其它革兰阴性杆菌

第二十二章

其他革兰阴性杆菌

P2391嗜血杆菌属鲍特菌属军团菌属布鲁菌属巴斯特菌属弗朗西斯菌属2第一节嗜血杆菌属（Haemophilus）3返回

嗜血杆菌属为一群无动力、无芽胞、营养要求高（人工培养需新鲜血液或X、V因子）的革兰阴性小杆菌

分类

嗜血杆菌属（Haemophilus）隶属于巴斯德菌科，包括多个种，其中与临床有关的有以下9个种流感嗜血杆菌（H.influenzae）副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae）溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus)副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus）杜克雷嗜血杆菌（H.ducreyi）埃及嗜血杆菌（H.aegyptius）嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus）副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus)迟缓嗜血杆菌（H.segnis）4临床意义5菌种常栖部位及所致疾病流感嗜血杆菌

寄居于正常人呼吸道，引起原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。副流感嗜血杆菌口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。溶血嗜血杆菌鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。副溶血嗜血杆菌口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜炎杜克雷嗜血杆菌软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。埃及嗜血杆菌急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热嗜沫嗜血杆菌咽部正常菌群、牙菌斑中常见菌、偶致心内膜炎和脑脓肿副嗜沫嗜血杆菌咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血症、甲沟炎、脑脓肿、脑膜炎。

几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病

流感嗜血杆菌

1892年,波兰细菌学家法福首先从流行性感冒患者鼻咽部分离出，当时误认为是流感的病原菌。直到1933年分离出流感病毒，才纠正生物学特性形态与染色革兰阴性短小杆菌初分离常呈球杆状，有时呈逗点状、杆状、丝状等多形态无芽孢、无鞭毛粘液型菌株有荚膜且毒力强6培养特性需氧或兼性厌氧最适温度35℃初分离需5%-10%CO2

营养要求高、在生长过程中需含有生长因子X（高铁血红素）和V（辅酶I或Ⅱ）巧克力平板：较小、灰白、光滑、湿润、似露滴状卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在BAP上共同培养时，由于后者能合成V因子释放于培养基中，故在金黄色葡萄球菌周围，流感嗜血杆菌菌落较大，远离金黄色葡萄球菌菌落则小7有荚膜多糖抗原和菌体抗原两种。根据荚膜多糖抗原（具有型特异性）分abcdef六型，b型毒力最强抵抗力：弱，对热和干燥、消毒剂均敏感致病物质

荚膜：抗吞噬

菌毛：粘附、定植

内毒素：致病作用尚不清

IgA蛋白酶：水解sIgA免疫性病后有免疫力

8

*原发感染：引起急性化脓性感染（多为有荚膜的ｂ型菌株），

如化脓性脑膜炎、鼻咽炎、咽喉会厌炎、心包炎

化脓性关节炎等，严重的引起菌血症，以小儿

多见。

*

继发感染：多是内源性感染，以成人多见（多无荚膜）9流行性感冒麻疹百日咳结核病继发于临床表现慢性支气管炎中耳炎鼻窦炎流感嗜血杆菌所致疾病

：该菌较广泛地寄居于正常人呼吸道微生物检验

标本采集根据不同感染分别采集鼻咽拭子、痰液、脑脊液、脓液、血液等标本采集原则：在疾病早期采取标本，立即送检在取鼻咽拭子标本时以肉汤湿润，防止干燥对心内膜炎、菌血症患者取血液标本痰液标本，应用无菌生理盐水洗涤，浓痰可用菠萝蛋白酶或胰蛋白酶消化后再接种10检验程序

11血液、脑脊液增菌培养35℃鼻咽拭子、痰液、脓液

直接涂片染色革兰阴性小杆菌，多形性初报5%-10%CO2菌落特征菌体形态卫星现象X、V因子需求试验分离培养：巧克力平板35℃鉴定可疑菌落报告

分型吲哚、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶（生物分型）荚膜肿胀试验（荚膜多糖抗原分型）流感嗜血杆菌检验程序脑脊液检验方法

分离培养培养条件：营养要求高需要X、V因子生长温度为35℃初分离需5%-10%CO2巧克力琼脂培养基12X、V因子需求试验流感杜克雷13菌落特征：巧克力琼脂培养基上较小、灰白、光滑、湿润、似露滴状流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落14卫星现象卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在BAP上共同培养时，由于后者能合成V因子释放于培养基中，故在金黄色葡萄球菌周围，流感嗜血杆菌菌落较大，远离金黄色葡萄球菌菌落则小鉴定

菌落特征菌体形态卫星现象X、V因子需求试验15血清学试验直接荧光抗体法沉淀试验荚膜肿胀试验16嗜血杆菌因子β溶血发酵XV葡萄糖蔗糖乳糖甘露醇木糖触酶CO2生长ONPG流感嗜血杆菌++-+---D+--副流感嗜血杆菌-+-++-+-DDD溶血嗜血杆菌++++---D+--副溶血嗜血杆菌-++++---+--注：D为不同结果嗜血杆菌属中种的特征药物敏感试验药敏试验：K-B法培养基：HTM质控菌株：（ATCC49247）需常规检测β-内酰胺酶耐药机制是：

1.由质粒介导的β-内酰胺酶基因TEM-1型

2.由染色体介导的PBP（青霉素结合蛋白）的改变

3.对氯霉素、四环素耐药与R质粒相关17第二节鲍特菌属（Bordetella）18返回

鲍特菌属（Bordetella）是一类革兰阴性球杆菌，包括以下7个种百日咳鲍特菌(B.pertussis)副百日咳鲍特菌（B.parapertussis）支气管败血鲍特菌(B.branchiseptica)鸟鲍特菌(B.avium)欣氏鲍特菌(B.hinzii)霍氏鲍特菌(B.holmesii)创口鲍特菌(B.trematum)

其中百日咳鲍特菌是本属的代表模式菌株，是主要的致病菌，引起百日咳。副百日咳鲍特菌可引起急性呼吸道感染，支气管败血鲍特菌偶尔可感染人类，其他鲍特菌只感染动物19百日咳鲍特菌

临床意义是百日咳的致病菌一年四季均可发病，冬春季多发，小儿多于成人传播途径：飞沫经呼吸道传播传染源：早期患者和带菌者

潜伏期：1~2周致病物质：主要有百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素

(FHA)

腺苷酸环化酶毒素

(ACT)三种，此外还有气管细胞毒素、皮肤坏死毒素20临床表现：

病程分为三期1.卡他期：1~2周，明显卡他症状（咳嗽、流涕、打喷嚏、鼻塞等上呼吸道症状），传染性强，感染标本培养阳性率高2.痉挛期：1~4周，阵发性剧烈咳嗽，直至咳出粘稠的痰液或呕吐为止3.恢复期：1~2周，阵咳减轻，渐趋停止由于整个病程较长，未经治疗的病人病程可持续两三个月，故名百日咳细菌仅存在于呼吸道上皮细胞表面，不进入血流感染后可获得持久免疫力，再次感染少见21生物学特性革兰阴性短小杆菌无鞭毛、无芽胞、光滑型菌株有荚膜专性需氧，最适温度35℃营养要求高，初次分离培养需用含有甘油、马铃薯、血液的鲍-金（B-G）培养基：经35～37℃培养3～5天后，形成细小、光滑、凸起、灰白色有珠光色泽的菌落，菌落周围有狭窄的溶血环人工多次传代后，营养要求渐低，毒力消退液体培养基：均匀混浊，少量粘性沉淀22百日咳鲍特菌革兰染色CCBA琼脂平版（添加10%去纤维马血的木炭琼脂）：形成光滑、有光泽、水银样的菌落23百日咳鲍特菌在CCBA培养基的菌落生化反应：氧化酶（+）、触酶（+）、不发酵任何糖、枸（－）、IND（－）、尿素（－）、硝（－）两种抗原：耐热菌体抗原（O抗原，鲍特菌的共同抗原）和不耐热表面抗原（K抗原）变异：

ⅠⅡ－Ⅲ（过渡型）Ⅳ，即Ⅰ相菌变为无荚膜、无毒力的Ⅳ相菌，可逆

（新分离的百日咳鲍特菌有荚膜、毒力强，菌落光滑，称Ⅰ相菌）抵抗力：抵抗力不强，56℃30分钟或日光照射1h可杀死本菌，对干燥及多种消毒剂敏感，对青霉素不敏感，培养基中加入青霉素可抑制杂菌生长24微生物检验标本采集发病早期用咳碟法或鼻咽拭子采样2526

鼻咽分泌物、痰革兰染色镜检直接荧光抗体染色ELISA快速诊断核酸检测

分离培养35℃2-5天

含青霉素的

B-G培养基、

CCBA

可疑菌落革兰染色镜检生化反应直接荧光抗体染色毒力试验血清学试验检验程序百日咳鲍特菌检验程序检验方法1．分离培养：B-G培养基、CCBA2．毒力试验：纯培养液注射动物

3．血清学试验：（1）玻片凝集：用Ⅰ相抗血清（2）直接荧光抗体染色：外周绿色荧光，中心暗色的球杆菌（3）ELISA快速诊断法：测患者血清中的IgM类抗体

4．核酸检测：PCR，具有高度的敏感性和特异性2728动力氧化酶脲酶枸橼酸盐利用硝酸盐还原百日咳鲍特菌-+---副百日咳鲍特菌--++-支气管炎鲍特菌+++++鸟鲍特菌++---欣氏鲍特菌++-+-霍氏鲍特菌-----6种鲍特菌生化特征药物敏感试验及结果解释

1、本菌的感染以预防接种为主，进行控制（我国选用有荚膜的Ⅰ相百日咳鲍特菌死菌苗与白喉棒状杆菌及破伤风梭菌的类毒素混合，制成了“白百破”（DPT）三联疫苗进行人工主动免疫，效果较好）

2、临床治疗首选红霉素类，次选氨曲南及磺胺增效剂（SMZ-TMP）

3、对青霉素不敏感，大多数菌株对四环素耐药29第三节军团菌属军团菌属(Legionella)是一类需氧、革兰染色阴性杆菌。本属细菌包括39个种，61个血清型。对人致病的主要是嗜肺军团菌（Legionellapneumophila）。该菌最早发现于1976年7月，在美国费城召开退伍军人大会期间，突然爆发流行原因不明的肺炎，与会者149人，有34人死亡。1977年从当时死者肺内分离到，命名为军团菌。1978年美国CDC正式命名为嗜肺军团菌分布：极其广泛，遍布于天然水源(河水，湖水，川水)，泥土及人工水源(空调水塔，挥发式冷凝器，冷熱水供应系統，淋浴设备等)3031生物学性状形态与染色

革兰阴性杆菌，有时呈丝状，，有端生或侧生鞭毛，有微荚膜，无芽胞。常规染色方法菌体不易着色，用姬美耐染色，菌体呈红色，背景为绿色。用苏丹黑B作脂肪染色，可观察到细胞内有蓝黑色或蓝灰色颗粒32培养特性为需氧菌，多数菌株在2.5%～5%CO2环境中生长良好，最适生长温度为35℃营养要求特殊，营养琼脂和血琼脂不生长，需加L-半胱氨酸和铁离子的培养基才能生长在活性炭-酵母浸出液琼脂（BCYE）：3～5天形成1～2mm的灰白色、圆形凸起、湿润有光泽的菌落。在费-高（F-G）培养基：3～5天培养可见针尖大小菌落，紫外线照射下可发出黄色荧光3334Legionellapneumophila

BCYE平板（含

L-半胱胺酸和铁离子）BCYE平板（不含

L-半胱胺酸和铁离子）35BCYE：3～5天形成1～2mm的灰白色、圆形凸起、湿润有光泽的菌落。生化反应

氧化酶±或-，触酶+，水解明胶和淀粉，嗜肺军团菌能水解马尿酸盐，硝还-，尿素酶-，不发酵糖类抗原构造与分型

嗜肺军团菌有O抗原（有特异性）和H抗原（无特异性），根据O抗原分为15个血清型（Lp1～Lp15），我国分离的嗜肺军团菌主要为1型（Lp1）和6型(Lp6)抵抗力

抵抗力强，水中活数月，在人工管道的水源中常见，如医院空调冷却水、淋浴头、辅助呼吸机等所产生的气溶胶颗粒中均存在此菌，对常用化学消毒剂敏感，但对酸的抵抗力强，PH2.0HCL中活30min

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致病性37军团菌病的流行病学传染源：被污染的各种水源传播途径：含军团菌的气溶胶通过空气由人直接吸入肺泡发病易感人群：免疫力尤其是细胞免疫力低下者流行季节：夏、秋季发病率：WHO估计为12/10万，医源性肺炎占第二位，25%，CAP欧盟资料约10%死亡率：未经正确治疗时高达20%-50%！3839军团菌传播的主要途径

建筑屋顶的冷却塔飘逸出来的含有军团病菌的水汽经气流运动，从本建筑中央空调系统的新风入口，或是通过外窗等途径，进入建筑物内部，从而造成室内人员的感染建筑屋顶的冷却塔飘逸出来的含有军团病菌的水汽经气流运动，飘散至邻近建筑的中央空调系统的新风入口，或是通过其外窗等途径，进入邻近建筑物内部，从而造成其室内人员的感染建筑屋顶的冷却塔飘逸出来的含有军团病菌的水汽经气流运动，飘散至周围的环境之中，造成周边范围内人员的感染

4041易感人群很少發生於20歲以下的人，患病最多者年齡為40-70歲病征的嚴重性跟年齡成正比

男女比例-3:1吸煙者，患糖尿病者，患長期性肺疾者，患腎病者，及癌病者，有更大機會導至嚴重病情致病物质

本菌的主要致病物质包括微荚膜、菌毛、毒素和多种酶类。军团菌产生的吞噬细胞活化抑制因子有磷酸酶、核酸酶和细胞毒素等，能抑制吞噬体与溶酶体融合，故不仅不被杀死，反而可在细胞内生长繁殖导致细胞的死亡42

引起的军团病，有流感样型（轻症型）、肺炎型（重症型）和肺外感染三种临床类型有流感样型（轻症型）可出现发热、不适，头痛和肌肉疼痛，预后良好肺炎型（重症型）起病骤然，出现以肺部感染为主的多器官损害，寒战高热、咳嗽、胸痛，全身症状明显，最终导致呼吸衰竭,病死率10-20%肺外感染为继发性感染，当重症军团病发生菌血症而散布至全身多部位，如脑、肠、肾、肝、脾等，出现多脏器感染的症状。

军团菌亦是医院感染的病原菌之一，近年来，许多报道由于中央空调冷却塔用水污染军团菌而导致医院内感染军团菌为胞内寄生菌，细胞免疫在抗感染中起主要作用，有一定的免疫力43微生物学检查法

(一)标本

取痰、气管吸引物、胸水和肺活检组织、血液等(二)染色镜检涂片作革兰染色检查意义不大。涂片进行直接荧光抗体染色镜检则有一定诊断意义(三)分离培养鉴定将标本接种于含半胱氨酸和铁离子的BCYE培养基和费-高（F-G）培养基，置2.5-5％CO2环境，35℃培养3～5天，根据菌落特征及生化反应及免疫荧光染色法可以作出诊断(四)血清学诊断应用间接免疫荧光(IFA)和ELISA等方法,检查病人血清中抗军团菌的IgM和IgG抗体，有助于疾病的特异性诊断44军团菌病的治疗与预防特效药：红霉素、阿奇霉素等脂溶性高的抗生素预防措施：唯有加强水源管理，因为没有疫苗，空气传播也难以控制45第四节布鲁菌属（Brucella）46返回

布鲁菌属(Brucella)是一类革兰染色阴性短小杆菌，是人畜共患感染性疾病的病原菌，有6个生物种：

牛布鲁菌羊布鲁菌猪布鲁菌犬布鲁菌绵羊布鲁菌森林鼠布鲁菌使人致病的是前四个生物种，哺乳动物中牛、羊、猪等家畜最易感染，常引起母畜流产。人类与病畜接触或食用其染菌肉类、乳制品等可引起感染，称为布鲁菌病。我国流行的主要是羊布鲁菌、牛布鲁菌和猪布鲁菌，尤以羊布鲁菌最常见47临床意义

传染源：病兽，以羊、牛、猪多见传播途径：病兽的组织、尿、乳液、等通过人体的皮肤、呼吸道、消化道进入人体易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加工、屠宰的工人发病率较高潜伏期：5~21日，亦可高达数月48致病物质

内毒素、荚膜与侵袭酶

(透明质酸酶、过氧化氢酶)、Ⅳ型超敏反应

内毒素是主要的致病物质。荚膜与侵袭酶(透明质酸酶、过氧化氢酶)有利于细菌通过完整皮肤、粘膜进入宿主体内，并在机体脏器内大量繁殖和快速扩散入血。此外布鲁菌引起的Ⅳ型超敏反应也能参与致病49所致疾病

布鲁菌感染家畜引起流产，畜病还可表现为睾丸、附睾、乳腺、子宫炎等。布鲁菌感染人的临床表现：长期发热（波浪热），多汗，关节和肌肉疼痛，也可引起睾丸、附睾、乳腺、输卵管炎等

布鲁菌侵入机体后，即被吞噬细胞吞噬，因其荚膜能抵抗吞噬细胞的裂解而成为胞内寄生菌，并经淋巴管到达局部淋巴结，生长繁殖形成感染灶。当布鲁菌在淋巴结中繁殖到一定数量后，突破淋巴结屏障侵入血流，出现发热等菌血症症状，此后，布鲁菌随血流侵入肝、脾、淋巴结及骨髓等处，形成新的感染灶。血液中的布鲁菌逐渐消失，体温也逐渐正常。细菌在新感染灶内繁殖到一定数量时，再度入血，又出现菌血症而致体温升高。如此反复使患者呈现不规则的波浪状热型，临床上称为波浪热50波浪热Undulantfever51体温逐日上升，达到高热程度后，持续若干时日，再逐渐降至正常，经过数日后又重发作，如此互相交替微生物特性革兰阴性短小球杆菌，两端钝圆，偶见两极浓染，无鞭毛、无芽胞、光滑型菌株有微荚膜现常用改良Ziehl-Neelsen染色法及柯兹洛夫斯基染色法（红色、背景绿）

52羊布鲁菌革兰染色培养特性:需氧菌、营养要求较高牛布鲁菌需5%~10%的CO2培养基：硫胺、烟酸、酵母生长素等物质生长温度为35℃最适pH6.6-6.8生长缓慢固体：小、无色透明的S型菌落，人工传代培养Ｓ-Ｒ液体：混浊、有菌膜

53羊布鲁菌血平板菌落生化反应

氧化酶（+），过氧化氢酶（+）、氧化葡萄糖产少量酸，H2S（+）、硝（+）、尿（+）、IND（－）、M（－）、VP（－）、枸（－）抗原构造

含有两种抗原物质：M抗原和A抗原。三种布鲁菌所含的M抗原与A抗原量在比例上不同。用M血清与A血清进行凝集试验对三种布鲁菌有鉴别作用

M：A20：1羊布鲁菌

M：A

1：20牛布鲁菌

M：A1：2猪布鲁菌

54羊—20：1牛—1：20猪—1：2M：A微生物学检验1．标本：血液、骨髓、羊水、分泌物等2．程序及方法：（1）显微镜检查：1）直接镜检2）荧光抗体染色（2）分离培养：血液与体液标本应接种于双相培养基（液相为肝浸液，固相为肝浸液琼脂，并使固相的下部浸于液相中）鉴定可根据菌落、细菌形态、CO2需要、H2S产生、染料抑制、玻片凝集等确定型别（3）动物试验（4）血清学试验：①快速玻片凝集②试管凝集③补体结合试验④抗球蛋白试验⑤皮肤变态试验5556标本（血液、羊水、骨髓、分泌物等）血清学诊断凝集试验抗人球蛋白试验补体结合试验分离培养（5%~10%CO2）血琼脂、双相培养基马铃薯培养基动物实验（豚鼠腹腔或皮下注射）菌落、染色镜检纯培养生化反应凝集试验分离培养镜检凝集试验布鲁菌检验程序57

布鲁氏菌的生化特性菌种触酶氧化酶

糖分解精氨酸脱羧硝酸盐还原尿素酶H2S产生染料的耐受葡萄糖半乳糖阿拉伯糖硫廑

(40μg)复红

(20μg)羊布鲁菌+++---+V-++牛布鲁菌+++++-+++-+猪布鲁菌++++++++(-)+-森林鼠布鲁菌+-+++-+++--绵羊布鲁菌+--------+(-)犬布鲁菌+++--+++-+-注：V不定;(-)大部分菌株阴性第四节巴斯德菌属

58返回分类巴斯德菌属（Pasteurella）属巴斯德菌科多杀巴斯德菌（P.multocida）嗜肺巴斯德菌（P.pneumotropica）溶血巴斯德菌（P.haemolytica）产气巴斯德菌（P.aerogenes）鸡巴斯德菌（P.qallinarum）犬巴斯德菌（P.Canis）贝氏巴斯德菌（P.beffgae）达可马巴斯德菌（P.dagmatis）明立巴斯德菌（P.tomatts）59临床意义为人兽共患病原菌常引起肺部感染、支气管炎、菌血症、脑膜炎、脑脓肿、化脓性关节炎、骨髓炎、阑尾脓肿、腹膜炎、产褥热、肝脓