氨基酸多肽蛋白质课件

氨基酸多肽蛋白质ppt课件1氨基酸多肽蛋白质ppt课件2主要内容第一节氨基酸(AminoAcid)第二节多肽(Peptides)第三节蛋白质(Proteins)主要内容第一节氨基酸(AminoAcid)3第一节氨基酸(AminoAcids)一、结构、分类与命名二、性质（一）物理性质（二）化学性质第一节氨基酸(AminoAcids)一、结构、分类与4(一)氨基酸的结构20standardaminoacidsinproteins一、结构、分类与命名

(一)氨基酸的结构20standardaminoa52、结构表示L-氨基酸L-甘油醛(对照标准)S-L-半胱氨酸R-半胱氨酸2、结构表示L-氨基酸L-甘油醛S-L-半胱氨酸R-半胱氨酸6(二)分类分类-COOH-NH2氨基酸（数）酸性氨基酸2个1个2个中性氨基酸1个1个15个碱性氨基酸1个2个3个(二)分类分类-COOH-NH2氨基酸（数）酸7*骨架变化(二)结构和命名*骨架变化(二)结构和命名8UV特征吸收：l=280nmUV特征吸收：l=280nm9氨基酸多肽蛋白质ppt课件10Acidicaminoacids—containingtwocarboxylicgroupsAcidicaminoacids—containing11Basicaminoacids——containingtwoaminogroupsBasicaminoacids——containin12必需氨基酸（8种）三字符：Val,Leu,Ile,Thr,Met,Trp,Lys,Phe中文名：缬、亮、异亮、苏、蛋、色、赖、苯丙体内不能合成，必需由食物提供的氨基酸。必需氨基酸（8种）三字符：Val,Leu,Ile,Thr13修饰氨基酸的结构L-胱氨酸L-羟脯氨酸

L-羟赖氨酸L-甲赖氨酸修饰氨基酸的结构L-胱氨酸14非蛋白质氨基酸定义：不参与构成蛋白质但却以各种形式分布于植物、细菌和动物体内的这些氨基酸。形式存在：以游离或结合形式存在的氨基酸。包括：-氨基酸

-氨基酸

-氨基酸

-氨基酸D-氨基酸非蛋白质氨基酸定义：不参与构成蛋白质但却以各种形式分布于植物15例子非蛋白质氨基酸氨基酸作用鸟氨酸瓜氨酸精氨酸的代谢中间体

-氨基丁酸是谷氨酸的脱羧产物脑内的重要神经递质

-丙氨酸/构成维生素泛酸的基本成分D-丙氨酸D-谷氨酸/细菌的肽聚糖的成分D-赖氨酸D-鸟氨酸/某些革兰氏阳性菌的糖肽中的成分例子非蛋白质氨基酸氨基酸作用鸟氨酸精氨酸的代谢中间体-氨基16二、性质（Properties）（一）物理性质（二）化学性质1、酸碱两性与等电点2、脱羧反应(decarboxylation)3、与HNO2反应4、与茚三酮(ninhydrin)反应5、成肽反应二、性质（Properties）（一）物理性质171）酸碱性(acid-baseproperties)氨基酸既是酸又是碱2）易于水，不溶于非极性溶剂。3）固体熔点高（200-300℃）4）旋光性(opticalactivity)

氨基酸的结构存在形式：氨基酸在结晶状态或在接近中性的溶液中是以两性离子(dipolarion)的形式存在的,是一种内盐(innersalt)（一）物理性质1）酸碱性(acid-baseproperties)氨18（二）化学性质1、酸碱性与等电点

(1)两性电离Aminoacidsareampholytes(两性电解质)碱性电离酸性电离（二）化学性质1、酸碱性与等电点Aminoacidsa19酸碱性铵盐羧酸盐酸碱性铵盐羧酸盐20（2）氨基酸的电离平衡在三种离子共同存在于一个平衡体系中以哪种离子为主取决于氨基酸的结构和溶液的酸碱度。阳离子两性离子阴离子（2）氨基酸的电离平衡在三种离子共同存在于一个平衡体系中阳离21等电点(IsoelectricPoint，pI)定义：在某一pH值下，氨基酸所带正电荷的数目与负电荷的数目正好相等，即净电荷为零，该pH值为该氨基酸的等电点（pI）。1、aminoacids几乎全部以两性离子I的形式存在（并伴以极少量的阳性离子和阴性离子）2、氨基酸的溶解度最小等电点时等电点(IsoelectricPoint，pI)定22（1）氨基酸结构的影响氨基酸pI酸性氨基酸＜4.0中性氨基酸5.0~6.5碱性氨基酸＞7.5（1）氨基酸结构的影响氨基酸pI酸性氨基酸＜4.0中性氨基酸23（2）溶液酸碱度的影响pKaCOOH:2.2pKb:11.8pKaNH3+:9.4pKb:4.6pH<PIpH=PIpH>PI

阳离子两性离子阴离子（2）溶液酸碱度的影响pKaCOOH:2.224氨基酸的电泳示意图PH精氨酸丙氨酸天冬氨酸278.5正电荷/负级正电荷/负级正电荷/负级正电荷/负级负电荷/正级负电荷/正级正电荷/负级负电荷/正级负电荷/正级氨基酸的电泳示意图PH精氨酸丙氨酸天冬氨酸278.5正电荷252、脱羧反应(decarboxylation)组胺尸胺2、脱羧反应(decarboxylation)组胺尸胺26γ-氨基丁酸（GABA）γ-氨基丁酸是由谷氨酸中

-羧基脱羧后转变而成是脑内存在的重要神经递质L-谷氨酸γ-氨基丁酸

γ-氨基丁酸（GABA）γ-氨基丁酸L-谷氨酸273、与HNO2反应根据放氮的体积，可测定氨基酸和多肽的的含量。此种方法称为vanSlyke氨基氮测定法3、与HNO2反应根据放氮的体积，可测定氨基酸和多肽的的含量284、与茚三酮(ninhydrin)反应茚三酮α-氨基酸蓝紫色(Ruhemann’spurple)鉴别：α-氨基酸4、与茚三酮(ninhydrin)反应茚三酮α-氨295、成肽反应二肽(dipeptide)酰胺键或称肽键5、成肽反应二肽(dipeptide)酰胺键或称肽键30例题与习题现在有四个氨基酸：苯丙氨酸pI=5.5、脯氨酸pI=6.3、门冬氨酸pI=2.8和赖氨酸pI=9.7，请问在以下pH条件下进行电泳，各氨基酸的主要存在形式是什么？在外电场作用下，移向阳极还是阴极？苯丙氨酸脯氨酸门冬氨酸赖氨酸（1）pH=7.0（2）pH=6.0（3）pH=5.0（4）pH=2.0正阴极正阴极

负阳极

正阴极负阳极负阳极负阳极

正阴极正阴极正阴极正阴极正阴极负阳极

正阴极

负阳极

正阴极例题与习题现在有四个氨基酸：苯丙氨酸pI=5.5、脯氨酸pI31第二节肽(peptide)第十七章氨基酸、多肽和蛋白质第二节肽肽是氨基酸残基之间彼此通过酰胺键(肽键)连接而成的一类化合物。其通式为：氨基酸氨基酸二肽

多肽分子中的酰胺键称为肽键(peptidebond),一般为α-COOH与α-NH2脱水缩合而成。肽也以两性离子的形式存在。人民卫生电子音像出版社32第二节肽(peptide)第十七章氨基酸、多肽和蛋白二肽分子的两端仍存在着游离的-NH3+和-COO-,因此它可以再与另一分子氨基酸脱水缩合形成三肽;同样依次可形成四肽、五肽…。四肽十肽以下的称为寡肽（oligopeptide）大于十肽的称为多肽（polypeptide）肽中的氨基酸单位称为氨基酸残基(aminoacidresidue)

第十七章氨基酸、多肽和蛋白质第二节肽上页下页首页邓健制作张鲁雁审校33二肽分子的两端仍存在着游离的-NH3+自然界存在多种肽类物质青霉素短杆菌肽S脑啡肽Tyr-Gly-Gly-Phe-LeuleucineenkephalinTyr-Gly-Gly-Phe-Metmethionineenkephalin自然界存在多种肽类物质青霉素34虽有环肽存在,但绝大多数的肽呈链状,称为多肽链

N-末端(N-terminalend)：保留游离α-NH2

的一端, 也叫氨基末端，一般写在肽链的左边。

C-末端(N-terminalend):保留有α-CO2H

的一端， 也叫羧基末端,通常写在肽链的右边。

肽链骨架:所有链状多肽都有一个共同的骨架一、肽的结构和命名上页下页首页人民卫生电子音像出版社35虽有环肽存在,但绝大多数的肽呈链状,称为多肽链N-三肽(tripeptide)。

命名：以C-末端的氨基酸为母体，其它氨基酸残基称氨酰依次命出。丙氨酰半胱氨酰亮氨酸缩写成：丙-半胱-亮或Ala-Cys-Leu简写成：A-C-L思考题：Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu与Leu-Ala-Tyr-Gly-Ser相同吗?三肽(tripeptide)。命名：以C-末端的氨基酸为母36肽键平面肽单元（-C

-CO-NH-C

-）特征：（1）肽单元是平面结构。（2）肽键具有局部双键性质。（3）肽键呈反式构型

与C-N键相连的O与H或两个C

原子之间一般呈较稳定的反式构型。

肽键平面肽单元（-C-CO-NH-C-）37PeptideBonds肽键的平面特征PeptideBonds肽键的平面特征38二硫键（Disulfidebond）二硫键（Disulfidebond）39DisulfideBonds(二硫键)DisulfideBonds(二硫键)40烫发的过程是一个旧二硫键还原打开而后又氧化形成新的二硫键过程烫发的过程是一个旧二硫键还原打开而后又氧化形成新的二硫键过程41两性电离和等电点脱羧反应与亚硝酸反应酰化反应缩二脲反应，缩二脲反应被广泛用于肽和蛋白质的定性和定量分析。二、肽的性质邓健制作张鲁雁审校42两性电离和等电点二、肽的性质邓健制作张鲁雁审校4（1）氨基酸组分分析（2）氨基酸顺序分析三、肽结构的测定（1）氨基酸组分分析三、肽结构的测定43（1）肽中氨基酸组分分析——Thenumberandkindsofaminoacids——6NHCl,heatingat100oCfor24h——automatedaminoacidanalyzer（1）肽中氨基酸组分分析——Thenumberand44AminoAcidsAnalyzerAminoAcidsAnalyzer45（2）肽中氨基酸顺序分析①N-端测序：Edman降解法：可用于自动测序适用于50肽（2）肽中氨基酸顺序分析①N-端测序：Edman降解法：可46②C-端氨基酸残基的分析：羧肽酶羧肽酶是肽链外切酶（exopeptidase）它专门催化水解肽链末端（即C-端）的肽键。羧肽酶A水解断裂那些不是Arg（精）和Lys（赖）的C-端氨基酸羧肽酶B只水解断裂C-端为Arg或Lys的氨基酸②C-端氨基酸残基的分析：羧肽酶羧肽酶羧肽酶A水解断裂那些47③多肽链的选择性水解(酶法和化学法)化学法—溴化氰水解法，选择性切割甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。③多肽链的选择性水解(酶法和化学法)化学法—溴化氰水解48④、采用重叠法——采用重叠法得出整个肽链的氨基酸顺序④、采用重叠法——采用重叠法得出整个肽链的氨基酸顺序49Tyr-Lys-Glu-Met-Leu-Gly-Arg-Ala—Gly一个9肽其组成是2Gly、Tyr、Lys、Arg、Glu、Met、Leu、Ala；用DND-Cl和羧肽酶法证明N、C两端分别为Tyr和Gly；用蛋白酶水解得一组肽片段，测得各片段的氨基酸排列次序为：Ala—Gly、Tyr—Lys、Glu-Met-Leu-Gly-Arg；若用化学水解得另一组肽片段，各片段的顺序为：Tyr-Lys-Glu-Met，Leu-Gly-Arg-Ala—Gly。试推测该9肽中氨基酸的排列顺序（一级结构）Tyr-Lys-Glu-Met-Leu-Gly-Arg50四、生物活性肽（activepeptide）定义：是指在生物体内存在并具有活性的一类肽类。现有：神经肽、脑啡肽、催产素、加压素、谷胱甘肽、多肽生长因子、非蛋白质来源多肽作用：在体内一般含量较少，结构多样，却起着重要的生理作用。动物体内控制和调节代谢的激素（hormone）、脑内的神经递质（neurotransmitter）、微生物中的一些抗菌素（antibiotic）等都是肽类。生命科学中的某些重要课题的研究例如细胞分化、肿瘤发生、生殖控制以及某些疾病的病因与治疗等，均涉及到活性肽的结构和功能。

四、生物活性肽（activepeptide）定义：是指在生51第三节蛋白质一、蛋白质的元素组成二、蛋白质的分类三、蛋白质的结构四、蛋白质的理化性质第三节蛋白质一、蛋白质的元素组成52一、蛋白质的元素组成元素组成：碳50～55％，氢～8％，氧20～23％，氮13～19％，硫0～4％有些蛋白质还含有微量磷、铁、锌、铜、钼、碘等元素其中氮的含量在各种蛋白质中含量都比较接近，平均为16％因此，只要测出生物样品中的含氮量，就可粗略计算出其蛋白质的含量每1g氮相当于6.25g蛋白质一、蛋白质的元素组成元素组成：碳50～55％，氢～8％，氧253（一）根据化学组成分类1、单纯蛋白质(simpleprotein)组成：只由

-氨基酸例如清蛋白、球蛋白、谷蛋白、精蛋白、硬蛋白等2、结合蛋白(conjugatedprotein)组成：由单纯蛋白质和非蛋白质(常称为辅基)两部分常见的辅基：核酸、糖、脂、磷酸及色素等包括：核蛋白、糖蛋白、脂蛋白、磷蛋白和色蛋白二、蛋白质的分类（一）根据化学组成分类1、单纯蛋白质(simpleprot54（二）根据形状分类1、球状蛋白质(globularprotein)外形:接近球状，溶解度较好例如：酶、免疫球蛋白等2、纤维状蛋白质(fibrousprotein)外形:类似细棒或纤维，一般不溶于水例如：毛发中的角蛋白，结缔组织中的胶原蛋白及弹性蛋白等（二）根据形状分类1、球状蛋白质(globularprot55（三）根据功能分类1、活性蛋白质（activeprotein）此类是指在生命运动中一切具有生物活性的蛋白质和它们的前体。例如：酶、运动蛋白、运输蛋白、激素蛋白和防御蛋白等2、结构蛋白质（structuralprotein）此类是指担负保护或支持作用的蛋白质例如：角蛋白、弹性蛋白和胶原蛋白等（三）根据功能分类1、活性蛋白质（activeprotei56三、蛋白质的结构三、蛋白质的结构57（一）蛋白质的一级结构（primarystructure）蛋白质的一级结构是指蛋白质中氨基酸残基之间的排列顺序一级结构是蛋白质的基本结构其主要化学键是肽键，又称主键例如，胰岛素一级结构：由－条A链(21肽)和一条B链(30肽)通过二硫键连接而成，分子中共有三个二硫键作用：降低体内血糖含量用途：在临床上治疗糖尿病（一）蛋白质的一级结构（primarystructure）58人胰岛素分子的一级结构由51个氨基酸残基组成A、B二条多肽链。A链内有一链内二硫键，A链与B链之间借2条二硫键相连。人民卫生电子音像出版社59人胰岛素分子的一级结构由51个氨基酸残基组成A、B二条蛋白质二级结构（secondarystructure）定义：是指多肽链的主链骨架在空间盘曲折叠形成的方式，并不涉及侧链R基团的构象形式：-螺旋、

-折叠层、

-转角和无规卷曲等几种类型维系主链构象稳定的最主要因素是主链的羰基和亚氨基之间所形成的氢键（二）蛋白质的空间结构(二级、三级和四级结构)蛋白质二级结构（secondarystructure）定义60氨基酸多肽蛋白质ppt课件61氨基酸多肽蛋白质ppt课件62三级结构（tertiarystructure）定义：是蛋白质分子在二级结构基础上进一步盘曲折叠形成的三维结构，是多肽链在空间的整体排布。三级结构的形成和稳定主要靠侧链R基团的相互作用，作用力有以下几种：（1）氢键（2）盐键（3）疏水作用力（4）VanderWaals力（5）二硫键三级结构（tertiarystructure）63氨基酸多肽蛋白质ppt课件64四级结构（quaternarystructure）四级结构：由两条或两条以上具有三级结构的多肽链通过疏水作用力、盐键等次级键相互缔合而成。每一个具有三级结构的多肽链称为亚基（subunit）。在蛋白质分子中，亚基的立体排布、亚基间相互作用与接触部位的布局称为四级结构（quaternarystructure）。四级结构不包括亚基内部的空间结构亚基：一般多为偶数为2～10个时，是较小的蛋白质多的可达上千个四级结构（quaternarystructure）四级结构65氨基酸多肽蛋白质ppt课件66四、蛋白质的理化性质

（一）蛋白质的两性电离和等电点（二）蛋白质的胶体性质（三）蛋白质的变性（四）蛋白质的沉淀（五）蛋白质的颜色反应四、蛋白质的理化性质（一）蛋白质的两性电离和等电点67（一）蛋白质的两性电离和等电点pH＜pIpH=pIpH＞pI阳离子电中性阴离子

（一）蛋白质的两性电离和等电点pH＜pI68（二）蛋白质的胶体性质蛋白质的分子量：有的可达数千万水中形成的颗粒直径：1～lOOnm有胶体溶液的性质，不能通过半透膜可用半透膜将蛋白质与小分子物质分离而得以纯化这种方法称为透析法透析法是实验或工业生产上提取和纯化蛋白质常用的方法（二）蛋白质的胶体性质蛋白质的分子量：有的可达数千万69（三）蛋白质的变性是指蛋白质在某些物理或化学因素的作用下其空间结构遭到破坏致使蛋白质生物活性丧失和理化性质改变（三）蛋白质的变性是指蛋白质70引起蛋白质变性的因素物理因素有：加热、紫外线照射、超声波和剧烈振摇等化学因素有：强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐等引起蛋白质变性的因素物理因素有：加热、紫外线照射、超声波和剧71变性蛋白质(denaturedprotein)变性作用并不破坏蛋白质的一级结构变性蛋白质的表现：首先是失去生物活性。如血红蛋白失去运输氧的功能，胰岛素失去调节血糖的功能，酶失去催化能力等其次是各种理化性质的改变。如溶解度降低，易于沉淀等。变性蛋白质(denaturedprotein)变性作用并不72变性蛋白质（2种）1、可逆变性当变性蛋白质去掉变性因素后，能恢复原有性质，这种变性称为可逆变性或称复性2、不可逆变性变性蛋白质（2种）1、可逆变性73胃蛋白酶加热到80℃～90℃就失去其消化蛋白质的功能当把温度回调到37℃，则其功能又可恢复。目前很多蛋白质变性后尚不能复性，如机体衰老时的蛋白质变性尚属不可逆过程。胃蛋白酶加热到80℃～90℃74变性作用的实际意义一是防止蛋白质激素、酶、抗体、疫苗等活性蛋白质在生产和保存过程中变性，以保持其生物活性二是变性原理可用于灭菌等变性作用的实际意义一是防止蛋白质激素、酶、抗体、疫苗等活性蛋75（四）蛋白质的沉淀调节蛋白质溶液的pH值至等电点,再加入适当的脱水剂除去蛋白质分子表面的水化膜,可使蛋白质分子聚集而从溶液中沉淀析出。沉淀蛋白质的方法：盐析常用(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl、MgSO4等有机溶剂常用甲醇、乙醇、丙酮等亲水性溶剂重金属盐常用

Ag+、Cu2+、Pb2+等常用的酸：苦味酸、钨酸、三氯乙酸、磺基水杨酸等上页下页首页邓健制作张鲁雁审校76（四）蛋白质的沉淀调节蛋白质溶液的pH值至等1、盐析法（saltingout）盐析法是指加盐使蛋白质沉淀析出现象的方法。即，分段盐析法是指调节盐浓度可使混合蛋白质先后析出的方法。常用的中性盐：硫酸铵、氯化钠等原理：破坏蛋白质胶体周围的水化膜中和了蛋白质分子的电荷一般用盐析沉淀出来的蛋白质不变性。血清中加硫酸铵至50％饱和度，则球蛋白先沉淀析出，加硫酸铵至饱和，则清蛋白沉淀析出1、盐析法（saltingout）盐析法是指加盐使蛋白质沉772、加有机溶剂有：乙醇、丙酮等原理：由于这些溶剂对水的亲和力强于蛋白质分子而破坏了蛋白质周围的水化膜，使蛋白质沉淀在蛋白质的pI时，加入这些溶剂则沉淀效果更好2、加有机溶剂有：乙醇、丙酮等783、加重金属盐有：硝酸银、醋酸铅及氯化高汞等原理：这是因为蛋白质在pH>pI的溶液中带负电荷，可与这些重金属正离子结合成不溶性的蛋白盐而沉淀。3、加重金属盐有：硝酸银、醋酸铅及氯化高汞等79