附子水提物对小鼠心脏量-毒和时-毒关系的影响

附子水提物对小鼠心脏量-毒和时-毒关系的影响

附子是毛科植物的乌拉科零件。附子始载于《神农本草经》,其味辛、甘,性大热,有毒。归心、脾、肾经,具有回阳救逆,补火助阳,散寒除湿,止痛的功效1材料表面1.1科植物东南角a.c.caeli子根的鉴定附子购自北京同仁堂饮片有限责任公司(批号201232732-S),经鉴定为为毛茛科植物乌头A.carmichaeli的子根的加工品,按《中国药典》2010年版附子项下检查,符合各项规定。附子水提物(批号20130419)含生药量1.0g·mL1.2al104电子天平cdmBL-420S生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司);YP20001电子天平(上海上天精密仪器有限公司);AL104电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司];KDM型调温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司);DZKM-S-6电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂);UV-2600紫外-可见分光光度计[尤尼柯(上海)仪器有限公司];MultiskanGo-1510全波长酶标仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]。1.3大、国之间的健康关系SPF级KM小鼠,雌雄各半,体重18.0~22.0g,适龄、健康。购自山东大学实验动物中心,动物许可证号SYXK(鲁)20130001。2方法2.1给水提取物的剂量设计根据前期研究,按含生药量计算,附子水提物对正常小鼠的近似最小致死量(MLD)为14.4g·kg2.2单次给药心脏“量-毒”关系2.2.1单次给药心脏“时-毒”关系研究小鼠雌雄各半,随机分为7组,每组10只,按处理时间点依次为0,5,10,30,60,90,120min组。按25.0mL·kg2.2.2单次给药心脏“量-毒”关系研究小鼠雌雄各半,随机分为6组,每组10只,即空白对照组和附子水提物5个剂量组。按25.0mL·kg2.3统计学处理采用SPSS11.5统计软件,数据用ue0af±s表示,计量资料先进行正态检验,正态分布资料采用单因素方差分析,非正态分布资料先转换成正态分布再用单因素方差分析。进行组间比较,P<0.05为数据统计有显著性差异。3结果3.1对血清生化指标的影响3.1.1对心电图的影响单次给药附子后,小鼠心电图P波的时间和幅度、P-R间期、Q波和S波幅度的变化与0min组无统计学意义;小鼠心率从药后5min开始升高,60min达到峰值后显著降低(P<0.05);QRS间期、R波幅度、T波时间和幅度、QT间期从药后5min开始降低,60min达到最低值(P<0.05),见表1。3.1.2对血清生化指标的影响单次给药附子后,小鼠血清中CK,LDH,BNP和CTn-I等指标的含量从药后5min开始,随着时间的变化均升高。其中,CK含量在90min达到峰值,与0min组比较呈显著性差异(P<0.05);LDH在120min时的含量,与0min组比较呈显著性差异(P<0.05);BNP和CTn-I的含量均在60min达到最大值(分别为P<0.05和P<0.01),随后降低。提示,与常规指标CK,LDH相比,BNP和CTn-I的变化,能更早的表现药物对心脏的影响,见表2。3.1.3对脏器指数的影响与0min组比较,单次给予附子水提物后不同时间点的小鼠心体比值、肝体比值和肾体比值均无显著性变化,见表3。3.2单次给药剂量对血清生化指标的影响3.2.1对心电图的影响单次给药剂量从1.25g·kg3.2.2对血清生化指标的影响单次给药剂量从1.25g·kg3.2.3对脏器指数的影响与对照组比较,单次给予不同剂量附子水提物后,小鼠的心体比值、肝体比值和肾体比值均无显著性变化,见表6。3.3不同数字附射剂对小鼠的“剂量-时间-毒性”作用结果本文以血中各组CK,LDH,BNP和CTn-I与对照组(或0min组)的差异显著性进行积分:显著性差异,P<0.05,1分;非常显著性差异,P<0.01,2分;极显著性差异,P<0.001,3分。积分越大,与对照组的差异越大,药物的心脏毒性越大。对上述附子水提物对小鼠心脏的“剂量-时间-毒性”作用结果进行分析,见图1。给予附子后0~60min,附子水提物的毒性积分增大,60~120min,积分减小,其中峰效应点为60min;在一定范围内,随着附子水提物浓度的增大,积分增大。灌胃大剂量及临床范围剂量的附子水提物后不同时间点对小鼠心脏有一定的损伤,并呈现一定的“量-时-毒”关系,其毒性峰效应时间点出现在药后60min。因此,在临床运用过程中,应严格控制附子用量,及时监测患者体内灵敏指标变化情况,避免不良反应的发生。4附子水提物附子作为临床常用有毒中药,临床上连续有因心脏中毒致死的病例报道,现代毒理研究发现,附子的毒性成分是双酯型生物碱,引起中毒的靶器官主要是心脏,脏器系数是毒理学研究中评价受试物毒性作用的重要指标,对确认药物毒性作用的靶器官具有重要参考价值肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)广泛存在于心肌组织细胞中,当心肌细胞受损时,心肌酶释放入血,使血液中CK,LDH的活性增高,造成心肌细胞代谢紊乱。因此,临床常监测血中CK,LDH活性变化,以评估心肌细胞损伤程度。B-型脑钠肽(BNP)是一种心脏神经激素,主要存在于心室肌内,因此正常人循环血液中仅有低水平的BNP。心功能障碍时极大激活机体利钠肽系统,心室负荷增加导致BNP释放。其血中水平可作为心功能损伤的早期预测指标,并能很好的反映左心室参数及心肌梗死范围心电图(ECG)反映心脏每个心动周期中生物电变化,尤其心率、QRS波群、T波及ST段的变化对心功能的影响更灵敏,是临床中能够即时反映患者心脏功能、诊断心脏疾病的重要指标。本实验研究结果发现,小鼠ECG中QRS间期、R波幅度、T波时间和幅度、QT间期等的变化,可能预示着药后60min时出现了较明显的房室传导阻滞,且随着时间的变化,小鼠单次灌服7.20g·kg本实验仅以单次给予大剂量和临床规定用量研究附子水提物0~120min对小鼠心脏毒性的影响。时间短、给药次数少,因此不同时间和剂量的附子水提物仅引起了小鼠心电图和血清生化指标的变化,而未引起脏器的实质性病变,对心、肝、肾等脏器指数也就无显著性影响。综上所述,附子水提物可造成小鼠心脏不同程度的损伤,并呈现一定的“量-时-毒”关系,且随着剂量的增大毒性增大,其毒性峰效应时间初步判断出现在药后60min左右。本实验仅对附子水提物单次给药对正常小鼠心脏的毒性进行了初步研究,为临床用药剂量与药后定时心功能检测提供