细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察

医学细胞生物学试验李姣（吴明松）细胞生物学与遗传学教研室.11～.12TEL：8609692E-mail:270378076@qq.aom1号综合楼2-25室细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第1页预习；穿白大衣并扣好；认真操作；爱护仪器；保持卫生；保持平静。试验室规则1#############。2#########。3############。4###################。5#############。6#########7#########试验课要求细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第2页试验室安全注意事项试验完成后检验水电；试验动物回收焚烧：填表责任制；了解化学试剂毒性和安全使用规则；突发情况处理及逃生，如各种原因起火分别用关电闸、盖布、打开门窗、报警，及其它突发情况，依次离开试验室及大楼等。细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第3页本学期试验教学进度安排第一次(验证性)

细胞生物学研究技术和方法线粒体活体观察第二次(验证性)

细胞内酸性蛋白和碱性蛋白原位显示细胞内DNA和RNA原位显示第三次(验证性)

细胞膜通透性观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动观察第四次(验证性)

细胞内过氧化物酶原位显示细胞有丝分裂观察第五次(设计性)设计性试验汇报汇报及指导第六次(设计性)

动物细胞融合细胞核分离与判定评分标准细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第4页第一次试验Ⅰ

细胞生物学研究技术和方法Ⅱ

线粒体活体染色与观察细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第5页I细胞生物学研究技术和方法细胞形态结构研究技术显微观察亚显微观察细胞培养技术细胞组分分离纯化技术细胞和亚细胞组分测定分级分离技术层析法电泳法细胞化学法荧光细胞化学法放射自显影技术细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第6页显微结构microscopicstructure在光学显微镜下所观察到细胞结构亚微结构submicroscopicstructure细胞内小于0.2μm细微结构，通常使用各种电子显微镜进行观察细胞形态结构研究技术分辨力（率）resolution显微镜或人眼在25cm明视距离处能够区分相近两点最小距离能力。细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第7页普通光学显微镜lightmicroscope，LM染色后可观察线粒体、中心体、细胞核等结构最大分辨力普通为0.2μm相差显微镜phasecontrastmicroscope观察活细胞微细结构和改变细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第8页暗视野显微镜darkfieldmicroscope反差大、分辨力高（0.04μm)观察活细胞内细胞器以及液体介质中细菌和真菌等存在和运动细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第9页荧光显微镜fluorescencemicroscope光源——紫外线细胞荧光化学，尤其是免疫荧光技术中主要工具，可观察细胞或标本中荧光现象细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第10页分辨力达0.08nm观察细胞内部结构二维平面图像透射电子显微镜TEM扫描电子显微镜SEM分辨力普通在3nm观察细胞（样本）表面形貌三维立体图像细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第11页细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第12页细胞培养技术细胞培养cellculture细胞在体外培养技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖方法。细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第13页原代培养primaryculture直接从机体获取组织或细胞进行首次培养。原代细胞以一定百分比转移到另一个或几个容器中扩大培养。传代培养secondaryculture普通传一次称为一代细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第14页细胞融合cellfusion又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，两个或两个以上细胞合并形成一个细胞现象。含有同一亲本细胞核融合细胞含有不一样亲本细胞核融合细胞同核体homokaryon异核体heterokaryon细胞融合技术细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第15页自然融合人工诱导融合细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤等主要伎俩，尤其对单克隆抗体及细胞去分化研究开拓了一条新路径物理化学生物细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第16页细胞组分分离纯化技术细胞组分分级分离cellfractionation依据细胞内各种结构比重和大小等不一样，在同一离心场内沉降速度也不一样原理，用不一样介质或不一样转速离心，将细胞内各组分分级分离出来，并进行分析方法。细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第17页基本步骤组织匀浆分级分离分析密度梯度离心差速离心用细胞化学法或生物化学方法分析、判定得到细胞组分细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第18页差速离心细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第19页密度梯度离心细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第20页细胞和亚细胞组分测定细胞化学法cytochemicalmethod在保持细胞结构基础上，利用一些化学物质可与细胞内某种成份发生化学反应，在局部范围形成有色沉淀物（或电子密度高物质）原理，对细胞化学成份进行定性、定位和定量研究。细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第21页碱性蛋白显示酸性蛋白显示细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第22页I细胞生物学研究技术和方法细胞形态结构研究技术显微观察亚显微观察细胞培养技术细胞组分分离纯化技术细胞和亚细胞组分测定分级分离技术层析法电泳法细胞化学法荧光细胞化学法放射自显影技术细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第23页II线粒体活体染色与观察了解线粒体原位分布；了解活体染色原理和方法。一、试验目标细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色和观察第24页二、试验原理线粒体上细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯绿B染料一直处于氧化状态而呈绿色。活体染色：应用无毒或毒性较小染色剂显示活细胞内一些天然结构，是对细胞生命活动影响较小一个染色方法。细