细菌的生理生化反应实验报告

细菌的生理生化反应实验报告【实验目的】

了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。

【实验原理】

通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些第五的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物带血的多样性。某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。

微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色化合物为V.P.反应阳性。有些细菌发酵糖类产生有机酸较多，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，时发酵液变红色，为甲基红反应阳性。某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。

【实验材料和用具】菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管、杜氏小管。【实验方法】（一）V-P反应1.试管标记取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。3.观察记录去除以上培养物，分别取出2ml培养液加入另外5支相应编号的空试管中，加入与培养液等量的V-P试剂，充分震荡2min。放置37度恒温培养箱中培养30min观察记录结果。（二）甲基红实验于V-P实验留下的培养液中，分别加入2-3滴甲基红指示剂，立即观察培养液的颜色变化（三）吲哚实验1.试管标记取5只装有蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。3.观察记录在培养基中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿试管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。观察记录结果（四）糖发酵试验1.试管标记取分别装有葡萄糖、蔗糖、乳糖发酵培养液试管各4支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。2.接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至上述相应试管的培养基中。空白对照不接种。置37度恒温培养箱中培养24-48h。3.观察记录【实验结果与分析】（一）V-P大肠产气枯草变形对照结果—+———产气肠杆菌结果为阳性，其余为阴性。（二）甲基红大肠产气枯草变形对照结果+++——大肠杆菌、产气肠杆菌、枯草芽孢杆菌结果为阳性，变形菌为阴性。（三）糖发酵大肠产气变形对照葡萄糖颜色+—+—是否产气+———乳糖颜色+—+—是否产气+———蔗糖——+—是否产气——+—大肠杆菌可以利用葡萄糖和乳糖，并且产气；普通变形菌可以利用葡萄糖、乳糖和蔗糖并且在蔗糖中产气。（四）吲哚实验大肠产气枯草变形对照结果+——+—大肠杆菌和普通变形菌结果为阳性，其余为阴性。（五）抗生素抑菌圈大小氯苯青霉素氯霉素卡那霉素链霉素对照金黄2.70.91.20.9-大肠1.11.21.21.3-氯苯青霉素对