SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方

SDS分离胶-浓缩胶配方

-1、-:聚丙烯酰***凝胶电泳2、:丙烯酰***;配胶时用30%质量比:=29:13、:甲叉双丙烯酰***4、:超轻水5、:十二烷基硫酸磺酸钠,阴离子去污剂配胶时用10%6、:过硫酸铵424配胶时用10%7、:四***乙二***,促凝剂8、-:3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液,配胶时分别胶=,浓缩胶=9、:二硫苏糖醇,也经常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻挡蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。

10、:碘乙酰***,碘代乙酰***用于有机合成,在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂,用于多肽测序以及酶抑制剂等,蛋白组学级试剂。

22,是和碘乙酸一样,可通过下列反应不行逆地抑制酶类的物质。

5酣2030祝4506%%-,^%过谦酸霰501015**%%^15-￡.^194,-5^■￡**%2$=￡--3751001^5^**%*甌1123344-6376.9%-%^依据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再根据下面的表格配制-的分别胶即下层胶:时爭尸。

山加血血-^1勺铀12^*4*咛吗叩叩1厅□『5::—、蛋白质相內分子重范圉:1^104话用的凝胶总浓度:2肥宀3谢二、蛋白质相对分子里范圉:冈『71胪适用的凝胶总浓度:1弭宀2宓三、蛋白质相对分子里范围;加适用的凝脸总浓度:1吩一巧聪四蛋白质相对分子重范圉:1和沪予材适用的凝脸总浓度;刖卄10%五、蛋白质相对分子重范圉:^10^适用的凝胶总浓度:2^3%-分别胶浓度最佳分别范围6%胶50-1508%胶30-9010%胶20-8012%胶12-6015%胶10-40成安排制不同体积-分别胶所需各成分的体积毫升6%%-29:,%%-分别胶所需各成分的体积毫升8%%-29:1,%%-分别胶所需各成分的体积毫升10%%-29:1,%%-分别胶所需各成分的体积毫升12%%-29:1,%%-分别胶所需各成分的体积毫升15%%-29:1,%%:假如配制非变性胶,参考上述配方,不加10%即可配制成非变性胶。

1根据如下表格配制-的浓缩胶也称积累胶、积层胶或上层胶:成安排制不同体积-浓缩胶所需各成分的体积毫升5%%-29:1,%%:1抗体去除液每50抗体去除液中含:%10-!*阴機瞬胶硝战纤堆索滤膜0峯扎性捲片3企:按■3滤纸阳极爭孔性華片-电泳的基本原理:-聚丙烯酰***凝胶电泳,是在聚丙烯酰***凝胶系统中引进十二烷基硫酸钠,会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此多肽复合物在丙稀酰***凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,。

当分子量在15到200之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:=-,式中:为分子量,为迁移率,、均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,依据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

聚丙烯酰***的作用:丙烯酰***与为蛋白质电泳供应载体,其凝固的好坏直接关系到电泳胜利与否,与促凝剂及环境亲密相关;制胶缓冲液:,,选择—系统,详细作用后面介绍;与:促凝作用,加速聚丙烯酰***的凝固;中含有29的丙烯酰***和1的甲叉基聚丙烯酰***,能产生自由氧基,使丙烯酰