微生物验证专业知识讲座

菌种、培养基、试验室环境管理无菌检验及方法验证微生物程度检验及方法验证年版药典增修订情况

1微生物验证专业知识讲座第1页菌（毒种）管理方法

1.菌种保管应有专员负责，保留于冰箱中，房门专员加锁，确保菌种安全（烈性菌种双人双锁）。保管人员变动时，必须严格交接手续。2.试验用菌种均从CMCC购置。菌种申购，由保管人依据菌种保留情况，提出申购，经上级责任人签字同意。申购单应注明菌种名称、菌号、数量及请购人。从指定单位购到菌种后，应逐一查对菌种名称、菌号、数量，无误后方可接种，应做好统计。3.菌种应有严格登记，包含形态，分离日期，判定日期，签发者，主要判定性能，并注明使用、转移、销毁情况及原因。4.菌种转种等均应在超净工作台进行，以防污染。

5.各种菌种应按要求时间接种，普通在接种三次后作一次全方面判定，注意菌种有没有污染及变异，如发觉变异时，应及时更换。2微生物验证专业知识讲座第2页全部存在菌种应具备清单。

保留菌、毒种传代或冻干均应填写专用统计，菌种管上应有牢靠标签，标明菌种编号、代次、批号、日期培养、在药品微生物检验时，可进行简单染色镜检，以确保在试验中所用菌种正确。致病菌与普通菌种要分开管理。保留菌种传代、移种后，销毁原菌种之前，应仔细检验新旧菌种标签是否正确。3微生物验证专业知识讲座第3页菌种分类三类：仅具普通性危险，能引发试验室感染机会较少，普通微生物学试验室采取普通试验技术能控制感染或有对其有效免疫预防方法菌种。四类：生物制品、菌苗、疫苗生产用各种减毒、弱毒菌种及不属于上述一、二、三类各种低致病性微生物菌种。4微生物验证专业知识讲座第4页微生物与生物安全试验室适用级别二级生物安全试验室（BSL-2）：登革热病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、流感病毒等。脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌、军团菌、白喉棒杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠埃希氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、非经典结核分枝杆菌等。钩端螺旋体、致病性支原体、鹦鹉热衣原体、放线菌、青霉菌等。

5微生物验证专业知识讲座第5页验证试验惯用菌种枯草芽孢杆菌

[CMCC（B）63501]金黄色葡萄球菌

[CMCC（B）26003]生孢梭菌

[CMCC（B）64941]铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]大肠埃希菌[CMCC（B）44102]乙型副伤寒沙门菌[CMCC（B）50094]白色念珠菌[CMCC（F）98001]黑曲霉[CMCC（F）9003]6微生物验证专业知识讲座第6页细菌室消毒隔离办法1.天天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯（最少半小时）进行空气消毒。2.非必要品禁止带入试验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。3.使用后载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。4.试验后血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，全部用于试验反应板、吸头等用消毒液浸泡（最少24小时以上）后清洗或丢弃。5.全部微生物培养物（细菌、支原体、真菌等培养物），不论标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。7微生物验证专业知识讲座第7页染菌物出试验时及试验后将染菌/带菌物品放于盛有0.1％苯扎溴铵溶液灭菌专用桶中浸泡。灭菌专用桶加盖，送集中洗涤室热压灭菌。将灭菌桶在121℃30min条件下进行高压湿热灭菌，灭菌后再取出清洗。高压蒸汽灭菌效果验证8微生物验证专业知识讲座第8页菌种保藏步骤①干燥菌种复苏，划平板②挑选特征经典纯菌菌落；（制菌悬液使用）③确定保藏适当菌体形态；④选择最适宜保藏方法，定时对保藏菌种进行检验，观察是否发生改变，若有改变，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。9微生物验证专业知识讲座第9页琼脂斜面低温保留法（厂家惯用）方法：将经典菌落接种在斜面（特殊菌种可用液体培养基）上，按要求培养，待充分生长后，把培养好新鲜菌种用牛皮纸保好，可将菌种保藏管棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右冰箱中保藏。每隔2~3个月移种一次。若用半固体高层培养基穿刺培养，普通可保藏六个月~一年。适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。优点:简便，对大多数微生物都适用。缺点:保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。10微生物验证专业知识讲座第10页冷冻真空干燥保藏法主要是将待保藏菌种混于有保护作用介质内制成菌液，分装在安瓿中于冷冻条件下使其快速冻结，因冻结可使晶形细致，不致损伤活菌细胞。然后用真空抽气减压，是安瓿内冰晶液体升华，水气快速被真空抽走，冰晶型菌液很快变成疏松干燥固体物，最终在真空状态下熔封管口，使干燥物在局部真空条件下封存，并置冷暗处，在很长时间内菌种仍可维持活力不变。11微生物验证专业知识讲座第11页试验用菌种培养传代方法

（一）菌种复苏（二）菌种传代与保留（三）对照用菌液制备检定用标准菌种，由中国药品生物检定所提供，为冷冻干燥菌种。菌种复苏在专用无菌室或超净工作台内进行。传代与保留:方法1：菌斜面,方法2：冻存管12微生物验证专业知识讲座第12页传代：取菌液0.1ml接种至10ml液体培养基，按要求培养、稀释传代限制（5代）对照用菌种在使用过程中，亦应检验其生物学特征。如菌落形态、革兰染色、镜检菌体形态、主要生化特征。如发觉染菌或变异，衰退等现象时，应及时处理。菌种分离13微生物验证专业知识讲座第13页培养基管理

普通采取购自中国药品生物制品检定所合格商品脱水培养基。同时按照使用说明书进行配制，需注意培养基pH值应符合要求，不然必须校正后，按说明书要求灭菌使用。商品脱水培养基应在效期内使用，使用前应注意查对名称，检验外观，遇有接块、吸潮现象，应废弃。新鲜培养基配制，应按质量标准要求配方进行。对培养基原材料要进行挑选，试剂应为化学纯试剂规格。制成培养基要求无沉淀，必要时以适当方法过滤，调整pH值，分装灭菌备用。

14微生物验证专业知识讲座第14页培养基性能质量控制

无菌检验用需气厌气培养基指示剂氧化层不得超出培养基深度1/5，不然需经水浴煮沸10分钟，但只限加热一次。无菌检验结束时，指示剂氧化层应不超出培养基深度1/2。大肠埃希菌检验用MUG培养基配制前应挑选无荧光试管进行配制，观察结果时应用同批培养基配制空白管和阳性菌管同时观察。对无菌培养基无菌性、灵敏度检验15微生物验证专业知识讲座第15页培养基灵敏度检验:

（已知菌生长试验）①细菌组：取每管装量为12ml硫乙醇酸盐液体培养基9支，分别接种小于100cfu金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌试验菌各2支;空白对照：另一支不接种，温度培养24~72小时逐日观察结果②霉菌组：取每管装量为9ml改良马丁液体培养基5支，分别接种小于100cfu白色念珠菌、黑曲霉各2支；空白对照：另一支不接种，培养5天。逐日观察结果。结果判定空白管培养基无菌生长，加菌培养基管均生长良好，判灵敏度检验合格。16微生物验证专业知识讲座第16页培养基管理配制好培养基，按无菌要求进行灭菌。培养基配制须有统计，统计内容含有：a）配制日期和配制人员标识；b）培养基/溶液类型、体积；c）成份、每个成份物质含量、制造商、批号；d）pH（最初和最终）值；e）无菌办法，包含实施方式、时间和温度。按日期编制灭菌后培养基批号。将制备完成培养基按品种放置在阴凉指定位置，备用。注意保留期。17微生物验证专业知识讲座第17页a.湿热高压蒸汽灭菌法：依115℃121℃或132℃，应用于培养基灭菌、试验器械、工作服、橡胶物品灭菌和试验室废弃物，也可用于玻璃器皿灭菌。普通121℃30min

因为湿热中菌体吸水，蛋白质轻易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。b.干热法：利用物理学，171℃-1小時、160℃-2小時、121-3小時:玻璃器皿18微生物验证专业知识讲座第18页洁净工作室1无菌检验试验室分无菌操作间和缓冲间

2进入无菌操作间应有些人净和物净设施3无菌操作间内禁放杂物，每次试验后清洁消毒,并定时清洁、灭菌,每七天彻底消毒一次,臭氧,消毒液0.1%新洁尔灭/75%酒精/其它交替使用4无菌操作间定时进行环境监测，可订为2周~3月，平时试验中实时做5无菌间使用拖鞋要定时消毒处理6无菌间内紫外线灯要定时进行更换7试验前开启净化系统1小时,紫外灯1小时以上19微生物验证专业知识讲座第19页无菌检验：注射剂、植入剂、部分外用药

鼻用制剂：用于手术或创伤鼻用制剂。凝胶剂：用于严重创伤凝胶剂。乳膏剂：用于烧伤或严重创伤乳膏剂。新增无菌检验中药制剂散剂：用于烧伤或严重创伤外用散剂。鼻用制剂：用于严重创伤鼻用制剂。眼用制剂：用于伤口眼用制剂。软膏剂：用于烧伤或严重创伤乳膏剂。气雾剂、喷雾剂：用于烧伤或严重创伤气雾剂、喷雾剂。20微生物验证专业知识讲座第20页无菌检验基本定义：检验要求无菌药品.医疗器具.原料.辅料.以及要求无菌其它物品是否染有活菌一个方法。符合无菌检验法要求仅表明了供试品在该检验条件下未发觉细菌和真菌污染。说明无菌检验法建立在批产品受微生物污染是均匀假设上。即使该批产品污染非常均匀，检出低污染概率也是极低。所以，无菌检验存在风险和不足。应尽可能抽取批产品生产开始和结束或生产过程出现异常情况下产品进行检验。21微生物验证专业知识讲座第21页药品生产中污染起源人员在100级洁净区或万级背景下局部100级洁净区。人是无菌药品生产中主要污染源，在管理比较到位，生产设备自动化程度很好，操作人员素质较高企业，人员操作所致污染率超出70%。水源性微生物绝大多数为革兰氏阴性菌，不会形成芽孢，不耐热。其代谢产物及细胞尸体及碎片均属细胞内毒素污染源空气中微生物基本为革兰氏阳性菌，有可能会形成芽孢使其耐热性增大22微生物验证专业知识讲座第22页无菌检验不足无菌定义理论上：无菌＝没有任何活微生物实际上：我们无法证实产品中没有活微生物存在无法对整批产品进行100%检验无菌检验结果只是一个基于“可能性”判断无菌检验用培养基有其不足只进行细菌和真菌检验对试验结果判定是基于“是否在培养基中生长”培养条件（如温度和时间）是有限我们工作环境及操作是在相对无菌状态23微生物验证专业知识讲座第23页美国非肠道药品学会注射剂无菌测试结果试验目标：不合格可能性(%)试验批量：60,000支试验方法：按美国药典无菌测试方法真实不合格率测试20支样品不合格可能性测试40支样品不合格可能性合格结果可能性1％18.2%33.1%?5％64.2%87.2%?15％96.1%99.8%?30％99.9%100.0%?24微生物验证专业知识讲座第24页上述无菌测试结果启示含有少许微生物污染产品批次也有可能“经过”无菌检验一批产品染菌率越低，依据无菌检验结果来判定整批产品无菌，其风险就越大25微生物验证专业知识讲座第25页怎样用无菌检验来证实整批产品无菌要求有一个取样计划来涵盖整个批号有足够取样量和检验量选择适用培养基采取经验证无菌检验方法良好环境监控质量问题为何经常未检出来？26微生物验证专业知识讲座第26页批产品出厂最少检验数量供试品批产量N（个）每种培养基最少检验数量注射剂

≤10010%或4个（取较多者）

100＜N≤50010个

＞5002%或20个（取较少者）大致积注射剂（＞100ml）

2%或10个（取较少者）眼用及其它非注射产品

≤2005%或2个（取较多者）

＞20010个桶装固体原料

≤4每个容器

4＜N≤5020%或4个容器（取较大者）

＞502%或10个容器（取较大者）27微生物验证专业知识讲座第27页上市抽验样品（液体制剂）最少检验量供试品装量V(ml)每支样品接入每管培养基最少许（ml）最少检验数量（瓶或支）≤1全量2011＜V＜5半量105≤V＜2021020≤V＜5051050≤V＜100101050≤V＜100(静脉给药)半量10100≤V≤500半量6V＞500500628微生物验证专业知识讲座第28页上市抽验样品（固体制剂）最少检验量供试品装量M（mg/支或瓶）每支样品接入每管培养基最小量（mg）最少检验数量（瓶或支）M<50全量20（1）50≤M<300半量10300≤M<5g15010M≥5g50010外科用敷料棉花及纱布取100mg或1cm×3cm10缝合线、一次性医用材料整个材料310带导管一次性医疗器具（如输液袋）

10其它医疗器具整个器具3（切碎或拆散开）2029微生物验证专业知识讲座第29页供试品抽验量和检验量

检验数量(对于检验)指一次试验所用供试品最小包装容器数量。

检验量(对于检验与验证)指一次试验所用供试品总量（g或ml）。每份培养基接种供试品量。比如:1g规格注射用粉针剂10支150mg*10表中最少检验量不包含阳性对照试验用量。30微生物验证专业知识讲座第30页供试品处理

目标使供试品分散均匀水溶性供试品固体制剂β-内酰胺类抗生素供试品非水溶性供试品膏剂和黏性油剂供试品无菌气（喷）雾剂供试品装有药品注射器接种含培养基容器按要求温度培养14天，培养期间应逐日观察并统计是否有菌生长。31微生物验证专业知识讲座第31页无菌检测14天赔偿次佳生长条件考虑到潜在低生长者修复受损细胞全球一体化32微生物验证专业知识讲座第32页阳性对照菌液制备加菌量为10~100cfu阳性对照管培养48~72小时应生长良好。33微生物验证专业知识讲座第33页结果判断若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合要求；如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有没有微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2日、真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有没有菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合要求，除非能充分证实试验结果无效即生长微生物非供试品所含。34微生物验证专业知识讲座第34页当符合以下最少一个条件时，方可判试验结果无效：⑴无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果不符合无菌检验法要求。⑵回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污染原因。⑶阴性对照管有菌生长。⑷供试品管中生长微生物经判定后，确证是因无菌试验中所使用物品和（或）无菌操作技术不妥引发。重试35微生物验证专业知识讲座第35页方法学研究：

验证试验必要性方法验证：是为检测方法可靠性提供主要科学依据。微生物检测几个方面：1、无菌环境验证（尘埃离子、浮游菌、沉降菌检测）；2、全部灭菌器具验证；3、培养基灵敏度检测；4、阳性代表菌株选择等；5、方法选择等。版药典与USP、EP、BP国家接轨，将药品微生物检验方法验证试验进行了，系统化要求和要求。并强调了验证供试品本身对微生物生长影响。36微生物验证专业知识讲座第36页环境确保培养基确保无菌性检验灵敏度检验有效方法方法验证SOP操作有效结果可靠结论结果判断37微生物验证专业知识讲座第37页验证目标试验操作标准化验证试验系统化制订标准严谨化最终目标：一次检验即可得到准确结果。38微生物验证专业知识讲座第38页方法验证普通程序与步骤

需前处理不需前处理有抑菌作用无抑菌作用样品检验去除抑菌作用①验证前处理方法对污染菌生长、检出影响。③验证抑菌活性去除有效性，以及去除方法对污染菌生长、检出影响。②能够经过验证试验判断

39微生物验证专业知识讲座第39页验证什么？前处理去除抑菌作用用到一切40微生物验证专业知识讲座第40页方法验证样品前处理直接接种法薄膜过滤法冲洗量验证中和剂验证41微生物验证专业知识讲座第41页无菌检验验证试验：

供试品↓┌───────────────┐

直接接种法薄膜过滤法100ml/筒↓┌───────────────────────────────────┐①试验组（供试品+菌）②培养基对照组③阳性菌对照组④稀释剂对照组金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、（加菌同试验组）大肠、枯草杆菌、生孢梭菌、白色念株菌、黑曲霉↓要求T培养3~5天↓观察结果↓书写验证汇报42微生物验证专业知识讲座第42页薄膜过滤法将要求量供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最终一次冲洗液中加入小于100cfu试验菌。取出滤膜接种至对应培养基中，或将培养基加至滤筒内。取一支装有同体积培养基容器，加入等量试验菌，作为阳性对照，按要求温度培养3～5天。各试验菌同法操作。

可少许屡次：50-100ml/次；共次，充分振摇，在最终一次无抗菌活性时加阳性菌<100cfu/ml。43微生物验证专业知识讲座第43页直接接种法取符合直接接种法培养基用量要求硫乙醇酸盐流体培养基8支，分别接入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌菌悬液1ml(含菌小于100cfu)各两管；取符合直接接种法培养基用量要求改良马丁培养基4管，分别接入白色念珠菌、黑曲霉菌菌悬液1ml(含菌小于100cfu)各两管。其中1管接入要求量供试品，另1管作为阳性对照，按要求温度培养3～5天。44微生物验证专业知识讲座第44页菌落计数:同时平皿法液体培养基计数45微生物验证专业知识讲座第45页与阳性对照比较，如含供试品各容器中试验菌均生长良好，则供试品该检验量在该检验条件下无抑菌作用，可按此法进行供试品无菌检验。如含供试品任一容器中微生物生长微弱、迟缓或不生长，则供试品该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采取增加冲洗量；增加培养基用量；使用中和剂如ß-内酰胺酶、对氨基苯甲酸、聚山梨脂80等；更换滤膜品种等方法，消除供试品抑菌作用，并重新进行验证试验。验证试验可与供试品无菌检验同时进行。46微生物验证专业知识讲座第46页阳性菌株选择枯草芽孢杆菌

Bacillussubtilis[CMCC（B）63501]金黄色葡萄球菌

Staphylococcusaureus[CMCC（B）26003]生孢梭菌

Clostridiumsporogenes[CMCC（B）64941]铜绿假单胞菌

Pseudomonasaeruginosa[CMCC（B）10104]大肠埃希菌

Escherichiacoli[CMCC（B）44102]白色念珠菌

Candidaalbicans[CMCC（F）98001]黑曲霉菌

Aspergillusniger[CMCC（F）98003]菌液制备,计数普通当日使用47微生物验证专业知识讲座第47页阳性菌株选择应依据供试品特征选择对应阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌供试品，以白色念珠菌为对照菌。不然会造成误判!48微生物验证专业知识讲座第48页48小时细菌试验结果

金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌大肠埃希菌生孢梭菌冲洗量300ml/桶+酶300万单位--+-+冲洗量400ml/桶+酶300万单位+++-+冲洗量500ml/桶+酶300万单位+++++阳性对照+++++阴性对照-----72小时观察真菌结果

黑曲霉菌白色念珠菌冲洗量100ml/桶++阳性对照++阴性对照--无抑菌作用、弱抑菌作用能够从直接过滤不冲洗开始做，但一定要做！49微生物验证专业知识讲座第49页葡萄糖注射液注射用头孢地嗪注射用克林霉素磷酸酯替硝唑注射液红霉素软膏实例5个50微生物验证专业知识讲座第50页无菌检验原始统计检品编号：第页共页51微生物验证专业知识讲座第51页微生物程度检验：口服、外用控制项目

杂菌数：细菌数、霉菌和酵母菌数。

控制菌（致病菌）：大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、梭菌。制订标准：非无菌药品微生物程度标准是基于药品给药路径及对患者潜在危害而制订。52微生物验证专业知识讲座第52页不含药材原粉制剂含药材原粉制剂：丸剂含动物药制剂：外用制剂：滴眼剂普通局部用药直肠给药制剂尿道、阴道给药制剂滴鼻剂不一样制剂程度53微生物验证专业知识讲座第53页供试品制备液体供试品:10ml固体、半固体或黏稠性供试品10g,匀浆或其它适宜方法非水溶性供试品具抑菌活性供试品:①培养基稀释法②离心集菌法:500,3000rpm③薄膜过滤法④中和法;如磺胺类100ml中1~5ml1%对氨基苯甲酸54微生物验证专业知识讲座第54页供试液制备供试液从制备至加入检验用培养基，不得超出1小时。供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超出45℃55微生物验证专业知识讲座第55页采取稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品抑菌活性56微生物验证专业知识讲座第56页结果判断供试品细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种要求，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果平均值汇报菌数。供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。眼用制剂检出霉菌和酵母菌数时，须以两次复试结果均不得长菌，方可判供试品霉菌和酵母菌数符合该品种要求。

若供试品细菌数、霉菌和酵母菌数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下要求，判供试品符合要求；若其中任何一项不符合该品种要求，判供试品不符合要求。57微生物验证专业知识讲座第57页微生物程度检验法验证细菌、霉菌及酵母菌数计数方法验证

定量——回收率测定试验控制菌检验方法验证定性——能否生长、专属性试验58微生物验证专业知识讲座第58页回收率计算

试验组菌回收率=[（试验组平均菌落数–供试品组平均菌落数）/菌液组平均菌落数]×100%稀释剂对照组菌回收率=[（稀释剂对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数）]×100%在3次独立平行试验中，稀释剂对照组、试验组回收率均不低于70%，若任一次试验中回收率低于70%，应重新选择方法再验证。59微生物验证专业知识讲座第59页方法验证：控制菌控制菌：大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，沙门菌，大肠菌群，生孢梭菌计数方法：平皿法、薄膜过滤法。特殊：生孢梭菌（加菌量：10~100cfu,只要求生长，不要求回收率）60微生物验证专业知识讲座第60页版药典无菌检验法主要增修订情况61微生物验证专业知识讲座第61页增、修订包括范围

序言部分培养基部分灵敏度检验稀释液、冲洗液方法验证薄膜过滤法培养及观察结果判断表1、表2和表362微生物验证专业知识讲座第62页

序言部分1、新增要求：“预防污染办法不得影响供试品中微生物检出。”2、新增要求：“日常检验还需要对环境进行监控。”3、新增要求：“无菌检验人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。63微生物验证专业知识讲座第63页干扰物可选取中和剂或灭活方法戊二醛酚类、乙醇、吸附物醛类季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯汞类制剂双胍类化合物碘酒、洗必泰类卤化物乙二胺四乙酸（EDTA）磺胺类ß-内酰胺类抗生素亚硫酸氢纳稀释法稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐卵磷脂、聚山梨酯亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐卵磷脂聚山梨酯硫代硫酸盐镁或钙离子对氨基苯甲酸ß-内酰胺酶表1常见干扰物中和剂或灭活方法64微生物验证专业知识讲座第64页

培养基灵敏度检验部分新增加稀释后工作用菌液保留条件和保留期限：“菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保留在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保留在2℃～8℃，在验证过贮存期内使用。”