血清加入表面已覆蓄遇敏抗原的96孔量中，静直反廛移，再加入梯有呈色酵素的抗鼠IgE、IgG1或等抗艘作用，最够加入呈色蒯史翼梯型值封照，建由可光吸光浪］定分析^算可以算出免疫球蛋白.脾隙或是巴皓、箍胞增生反廛、输胞增生能即指免疫、徐胞受到激醉，能判增生的能。故增生能之表示，以添加殖素移，、输胞增生的值*未添加殖素特值的倍，辞*增生指(StimulationIndex)，曾辞S.I.。本置膝的、输胞增生的激物须包括遇敏原和殖素，T、输胞须以遇敏原激培着，另可使用如ConA、PHA等殖素或抗CD3抗艘的激蒯，以分析T、输胞的增生反廛。B、输胞须以遇敏原激培着，另可使用如LPS激，分析B、输胞的增生反廛。追步，郢：(1)3H-thymidine嵌入法本方法^敏，将脾隙、输胞2x106/ml置於96孔整，再加入RPMI培着基或分叼添加有LPS、ConA、PHA等、箍胞殖素的培着基。於37℃二氧化碳熊菌培着箱培着天移，加入1/zCi/well3H-thymidine，然薄培着20小、靖移，以、输胞收集篇收集、输胞於、式上，、式底乾移以华堞爷，童浪J3H-thymidine含 y算、输胞增生能 。⑵MTT法MTT的浪〕定方法，是用、输胞本身的酵素封受^的作用，£生蕨色的燮化，再追一步浪］定其吸光值。如果、箍胞受到、箍胞殖素的激，增生越多，刖活的输胞愈多，酵素的活性就备^高，可以涓性簿高的吸光值。用此一原，也可以J定箍胞的增殖反廛，但是此稹浪］定方法通常封附著性、输胞的举植^高，封愚浮性、输胞刖^ 想，、箍胞强吸光值的直版相％有第和琨象，吸光值朝法代表、箍胞值，以致^敏，追本置藤睥廛特叼注意。(3)>光艘斛童浪］定DNA的染色用餐光染色的方法分析、徐胞是否受到激，、箍胞核的的DNA是否有任何燮化，可以用bromodeoxyuridine(BrdU)的方法染色。BrdU的方法刖需要再加上一伸抗BrdU的置株抗艘加上餐光，才能用餐光艘斛童加以分析。*连一步分析是那些、输胞的DNA有增加的燮化，可以同特封连些、输胞连表面佛萨的分析。如用抗CD3及抗B220抗艘先染色，再将、输胞加以固定，然移连DNA的染色。封、输胞的表面佛西及、输胞於的DNA餐光使用 同波毛的餐光，以能符在童器上能封连群同的徐胞连分析。如果能符逵到此一目的，能符需要将、输胞分 出就可以知道是那些、输胞受到活化。.、输胞激素分置雕将分出的巴球以5x106/ml的滤置於24-孔著中，用已建定遇的遇敏原、ConA或抗CD3抗艘激迄些巴球。建遇24到48小靖的培着移，将上嘴液心下，以浪］定其、输胞激素贸造的。在取得足符椀艘以前，可将其它榆艘先保存在-70℃，等到榆艘足符特再一起浪肾*。、输胞激素的涮定是用sandwich-ELISA法。先将抗抗箍胞激素的抗艘先覆蓄在24-孔整上，在4℃静置-晚，在追置藤前先以1%PBS-BSA氤清洗去多铁抗艘。再加入浪］定的悌品至24-孔暑，於室沮2小特移加入biotin皓的抗、输胞激素抗4亶。小靖的室温静置移，加入avidin皓遇氧化酵素(avidin-linkedperoxidase)，再静置二伸小特移加入受期以呈色。上述的殖素的滤及激靖湾在置藤追之前廛先浪］定其最近*'的滤，史以已知滤的、输胞激素作^封照。.呼吸道肺泸洗液之分析⑴瑟炎、箍胞 及稹分析，如：节伊、红性白血球、中性白血球、置核球及巴球等操牲鼠展移，剪坪菜管出小，以静氏直管插入|管，戟管、邠手移，以生食里水泸洗肺部5次，回收肺泸洗液放入心管心，取上清液保存待分析。下嘴、输胞以含BSA生食罩水溶坪，建trypanbluedyeexclusion法染色，以、输胞导， 器爷，算所有存活白血球目。装置好玻片移，取、徐胞液置於cytospin 心管，cytospin移取下革玻片底乾，取LiuA染蒯染色30秒，彳戈背面以水填泸去多铁染蒯，底乾，取LiuB染蒯染色60秒，再泸去多铁染蒯，底乾，^察染色成果。以阿 伯缪封片，以油线判至少五伸祖野之、输胞或盥200候以上之、输胞.他成，^算判、徐胞所砧盥、输胞之 目。(2)瑟炎相^介节分析，如：缸第胺、、输胞激素及趣化激素缸第胺可以HPLC方法分析，唯悌品中缸第胺回收^低，目前缸第胺定多以市售的缸第胺浪〕定|*蒯.他分析。、输胞激素强趣化激素分析方法如前所述。.肺功能浪］定或其他遇敏相^有效之指梯浪］定(1)菲喘疾病模式：呼吸道但、呼吸敏感每展小鼠在最够一次吸入式致敏的隔天追肺功能浪J定，使用wholebodyplethysmography(Buxco)，以隐霸的方式依序吸入3分^的0、3.125、6.25、12.5、25mg/mLmethacholine，再分叼浪〕定3分^,，萨肺功能指梯Penh(EnhancedPause)值。(2)鼻炎疾病模式：打，”嚏、鼻阻、鼻於面稹、抓鼻次等打第嚏、扑鼻次等可以抗原溶液滴入小鼠鼻腔於，於滴入性致敏移斛10分＜於小鼠打艰嚏或抓鼻次，唯此斛方法因僧人判断差，性^大，阳多人重稹斛。（3）其他病症：其他有效建估工具.自然手、输胞活性言浪］定置藤萨物之自然手、输胞的活性，先培着自然手、输胞的梯的、输胞（YAC-1、箍胞株）。将YAC-1、箍胞翼5iCr先在一起冷着的4小靖，路残绘在?*管中的5iCr除去。再加入同目的置核、徐胞翼已建翼5iCr培着遇的梯的、输胞一起培着，培着一段靖湾移取出上清液，以Y-counter^^算其放射强。在置膝的述程中，用NP-40或是HCl将、输胞破壤，以取得51Cr的最高释放值。置膝值一背景值斛算公式= X100%最高释放值一背景值除上述傅、院方法，目前亦有以FAScan分析法，可照所使用的相%?*蒯翼域器操作程，但阳明＜斛算方式更表示方法。.吞噬、输胞活性吞噬、输胞可以分叼浪〕定维核球（monocyte）或是中性白血球的吞噬能，目前可以分叼用吞噬、输菌如E.coli或酵母菌等方法加以浪］定也可以用已梯西好的E.coli（如餐光），在、输胞吞噬移用餐光艘（，埃加以分析。二、人艘的床^藤必须委尹圃於外大孽食品菅着、炉桑等相％研究所、芦孽中心或其他中央衡生主管楂^^可之研究楂隼乳，需有殍而翼，史遵循黄生置位封保健食品人艘置藤有％之相%嵋定。人艘?*藤的遇敏免疫功能部估，原刖上翼萨物的萨估近似，慎连人艘的床？*藤之前廛建述人艘^藤委员备通遇才能加以追。受？*者分封照、他（吃待浪惨品）、置藤、坦（分二至三、他蒯），分叼在置膝前移探血液，浪J定■抗艘，豆分周遽血液型核、输胞，连以下置藤。同睥，建^由至少一家以上之？*藤中心连^藤以求公允。（一）遇敏免疫反廛指梯以下分析方法强萨物置膝部分方法相同，唯须使用分析人的^蒯。.盥IgE抗艘强遇敏抗原特性IgE抗艘之浪］定封受？*者连探血移，血清部分可用sandwich-ELISA免疫呈色反廛法或Radioimmunodiffusion圆山）法，定血清中免疫球蛋白IgE、出抗膻含，建^同特浪〕定IgG、IgM、IgA的含，^其是否有所建化，分析方法如前所述。.遇敏抗原特性增生反廛封受^者追探血移，以Percoll梯法分得巴球，如前所述，以证*'滤之殖素，常或特定遇敏原激移，分析其、输胞增生能 。.遇敏抗原特性、输胞激素分同前，以Percoll梯法分得巴球，如前所述，以道,*'滤之殖素，常或特定遇敏原 激移，收集上清液分析其、输胞激素含。.周遽血液置核、输胞分培着，连延炎介剪分析同前，以Percoll梯法分得巴球，如前所述，以道.*'滤之置核球殖素，常或特定遇敏原