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文档简介

专题二细胞工程2.2动物细胞工程2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合1.概念：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也叫细胞杂交（1）杂交细胞的特点：①具有两个细胞或多个细胞的遗传信息②单核细胞（2）融合的原理：细胞膜的流动性（3）诱导融合的方法：①物理法：离心、振动、电刺激②化学法：聚乙二醇（PEG）③生物法：灭活病毒（与植物细胞融合相比特有的方法）a.灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏病原体的抗原结构b.诱导原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用→细胞互相凝聚→细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布→细胞膜打开→细胞发生融合（4）融合的过程：细胞膜融合→细胞质融合→细胞核融合（融合成功的实质和标志）2.意义及应用（1）意义：细胞融合技术突破了有幸杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能（2）应用：①是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段②制造单克隆抗体二、单克隆抗体1.传统制备抗体的方法：向动物体内反复注射某种抗原→动物产生抗体→从动物血清中分离所需抗体（缺点：产量低、纯度低、制备的抗体特异性差）2.单克隆抗体制备（1）过程①①再次筛选过程：细胞膜融合—细胞质融合—细胞核融合物理法：电激，震动，离心化学法：聚乙二醇（PEG）生物法：灭活的病毒未融合的亲本细胞和融合的杂交细胞特定抗原多种杂交瘤细胞能产生所需抗体的杂交瘤细胞原因：小鼠生活中还受到其它抗原刺激，体内有多种已免疫的的B淋巴细胞，因此形成了多种杂交瘤细胞。方法：专一性抗体检测（阳性）目的：获得所需的分泌专一性抗体的杂交瘤细胞提取：小鼠腹水优点：容易培养缺点：分离、提纯困难体内培养②克隆化培养（原理：细胞增殖→增殖方式：有丝分裂）体外培养提取：培养液中优点：易提取与分离缺点：培养困难单克隆抗体初次筛选方法：选择性培养基目的：使未融合及同种融合的细胞死亡，获得杂交瘤细胞骨髓瘤细胞群，制成细胞悬液小鼠从小鼠脾脏中分离出已免疫的B淋巴细胞制成细胞悬液混匀并诱导融合方法方法原理：细胞膜的流动性方法细胞培养提取骨髓瘤细胞注射（2）相关细胞的特点：①B淋巴细胞特点:一种B淋巴细胞分泌一种特异性抗体。②骨髓瘤细胞特点:能在体外大量增殖。③杂交瘤细胞特点:已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞,既能无限增殖，又能产生大量专一的抗体。3.单克隆抗体的优点:特异性强、灵敏度高、可大量制备4.单克隆抗体的应用:(1)作为诊断试剂：具有准确、高效、简易、快速的优点。(2)用于治疗疾病和运载药物①主要用于癌症治疗，也有少量用于其他疾病治疗（单克隆抗体就是药物本身）。②运载药物生物导弹组成：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素原理：借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞生物导弹组成：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素原理：借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到

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