阿霉素大鼠肾病模型的建立及动态变化观察

阿霉素大鼠肾病模型的建立及动态变化观察

小型病变性肾脏疾病和局灶性节段性肾衰竭是儿童和成人肾衰竭的重要病理表现。1材料和方法1.1[scxk-鲁]SPF级Wistar雄性大鼠26只,8周龄,(185±20)g,由山东鲁抗医药有限公司提供[SCXK(鲁)20080002];饲养于饲养箱,每箱5只,自然光照,通风良好,温度(24±2)℃,相对湿度45%~55%,自由进食与饮水。1.2产品、试剂及仪器阿霉素(注射用盐酸多柔比星):浙江海正药业股份有限公司,产品批号:110402。尿蛋白试剂:北京利德曼生化技术有限公司。全自动生化分析仪:TRACE-CB171,上海合意实业有限公司。1.3模型大鼠非麻醉状态下大鼠尾静脉阿霉素检测大鼠适应性喂养2周检测12h蛋白尿定量后,以尿蛋白定量为分组因素随机分为模型组和空白组。模型组大鼠非麻醉状态下,固定大鼠1%碘伏消毒鼠尾后,尾静脉注射阿霉素6.2mg/kg,空白组注射等容量生理盐水。模型组尿蛋白升高与空白组有统计学意义视为建模成功。1.4观察和研究指标1.4.1一般情况下观察大鼠的活跃程度、饮食、饮水、体重、二便等状况。1.4.2尿蛋白造模后每3d检测12h尿蛋白、尿量,造模成功后每周检测12h尿蛋白定量、尿量。1.4.3血液生化水合氯醛腹腔注射麻醉后打开胸腔心脏取血检测血清白蛋白、总蛋白、血肌酐、尿素氮、胆固醇、甘油三脂。1.4.4脏器病理组织学检测注射阿霉素第5周处死6只大鼠,第10周处死剩余大鼠。大鼠肾脏4%多聚甲醛常温固定24h,乙醇梯度脱水,浸蜡,包埋,制成4μm厚石蜡切片,HE染色,光镜下观察肾脏病理改变。肾脏戊二醛-磷戊酸固定液中固定3h,二甲胂酸盐缓冲液冲洗2遍,2.5%戊二醛前固定,1%锇酸后固定,包埋后制成超薄切片,电镜下观察。1.5统计分析SPSS17.0软件处理实验数据,结果用2结果2.1采集不同体重和水体及瞳体的影响大鼠注射阿霉素次日出现:活跃度明显下降,饮食量减少,水样便,尿量减少,阴囊及四肢水肿(见图1,封二),随后出现体重下降。大鼠注射阿霉素3d后饮食量逐渐恢复,1周后腹泻缓解,尿量逐渐增多。2.2尿蛋白测定大鼠注射阿霉素后3d尿蛋白增多,1周与空白组有统计学差异(P<0.01),以后逐渐增多,第5周达高峰,后缓慢减少(见表1)。2.3组患儿甘油三脂、胆固醇、尿素氮、尿素氮、尿素氮检测模型组血浆总蛋白和白蛋白较空白组降低(P<0.05和P<0.01),甘油三脂、胆固醇、尿素氮较空白组升高(3组P<0.05),血肌酐(P=0.64)未见统计学差异(见表2)。2.4组织变化2.4.1小鼠肝肾组织病理学检查第5周模型组可见肾小球上皮细胞肿大,肾小球球囊无粘连,系膜细胞轻度增生,肾小管内可见蛋白管型,肾小管间质有炎症细胞浸润(见图2,封二);第10周可见部分肾小球球囊粘连、纤维化,系膜基质增生,小管内可见蛋白管型和炎症管型,小管间质增生伴有炎症细胞浸润,部分大鼠肾小球硬化萎缩,基底膜断裂,肾小管萎缩(见图3,封二)。空白组未见明显异常。2.4.2足突融合,细胞融合电镜下第5周模型组可见部分肾小球脏层上皮细胞足突广泛融合,肾小球脏层上皮细胞变平、融合,基底膜裸露,内皮细胞胞质内有脂质空泡,系膜基质增多(见图4)。3阿霉素临床试验模型阿霉素是柔红霉素的羟基衍生物,为一种抗肿瘤抗生素。利用阿霉素建立的大鼠肾病模型可以很好地模拟人肾病综合征,表现出大量蛋白尿、水肿、低白蛋白血症、高脂血症等症状阿霉素随血液循环到达动物肾脏后可对其造成直接损伤阿霉素肾病模型的建立方法有很多总之,单次尾静脉注射6.2mg/kg阿霉素可以成功建立大鼠肾病模型。本方法具有成本低、容