-spob试验在结核性脑膜炎诊断中的应用

-spob试验在结核性脑膜炎诊断中的应用

甲脑性脑炎的诊断主要取决于临床表现和捐款性质，容易导致诊断错误和泄漏，从而影响患者的治疗和预后。因此如何快速、准确的诊断结核性脑膜炎是亟待解决的临床难题。T-SPOT.TB试验(结核感染T细胞斑点实验)是通过检测受结核菌特异性抗原刺激后释放干扰素的外周血特异性T细胞来确定结核感染的方法。近年研究表明,通过T-SPOT.TB的方法来诊断活动性肺结核分枝杆菌感染的敏感度较高,而在我国,对于该方法在肺外结核以及结核性脑膜炎诊断敏感度的文章报道很少。此研究使用结核感染T细胞斑点实验对我科收治的高度怀疑结核性脑膜炎患者的脑脊液进行检测,来评价此方法在诊断结核性脑膜炎中的应用价值。1数据和方法1.1结脑性期结脑者临床疗效分析对临床上以发热、头痛、脑膜刺激征(+)为主要表现的患者,且MRI诊断为脑积水、肉芽增生或基底节区渗出性改变或脑脊液检查表现为(脑脊液的白蛋白升高,糖下降,单核细胞及其比例升高)且临床高度怀疑结脑的26例患者分为实验组,予以T-SPOT.TB试验,根据其结果,对临床上考虑为结脑的患者予以诊断性抗痨治疗。根据最终治疗和随访结果,实验组中有23例诊断为结核性脑膜炎,其中脑脊液中结核杆菌培养阳性或经过病理学活检证明伴有肺部及另外部位有结核感染患者14例;无结核细菌学感染及病理性活检证据,但通过诊断性抗痨最后得到痊愈的患者9例;随访后非结核性中枢神经系统感染患者2例。把患有非结核引起的感染性脑膜炎患者24名分为对照组,其中化脓性脑膜炎13例,病毒性脑膜炎8例,化脑合并真菌性脑膜炎2例,隐球菌性脑膜炎1例。1.2方法1.2.1隆抗体的分离纯化TB试验采集患者脑脊液约20ml,肝素抗凝后,离心分离出单核细胞液。然后洗板2次,取一块预包被有γ-干扰素的单克隆抗体的96孔板,在4个孔内分别接种分离出单核细胞的混悬液。阴性对照只包含细胞悬液,阳性对照则加入5UL植物血凝素(PHA),实验孔分别加入抗原ESAT-6(A)和CFP-10(B),放在5%CO2孵箱中37℃培养16~24h后,最后加入显色剂显色,静置7min。用肉眼观察结果并用吸水纸终止反应。斑点形成细胞的数日来描述并记录斑点的各种参数。1.2.2阳性对照测试孔斑数当测试孔A或B达到以下标准则判定为阳性结果:测试孔斑点数减去阴性对照孔斑点数大于5,并且测试孔斑点数必须≥2倍的阴性对照孔斑点数。另外,每个病人必须对阳性对照有满意的反应,即斑点数大于20或者充盈整个微孔。如果对一种或者两种抗原反应阳性,也可认定为阳性。该试剂盒由英国牛津公司提供。1.2.3评估方法1.3统计学处理方法本实验采用SPSS16.0数据包进行分析,计数资料之间的比较采用卡方检验,计量资料之间的比较采用t检验,组内比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。2tspot.tb试验在实验组可疑结核性脑膜炎26例患者中,23例T-SPOT.TB试验阳性(88.5%)。对照组中24例TSPOT.TB试验阴性20人(83.3%)结果如表1所示。TSPOT.TB试验诊断结核性脑膜炎的敏感度为88.5%(95%可信区间CI49.9~91.3)特异度为83.3%(95%可信区间CI69.3~97.8),阳性预测值为83.5%(95%可信区间CI72.6~97.9),阴性预测值为94.7%(95%可信区间CI48.3~97.1)。如表2所示。3t-spol.tb试验通过检测IFN-γ的产生,来快速诊断结核分支杆菌感染。该方法是使用编码结核分支杆菌基因组的差异-1(RD-1)区域的ESAT-6和CFP-10的多肽,RD-1区域在卡介苗疫苗的所有菌株和绝大多数非结核分枝杆菌是不存在。这些试验检测活动性结核的敏感性为76%~100%,特异性是88%以上。目前,国内外多项临床研究证实了全血或血清的T-SPOT.TB检测在活动性肺结核以及肺外结核的敏感度、特异度明显高于TST,痰培养,痰TBDNA,血TB-AB.等方法。特别是在合并免疫抑制及结核潜伏感染的诊断中,具有快速,敏感性及特异性较高的优点,在临床上对疑似结核病的患者进行T-SPOT.TB试验对鉴别诊断具有重要价值。结核性脑膜炎属于肺外结核的一种类型,肺外结核的现代诊断方法以微生物法和免疫法为主,国外的一些研究资料表明结核病中25%~30%属于肺外结核,肺外结核感染的死亡率占总结核死亡率的14.1%~17.6%。但是,关于T-SPOT.TB试验在诊断肺外结核病中的应用价值的报道较少,英国某传染病医院对64位采用过T-SPOT.TB试验诊断活动性肺外结核的患者进行回顾性研究,与培养法相比,其敏感度为94%,特异度为85%。在本项试验中,T-SPOT.TB用于诊断结核性脑膜炎的敏感度为88.5%,特异度为83.3%,同国内外文献报道相一致。根据研究,本实验具有重要的临床意义,和以往结核性脑膜炎的诊断方法相比较,本项试验方法的敏感度要高,特异度也更好。另外与其他一些新的结核感染检测方法相比,T-SPOT.TB试验也有较为明显的优势,比如实验中采用比较多的检测结核分枝杆菌的QPCR方法,现在临床上的大规模研究表明其真实的敏感度仅为45%。本研究的阳性预测值为83.5%,阴性预测值为94.7%,对于鉴别容易与结核性脑膜炎混淆的一些疾病,比如化脓性脑膜炎、霉菌性脑膜炎、病毒性脑膜炎等,该实验均有鉴别诊断的作用,且体现了很好的临床应用价值。但是,本试验的不足之处在于研究例数较少,未在对明确排除结核感染的患者中进行T-SPOT.TB实验的特异性进行评价,如果该项检测方法能够联合QPCR的方法检测在结核性脑膜炎的诊断作用可能其诊断的敏感性和特异性会更高,也为下一步的诊断提供新的方向。现在国外的一些最新的研究成果证实,为了区分活动性及稳定期结核感染,对病变部位的浆膜腔积液进行离心分离出单核细胞液,将其予以T-SPOT.TB试验,该方法的敏感度和特异度较高。相关文章报道,对17例印度结脑患者脑脊液单个核细胞进行T-SPOT.TB试验,诊断活动性结核性脑膜炎其敏感度和特异度分别达到90%和100%。T-SPOT.TB试验在心包积液,胸腔积液,腹腔积液,肺泡灌洗液等也有成功的病例报道。T-SPOT.TB试验以脑脊液作为检测标本,脑脊液的获取较简便,并且能快速得出结果,常规为第二天。该方法的临床应用不仅可对结核感染的患者进行早诊断、早治疗,且还可以尽量避免一些因误诊,漏诊导致的一些耐药性的产生,在很大程度上节省了医疗费用,并且还可以通过测定效应T淋巴细胞来协助判定人体是否完全清除了病原体,用来作为判定治疗疗