食品中微生物的检验-食品微生物检验基本程序（食品微生物控制技术课件）

接种定义、接种工具及接种方法《食品微生物检验技术》目录Contents接种定义1接种工具2接种方法334

在无菌条件下，利用相应的接种工具将微生物纯种或含菌材料（如食品、水、土壤、空气等）移接到已灭菌且适合其生长繁殖的培养基中的过程。1、接种定义34

接种工具是微生物培养接种所用到的工具。常用的接种工具有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、涂布棒等。2、接种工具123456781-接种针；2-接种环；3-接种钩；4,5-涂布棒；6-接种圈；7-接种铲；8-解剖刀34

接种针的构造包括手柄、接种杆、螺牙和针头部分。各部分设计和用材由于生产厂家不同而不同。有金属接种环（钢，铂金或者镍铬合金）和一次性的塑料接种环（塑料制成的）。2、接种工具（1）接种针、接种环、接种钩结构和材质a34

镍铬合金制成的金属针能经受火焰反复灼烧、冷却迅速，应用比较广泛。并且质地软硬适中，可根据实际需要折成针状、环状和钩状。2、接种工具（1）接种针、接种环、接种钩镍铬合金接种针特点b34接种细菌和酵母菌用接种环和接种针，镍铬丝直径以0.5mm为适当，环的内径约2mm，环面应平整。接种某些不易和培养基分离的放线菌和真菌，有时用接种钩或接种铲，其丝的直径要求粗一些，约1mm。2、接种工具（1）接种针、接种环、接种钩适用范围c34

用涂布法在琼脂平板上分离单个菌落时需用涂布棒。根据材质可分为一次性涂布棒、玻璃涂布棒和不锈钢涂布棒；根据形状又分为T型涂布棒、L型涂布棒和三角形涂棒。2、接种工具（2）涂布棒34移液管根据不同的接种量有不同的规格，主要用于液体接种。移液枪是移液器的一种，常用于实验室少量或微量液体的移取，规格不同，不同规格的移液枪配套使用不同大小的枪头。2、接种工具（3）移液管和移液枪01020304划线接种浇混接种三点接种涂布接种3、接种方法由于接种目的、接种要求、培养基种类及接种的微生物等的不同，接种方法也相应有很多种。34

将微生物的纯种或含菌材料用接种环或接种针挑取，然后在固体培养基表面画直线或曲线，达到接种的作用。斜面接种和平板划线接种就常用此法。（1）划线接种3、接种方法34

把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落。除三点外，也有一点或多点进行接种的。研究霉菌形态时常用此法。（2）三点接种（点植法）3、接种方法

将待接的微生物纯种或含菌材料先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，倒置于合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。（3）浇混接种（倾注法）3、接种方法34

先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物菌落。（4）涂布接种3、接种方法34用接种针蘸取少量待接菌种，垂直刺入固体或半固体培养基的底部，再按原路抽出接种针的方法。有水平穿刺和垂直穿刺两种。常用于保藏厌氧菌种或微生物的动力观察。（5）穿刺接种3、接种方法abc从固体培养基上将菌体洗下，倒入液体培养基中；从液体培养基中将培养菌体用移液管移接至另一液体培养基内；3、接种方法（6）液体接种制片原理及常用方法《食品微生物检验技术》目录Contents制片原理1制片常用方法234

微生物个体很小，要观察微生物的形态、大小必须把微生物制成标本片，然后才能在显微镜下观察，把微生物放到载玻片上制成微生物标本片的技术称为制片技术。1、制片原理水浸片法插片法透明薄膜培养法涂片法压片法载片培养法悬滴法2、制片常用方法将少量待观察微生物直接涂布在载玻片上制成微生物标本片的方法称为涂片法。在干燥固定过程中，细胞常会因受热发生变形、收缩的情况，只能观察到微生物近似的形态和大小。2、制片常用方法（1）涂片法操作简单，容易掌握，适用于单细胞微生物、霉菌、放线菌孢子等的结构和形态观察。a操作时在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，用灭菌的接种环在固体培养物表面取少量菌体，放在载玻片的蒸馏水中，与水混合涂成直径约1cm的均匀薄层。如果待观察的微生物培养在液体培养基中，只需将一滴适当稀释的菌悬液直接加在载玻片中央即可，干燥固定后镜检。2、制片常用方法（1）涂片法34

又称压滴法，是将欲观察微生物置于载玻片上的水滴或染色液中，然后盖上盖玻片而制成微生物标本片的一种制片方法。水浸片法操作简单，适用于单细胞微生物、霉菌、放线菌孢子等的结构和形态观察，可以观察到细胞真实形态。（2）水浸片法

2、制片常用方法

也称压印法、印片法，是将待观察微生物压印在载玻片或盖玻片而制成微生物标本片的方法。可用于放线菌和霉菌的菌丝及其孢子形状、排列方式数目等观察。优点是能够清楚的观察到孢子的生长情况，缺点是不易观察到气生菌丝、繁殖菌丝和基内菌丝等的完整生长情况。2、制片常用方法（3）压片法操作时用接种铲挖取斜面或平皿培养物，将盖玻片盖在有菌苔的培养基小块上，轻压几下使部分菌丝体压印在盖玻片上，固定印痕，然后进行染色观察。2、制片常用方法（3）压片法34

插片法是将盖玻片斜插入培养基（角度45°，深度为培养基的一半），将菌种接种到盖玻片与培养基交界处，培养后将长有菌体的盖玻片置于显微镜下直接染色后观察的制片技术。主要用于霉菌或放线菌的菌落或菌丝形态观察，可观察到菌丝的自然着生状态。

2、制片常用方法（4）插片法34

载片培养法是将要观察的微生物直接放在载玻片上进行培养而制成微生物标本片的技术。载片培养法主要用于观察霉菌、放线菌不同生长时期的菌体各部分形态，也可用于假丝酵母的培养观察。（5）载片培养法

2、制片常用方法34

用无菌操作将营养琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌或放线菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。（5）载片培养法

2、制片常用方法34

透明薄膜培养法是将待观察微生物培养在透明薄膜上，然后将透明薄膜连同微生物一起转移到载玻片上而制得微生物标本片的一种制片技术。该法常用于观察霉菌和放线菌，观察效果好，可观察到各个时期完整的、自然状态下的菌体各部分。（6）透明薄膜培养法

2、制片常用方法34

将玻璃纸贴在平板固体培养基上，然后接种待观察微生物，待微生物生长后，将长菌的玻璃纸剪取小片，贴在载玻片上，