las对草千金急性毒性及超氧化物歧化酶活性的影响

las对草千金急性毒性及超氧化物歧化酶活性的影响

随着经济的发展和人们生活水平的提高，不同的洗剂在工业、农业、医药等领域得到了广泛应用，每年都产生了很大的价值。洗涤剂的重要组成成分是表面活性剂,十二烷基苯磺酸钠(LAS)是目前使用最普遍的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(LAS)随着生活污水和工业废料等大量排入自然水体,造成水生生物不能正常生长,破坏了水体环境的生态平衡。十二烷基苯磺酸钠(LAS)作为水体中的常见污染物,已被列为《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)的基本控制项目。尽管十二烷基苯磺酸钠(LAS)在水体中易生物降解,但是LAS在环境中的吸附、沉淀和生物降解等迁移行为十分复杂。已有研究表明,LAS在环境和生物体内有累积,在低浓度条件下对鱼类产生慢性毒性。河流和湖泊中的表面活性剂污染十分严重,对渔业和人们的生活健康具有潜在危害。因此研究阴离子表面活性剂(LAS)对鱼类的毒性效应十分必要。水生生物毒性试验在研究水体中化学污染物的环境效应方面有着重要作用。鱼类作为对水中发生的各种物理、化学和生物性的变化反应十分灵敏的一种水生生物,是水生生物毒性试验经常选取的受试对象之一。表面活性剂对鱼的急性毒性研究和对鱼的各项生理指标的影响不断被报道,研究结果表明表面活性剂对鱼类有较大毒性,会对鱼的生理指标产生影响因此,本研究以草金鱼为试验对象,通过急性毒性试验研究LAS对鱼类产生毒害作用的表现,找出产生不良影响的阈浓度。为进一步研究阴离子表面活性剂对草金鱼的毒性机制,本试验以SOD活性变化为评价指标,通过采用暴露实验法,研究在亚急性条件下阴离子表面活性剂对草金鱼肝脏组织中SOD活性的影响,目的是为了利用鱼体内的酶活性变化来评价阴离子表面活性剂对水生生物的毒性效应,为水环境中该类化合物污染的早期预报和防治提供参考依据。1试验材料和方法1.1放养和饲养水水质好的鱼本试验受试鱼为草金鱼,从郑州市荥阳市王村镇北黄河滩养殖场购买,平均体长为3.4cm,平均体重为1.2g。试验用的草金鱼是从养殖场运到实验室的鱼苗,首先用自来水将鱼苗驯养7天,自来水需经曝气脱氯24h才能使用。驯养水温为(15±1.0)℃(预试验与正式试验水温与驯养时相同),pH为7.0~8.0,溶解氧为9.0mg/L,驯养水水质符合鱼的生活水质要求。驯养期间需喂食和换水。喂食频率为两天一次,定时喂取,换水频率为一天一次。期间及时清理鱼屎并捞出死鱼。试验前1d和试验期间不再喂食和换水。试验所用表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠,纯度为分析纯,分子式C1.2测试方法1.2.1草咸鱼ld患者正式试验前应首先进行预备试验试验期间,每天两次定时测定试验数据,详细观察草金鱼中毒时的症状和活动情况并记录。在试验开始的24,48,72,96h分别记录试验草金鱼的死亡数(是用捞鱼的网触碰鱼,无反应即可判定为死亡),根据草金鱼的死亡率,用直线内插法求出半致死浓度。1.2.2las对sod活性的影响试验采用静水式试验,根据96h半致死浓度(LC1.2.3组织活性的测定在试验开始96h后,捞出鱼缸内活鱼杀死,迅速将鱼的肝脏组织取出,放入冰冷的生理盐水中洗净血液,再用滤纸吸干水分。准确称取组织重量,按照重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的生理盐水,剪碎组织,在研钵中充分研磨制备匀浆。以3000r/min的转速用离心机离心10min,取上清液即10%匀浆上清液测定SOD。SOD活性的测定采用SOD试剂盒及酶标仪介绍的方法。在本反应体系中,SOD以每毫克组织中SOD抑制率达50%时所对应的酶量为一个SOD活力单位(U),即U/mg组织。2结果分析2.1身体摆动情况对草金鱼的急性毒性试验表明,水中的LAS质量浓度越高,草金鱼的中毒现象越明显,死亡的速度越快数量越多。试验开始时,鱼缸内的鱼表现出不同的活动情况,一部分鱼活动迟缓,另一部分鱼易受惊吓在鱼缸内乱窜。随着中毒时间的延长,一部分鱼游动出现倾斜的情况,逐步丧失活动能力,活动进一步迟缓,即使用网去触碰也不躲避;另一部分鱼则出现发颤的情况,游动过程中身体摇动不止。高浓度区的草金鱼慢慢停止活动,直至死亡。表1记录了LAS对草金鱼急性毒性试验的致死数据和LAS对草金鱼的半致死浓度。以LAS的质量浓度为横坐标,草金鱼的死亡率为纵坐标绘制死亡百分率对试验物质浓度的曲线,该曲线为一条S形的关系曲线,从引起50%死亡率的内插浓度值得到值。由表1可知,LAS对草金鱼24h,48h,72h,96h的半致死质量浓度分别为12.2mg/L,9.8mg/L,8.8mg/L,8.6mg/L,LAS对鱼表现出较强的毒性。表面活性剂是一种可溶特殊的脂类化合物。其分子结构一端为亲水基团,一端为疏水基团,因此具有亲水性和亲脂性。程吕柏2.2las对草咸鱼体内sod酶活性的影响由表2可知,肝脏组织中SOD酶活性在LAS质量浓度为3.6mg/L时影响显著。LAS质量浓度低于3.6mg/L时,肝脏组织中SOD酶活性高于空白组的SOD酶活性。LAS质量浓度高于3.6mg/L时,肝脏组织中的SOD酶活性迅速降低且低于空白组的SOD酶活性。雷鸣LAS质量浓度低于3.6mg/L时,由试验组和空白组的酶活力值对比结果可知,LAS肝脏中SOD酶活性得到提高。这是因为十二烷基苯磺酸钠(LAS)对草金鱼的细胞造成伤害,产生高于正常值的超氧自由基,为了维持细胞的正常生理功能SOD酶提高活性以清除多余的超氧自由基。但是SOD酶消除能力是有限的,且其正常发挥功能必须满足酶蛋白结构不被破坏。LAS质量高于3.6mg/L时,草金鱼肝脏中产生的超氧自由基过多,超出了SOD酶的消除能力,同时酶蛋白结构被破坏,SOD酶功能受损,SOD