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rakicidinb的药动学和安全性评价

rakicidins是海洋微生物发酵产生的15元环缩剂化合物。其结构中含有罕见的4-氨基-2和4-二苯基吡啶。本文旨在通过对Sprague-Dawley(SD)大鼠的静脉和口服给药的药动学参数、急性毒性初步评估及鼠伤寒沙门菌回复突变试验的研究,为其进一步的临床前研究提供依据。1材料和方法1.1材料表面1.1.1对男性动物的适应期观察SD大鼠(SPF级)购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司,年龄为6周龄,合格证编号为2008001669010,许可证号码为SCXK(沪)2013-0016。该动物在适应期进行一次详细临床观察、称重,均未见异常。体重在给药前一天随机分组时称量,雄性动物的体重范围为183.0~188.9g;雌性动物的体重范围为187.6~192.5g。1.1.2给药、口服给药RakicidinB本实验室自制,结构见图1,批号:201612,纯度:99.8%。静脉给药(IV):称取所需量供试品,溶于5%DMSO+30%PEG400+65%HP-β-CD(20%羟丙基-β-环糊精Sigma原装进口)中,配成0.04mg/mL的无色澄清溶液(pH7),用于静脉给药。口服给药(PO):称取所需量供试品,溶于0.5%CMC-Na(黏度300~800)中,涡旋振荡混匀,超声5min溶解,得到20mg/mL悬液,用于口服给药。鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变试验(Ames试验)供试品:称取一定量的供试品溶解于DMSO,配制成1.25mg/mL的储备液,然后根据实验设计分别制备浓度为0.625、0.313、0.156、0.078和0.039mg/mL的供试品溶液,涡旋至澄清溶液。1.2方法1.2.1血样、血样的采集挑选6只SD雄性大鼠,按照实验设计表分为2组,分别通过静脉和口服给药,给药当天给药1次,给药剂量分别为0.2和5.0mg/kg。试验前禁食12h,自由饮水。对所有动物每天进行2次笼边观察,以确定其是否有发病、损害或死亡等状况出现,以及供食和供水是否充足。试验过程中所有给药动物在给药前,给药后及采血前进行详细临床观察。静脉给药组在给药前和给药后0.083、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和24.0h从颈静脉穿刺采集血样;口服给药组在给药前和给药后0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0和24.0h从颈静脉穿刺采集血样用于血药浓度检测。样品经颈静脉采血约0.25mL,加入肝素钠抗凝,血液样本采集后置于冰上,离心分离血浆(8000r/min,6min,4℃)。收集的血浆分析前存放于-80℃。生物样品分析方法及所有样品的分析由美迪西普亚(上海)生物医药有限公司分析实验室完成,分析样品的同时进行质控样品的日内准确度评价,并要求超过66.7%的质控样品的准确度在85%~115%之间。1.2.2单次给药对rakicidinb急性毒性的影响(1)SD大鼠单次静脉给予rakicidinB急性毒性试验:观察SD大鼠单次经静脉给予rakicidinB毒性反应,为后续毒性试验以及临床试验设计提供参考。挑选40只SD大鼠,雌雄各半,按性别和体重大小通过简单随机化分组方式分为4组每组10只,雌雄各半。第1组为溶媒对照组(剂量为0),第2~4组为rakicidinB给药组,剂量分别为0.2、0.5和1mg/kg。给药方式为静脉注射,给药体积为5mL/kg。试验期间每天进行两次笼边观察,连续观察14d。体重在分组当日(Day-1)、试验第1、4、7、10和14天以及动物安乐死前分别称重记录。试验第2(Day2~3)、7(Day7~8)、13(Day13~14)天测定动物(24±1)h耗食量并记录。所有存活的试验动物在试验结束时(第15天)用二氧化碳吸入麻醉的方法进行安乐死,并进行大体解剖检查,观察并摘取所有脏器并记录。(2)SD大鼠口服灌胃rakicidinB急性毒性试验:观察SD大鼠24h内多次灌胃给予rakicidinB对受试动物可能产生的毒性反应及其严重程度,对该药物的啮齿类动物急性毒性进行初步评估为后续毒性试验以及临床试验设计提供参考。每组10只SD大鼠,雌雄各半,rakicidinB给药,剂量为200、600和1000mg/kg,每组每性别5只动物。给药方式为经口灌胃,给药体积为20mL/kg。试验期间每天进行两次笼边观察,连续观察14d。体重在分组当日(Day-1)、试验第1、4、7、10、14天以及动物安乐死前分别称重记录。试验第2(Day2~3)、7(Day7~8)、13(Day13~14)天测定实验动物(24±1)h耗食量。所有存活的试验动物在试验结束时(第15天)用二氧化碳吸入麻醉的方法进行安乐死,并进行大体解剖检查,观察并摘取所有脏器并记录。(3)RakicidinB鼠伤寒沙门菌回复突变试验:试验选择TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535作为试验菌株,供试品rakicidinB剂量分别设为125、62.5、31.3、15.6、7.8和3.9μg/皿。另外设溶剂对照组(DMSO)和阳性对照组。每个剂量组设3个平皿作为平行对照。每菌株均设加代谢活化系统(+S9)和不加代谢活化系统(-S9)两组。加药1次,加药培养48~72h后记录各组菌株的回变数,并进行一次重复试验,以确定rakicidinB的致突变性。以上所有试验均委托美迪西普亚(上海)生物医药有限公司进行。2结果与讨论2.1药代动力学研究2.1.1临床观察静脉组动物给药前及给药后均未观察到异常状况,口服给药组202和203动物给药后6h症状出现软便现象,所有试验动物均存活至实验结束。2.1.2血浆药物浓度测定SD大鼠单次经静脉注射0.2mg/kg的rakicidinB溶液和单次口服给予5mg/kg的rakicidinB溶液后的血浆药物浓度测定结果见表1~2;静脉注射给药后的药-时曲线见图2。2.1.3药房动态学参数SD大鼠静脉给予rakicidinB后的部分药动学参数见表3。结果显示,SD大鼠静脉0.2mg/kg的rakicidinB,C2.2中毒的研究2.2.1剖检和脏器变化死亡情况:全部试验动物存活至试验结束。详细临床观察:各剂量组动物临床观察均未见异常变化。体重:溶媒对照组和各供试品组动物体重在试验过程中逐渐增加。解剖后评价:肉眼观察方面,溶媒对照组和各给药组动物的剖检均未见明显异常;未见与供试品相关的明显异常变化。脏器重量及系数:各组动物均未见与供试品相关的明显异常变化。以上结果说明在本试验条件下,SD大鼠单次静脉给予rakicidinB,0、0.2、0.5及1.0mg/kg剂量水平,无毒性反应,最大耐受量(MTD)>1.0mg/kg。2.2.2动物特征检查死亡情况:全部试验动物存活至试验结束。详细临床观察:仅1000mg/kg剂量组部分动物在给药当天出现软便现象,其他组动物在其他时间观察无异常。体重:3个剂量组动物体重在试验过程中均逐渐增加。解剖后评价:肉眼观察方面,溶媒对照组和各给药组动物的剖检均未见明显异常;未见与供试品相关的明显异常变化。脏器重量及系数:各组动物均未见与供试品相关的明显异常变化。以上结果说明,在本试验条件下,SD大鼠24h内多次经口给予200、600和1000mg/kg剂量水平rakicidinB,无明显毒性反应,口服最大耐受量(MTD)>1000mg/kg。2.2.3细菌回复突变试验试验结果显示,在无代谢活化系统条件下(-S9),供试品剂量组1~4组(125、62.5、31.3和15.6μg/皿)对TA100有重度至轻度的细菌毒性,其他组未见明显细菌毒性。组1(125μg/皿)对TA1535有轻度细菌毒性,在不同试验体系中产生非干扰性沉淀,其他组均未观察到明显干扰性沉淀,未观察到与剂量相关的回变菌落数增长。阳性对照组回变菌落数均出现不同程度的增长,证明本次试验数据是可靠的。溶剂对照组回变菌落数也在本机构的历史背景值范围内。根据本研究结果判断,在试验条件下,供试品rakicidinB在加代谢活化系统(+S9)和不

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