淄博市300份市售水产品中弧菌的污染调查

淄博市300份市售水产品中弧菌的污染调查

嗜水动物是引起食源性疾病的主要病原体之一。它广泛分布于海洋、淡水或水生生物中。通常，盐浓度较大的水域或水生动物的表面和肠道检测率较高。主要致病性弧菌以霍乱弧菌、副溶血性弧菌、河弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌最为常见1材料和方法1.1样品采集市售水产品采购自农贸市场、集贸市场、批发市场、超市。种类包括淡水鱼产品、海水鱼产品、甲壳类水产品、双壳贝类、螺。1.2细菌鉴定试剂3%氯化钠碱性蛋白胨水(北京陆桥技术股份有限公司)、碱性蛋白胨水(北京陆桥技术股份有限公司)、TCBS琼脂(北京陆桥技术股份有限公司)、科玛嘉弧菌显色培养基(科玛嘉)、3%氯化钠三糖铁琼脂(北京陆桥技术股份有限公司)、mCPC琼脂(北京陆桥技术股份有限公司)、CC琼脂(北京陆桥技术股份有限公司)、4号琼脂(北京陆桥技术股份有限公司)、3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂(北京陆桥技术股份有限公司)、API20E细菌鉴定试剂条(法国梅里埃)、VITEK2革兰阴性菌鉴定卡(法国梅里埃)、副溶血性弧菌诊断血清(日本生科研)、霍乱弧菌诊断血清(宁波天润)、副溶血性弧菌三重核酸荧光PCR法检测试剂盒(深圳生科原)、霍乱弧菌ctxAB核酸荧光PCR法检测试剂盒(深圳生科原)、VITEK2生化鉴定仪(法国梅里埃)、荧光定量PCR仪(ABI7500)。1.3检测方法1.3.1分离和鉴定副溶血性弧菌参照GB4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》1.3.2血液清学副溶血性弧菌参照GB4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》1.3.3中毒基因检测1.3.3.副溶血性弧菌采用三重实时荧光PCR法,在一个PCR反应体系中同时检测副溶血性弧菌tlh、tdh、trh基因。结果判定以样本检测Ct值≤36为阳性、Ct值≥39或无Ct值为阴性、Ct值在36～39范围则需对样本进行重复检测。检验结果解释详见表1。1.3.3.ct值的检测采用实时荧光PCR法,定性检测ctxAB基因。结果判定以样本检测Ct值≤34.5为阳性、Ct值≥37.5或无Ct值为阴性、Ct值在34.5～37.5范围则需对样本进行重复检测。检验结果解释见表2。1.4统计分析采用Excel对调查数据进行录入和汇总;采用SPSS19.0软件进行统计描述,采用χ2结果2.1螺类的总检出率此次检测共计300份水产品,有93份样品检出致病性弧菌,总检出率为31.00%,其中螺类的总检出率最高(61.90%,13/21)。海水产品的总检出率高于淡水产品(分别为33.72%和27.34%),差异无统计学意义(χ2.2溶藻弧菌、霍乱弧菌5类水产品中,副溶血性弧菌的检出率最高,占全部阳性菌株的72.38%(76/105),其次为溶藻弧菌(15.24%,16/105)和霍乱弧菌(11.43%,12/105)。检出的副溶血性弧菌中,海水产品的检出率高于淡水产品(分别为26.74%和23.44%),差异无统计学意义(χ2.3血清学分类2.3.1抗溶性弧菌的血清学检出的76株副溶血性弧菌共鉴定出15种血清型,型别比较分散,以O2∶K-为主(21.05%),结果见表5。2.3.2霍永弧菌的血清学对检出的12株霍乱弧菌进行了O1群和O139群血清分型鉴定,结果均为非O1/O139型霍乱弧菌。2.4中毒基因的传输2.4.1三氟菌tlh、tdh、trh毒力基因的传输经三重实时荧光PCR检测,检出的76株副溶血性弧菌全部携带tlh基因,只有2株携带tdh基因,携带情况与检测情况见表6。2.4.2霍乱弧菌ctxag毒力基因的运输经实时荧光PCR检测,检出的12株霍乱弧菌均未携带ctxAB基因。3市售水产品致病性弧菌污染原因分析本次检测的300份样品中,致病性弧菌的总体检出率为31.00%(93/300),其中有2份样品同时检出3种致病性弧菌,占全部阳性样品的2.15%(2/93);有8份样品同时检出2种致病性弧菌,占全部阳性样品的8.60%(8/93)。淡水鱼类的总体检出率低于海水鱼类,二者之间差异有统计学意义,提示海水鱼类携带致病性弧菌而导致食源性疾病的风险仍然不容小视。螺类的检出率最高(61.90%),而且该产品检出的副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌的检出率均比其他水产品高,这可能与螺类的生长习性有关。螺类生活区域很广,温度要求不严格,非常适合在水族箱或者水缸中养殖,可以与海水类或者淡水类产品混养,这就增加了销售环节中该类产品的交叉污染概率。本次监测还发现,副溶血性弧菌的检出率最高,不仅海水产品中检出率高(26.74%),在淡水产品中也有较高的检出率(23.44%),二者差异无统计学意义。这可能与在销售环节中,海水产品与淡水产品混卖,产品之间堆放紧密杂乱,造成交叉污染有关。海水鱼类检出率明显高于淡水鱼类,二者存在统计学差异,这也符合副溶血性弧菌的嗜盐特性。虽然副溶血性弧菌是嗜盐菌,在沿海地区多有检出和导致食源性疾病的报道,但随着经济的发展和产品快速流通,嗜盐菌已逐步向内陆地区蔓延,成为导致内陆地区食品安全风险的重要因素之一大多数副溶血性弧菌感染的暴发都是由其不同血清型的菌株引起的,而引起大流行的优势血清型为O3∶K6无论是从临床分离的副溶血性弧菌还是环境分离的菌株都含有tlh基因,而tdh具有肠毒素活性、细胞毒性和心脏毒性,被公认为是副溶血性弧菌的主要毒力因子,神奈川现象主要是由tdh导致霍乱弧菌最主要的毒力基因是霍乱毒素基因(ctxAB基因),它主要存在于ctxΦ噬菌体基因组中。在外界因素的影响下,例如丝裂霉素C、阳光、紫外线等,霍乱弧菌可以通过ctxΦ噬菌体的转移,由无毒株转变为有毒株综合以上分析,我