双黄连口服液中有效成份含量测定技术

双黄连口服液中有效成份含量测定技术目的利用HPLC法对双黄连口服液中黄苓苷的含量进行科学测定。方法其固定相主要是在结合实际的基础上对十八烷基键合硅胶进行选择。其中流动相为甲醇：水：冰乙酸（60：50：1）。结果黄苓苷所呈现的线性良好，但是为范围在25〜220瞄范围内，注意其平均回收率需要控制在100.59%。结论该种方法不仅可实现对杂质的有效分离，对该制剂中黄苓苷的含量测定工作的顺利开展有积极意义。标签：高效液相色谱法；黄苓苷；双黄连口服液金银花、黄苓和连翘是双黄连口服液处方的主要成分，辛凉解表、清热解毒是双黄连口服液的主要功效，在缓解外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛症状方面也起着相当重要的作用。中国要药典针对双黄连口服液中黄苓苷含量测定工作所使用的质量指标为HPLC法。通过实验发现黄苓苷峰与杂质峰之间呈现出无法分离的状态。效果好，快速准确，重现性好是改变流动相比例的明显优势，因此我我们说将其用于制剂质量控制工作过程中至关重要。一、 仪器与试药1.SSIW型液相泵是在实际实验过程中所使用的主要仪器，该仪器由美国生产，M525紫外检测器，Anastar色谱工作站也是同一公司所提供的试验仪器。电子天平也是试验过程中不可缺少的工具之一，其型号为赛多利斯BP-211D。中国药品生物制品检定所，批号200512的黄苓苷是本次试验的对照品。双黄连口服液主要由哈高科白天鹅药业集团有限公司、江苏吴中实业股份有限公司苏州长征制药厂以及中国黑龙江完达山制药提供，批号分别为05117-1.050114以及050301。甲醇（色谱纯）、冰乙酸（AR）以及重蒸水也是在试验过程中所必须使用的材料，在实际准备过程中必须对其质量进行严格检验。KromasilC18tt（5^m，250mmx4.6mm）是药典流动相样品的HPLC色谱条件色谱柱，甲醇：水：冰乙醇（60：50：1）作为流动相存在于上述试验中，注意其温度最高不可超过40°C，检测波长也需要借助必要的措施与手段控制在274nm。二、 试验方法和结果在实际称取黄苓苷对照品的过程中我们需要将其控制在20.60mg，这也是对照品液的制备工作顺利开展的基础与前提，注意必须保障其精密性，其放置的量瓶为200ml。在添加甲醇的过程中必须充分结合实际，为在真正意义上促使其溶解必须放置在水浴中进行振摇。然后放置在室温下进行稀释，直到刻度为止，最后要摇晃至均匀。标准曲线精密吸取上述对照品溶液0.25ml,0.50ml,0.75ml,1.00ml,1.25ml,1.50ml,1.75ml,2.00ml,置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。进样20^1,记录色谱图。以峰面积为纵坐标，进样量（ 曜）为横坐标绘制回归方程：Y=6535.7X+9508（r=0.9995）,结果黄苓苷在25〜220瞄范围内呈良好的线性关系。改进流动相后对照品的HPLC色谱图精密度试验分别精密进对照品溶液20^1，重复进样6次，按上述色谱条件记录峰面积，结果RSD%=0.89%。样品分离度按样品测定法制备供试液进样20^1，记录色谱图（图3）,结果峰与相邻杂质峰分离完全，分离度＞2.5o重现性试验取同一批样品（05117-1），按样品测定法制备供试液，在上述色谱条件下进行5次平行测定，结果RSD=1.56%，表明本法测定的重现性好。稳定性试验取批号05117-1的供试品溶液，分别在制备后0,2,4,8,12h测定，结果黄苓苷的峰面积RSD=1.82%，表明溶液基本稳定。阴性干扰实验取阴性对照样品（按《中国药典》2000版一部缺黄苓苷制剂），精密进阴性对照品溶液20^1,按上述色谱条件记录色谱图。结果黄苓苷对照品相应无干扰峰出现，说明处方中其他成分对测定结果无干扰。改进流动相后阴性对照的HPLC色谱图。回收率试验采用加样回收法。精密量取已知含量的样品1ml，置50ml量瓶中，分别精密加入浓度为10.30mg/ml；黄苓苷对照品溶液1ml，2ml,3ml，加50%甲醇稀群至刻度。进样20^1，测定峰面积，计算回收率。加样回收率试验结果。样品测定精密量取各样品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20min，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用45呻液膜过滤，滤液即为供试品溶液，在上述色谱条件下，进样20^1，记录峰面积，计算黄苓苷含量。改进流动相后样品的HPLC色谱，双黄连口服液含量测定结果。三、讨论本法测定双黄连口服液的黄苓苷的含量，操作简单易行，以甲醇：水：冰乙酸（60：50：1）为流动相，样品中黄苓苷与杂质峰完全分离，出峰时间短，峰形稳定，进样量在20〜220瞄范围内呈良好线性，回收率高且稳定，可以选定上述色谱条件的流动相，作为该制剂黄苓苷的含量测定。1.样品的制备用50%甲醇溶解样品后，分别观察了不同频率超声波处理后绿原酸、连翘苷、黄苓苷和汉黄苓素溶出率的差别，结果显示不同频率超声处理未能增加4种指标成分的溶出率，从节省时间和能源角度出发，本实验采用50%甲醇溶解样品后直接检测分析。分析波长的选择通过对绿原酸、连翘苷、黄苓苷和汉黄苓素四种标准品在190〜800nm紫外可见光谱扫描，结果表明绿原酸在326nm有较强吸收，连翘苷在226nm有较强吸收，黄苓苷和汉黄苓素在278nm波长处有较强吸收，由于连翘苷和汉黄苓素在样品中含量较低，而绿原酸和黄苓苷在样品中含量较高，为了兼顾4种成分的同时测定，增加方法的灵敏度和准确度，并减少干扰，本实验采用波长转换点检测方法，分别选择4种成分的各自最大吸收波长作为测定波长。流动相的选择双黄连制剂为中药复方，成分组成较复杂，而且绿原酸、连翘苷、黄苓苷、汉黄苓素4个指标成分极性差别较大，曾采用等度洗脱，绿原酸与邻近组分不能有效分离，连翘苷和黄苓苷也未能完全分离开来，且连翘苷和黄苓苷分离效果甲醇系统明显优于乙腊系统，但乙腊系统中4个指标成分峰型对称，优于甲醇系统。因此，本文最终采用梯度洗脱的方法，在0〜8min乙腊的比例为12%，使绿原酸和邻近组分达到基线分离，8〜20min乙腊的比例保持不变，通过增加甲醇浓度来提高洗脱和分离效果，使连翘苷和黄苓苷基线分离，20〜27min提高乙腊的浓度，使汉黄苓素达到基线分离。实验结果表明双黄连口服液中4种标志成份峰分离度良好，峰形对称，与相邻峰达到基线分离，并且方法学考察也达到分析要求，