实验四、Vc的含量测定(草酸)课件

实验五、维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚法)实验五、维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚法)1一、实验目的1、学习维生素C2，6-二氯酚靛酚定量测定法的原理和方法。2、进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。3、了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。

一、实验目的1、学习维生素C2，6-二氯酚靛酚定量测定法的2二、原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbicacid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。

二、原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，3抗坏血酸分子中存在烯醇式结构——C=C——

OHOH

因而具有很强的还原性，氧化失去两个氢原子而转变成脱氢抗坏血酸。维生素C的结构抗坏血酸分子中存在烯醇式结构维生素C的结构4实验四、Vc的含量测定(草酸)课件52，6—二氯酚靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na)染料2，6—二氯酚靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na)染料具有氧化性，可氧化抗坏血酸而其本身被还原为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。在酸性环境中氧化型2，6-二氯酚靛酚呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。

2，6—二氯酚靛酚钠盐（C12H6O2NCl2Na)染料6用2，6—二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗血酸尚未完全被氧化时，滴下的2，6-二氯酚靛酚立即被还原为无色，当抗坏血酸全被氧化时，则滴下的2，6-二氯酚靛酚溶液呈红色。所以在滴定过程中当溶液从无色转变为微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定的终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸（维生素C）的含量。用2，6—二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶7三、器材1、研钵2、移液管3、容量瓶4、锥形瓶5、微量滴定管（5ml）6、漏斗7、纱布8、滤纸9、分析天平三、器材1、研钵8附微量滴定管使用：附微量滴定管使用：9座式微量滴定管夹式微量滴定管座式微量滴定管夹式微量滴定管10微量滴定管的操作

1、检查：用蒸馏水检查滴定管的活塞是否漏水，活塞转动是否灵活。2、装滴定剂：摇匀试剂溶液，用试剂润洗滴定管2-3次，约装10-15ml左右。3、排气泡：调节起始刻度（最好在整mL的刻度处，或调零，并记录初始刻度数。4、滴定：勿顶活塞，防漏液，轻轻转动活塞，滴定时边用手腕轻轻摇动锥形瓶，近终点时要“半滴”操作——冲洗。微量滴定管的操作

1、检查：用蒸馏水检查滴定管的活塞是否漏水11V1读数偏小V2正确读数V3读数偏大V1读数偏小125、观察颜色的变化和读数。注意滴定管要垂直，视线与刻度平行，保留小数点后三位。6、滴定完毕，清洗干净，凉干后在活塞处放一小纸片存放。5、观察颜色的变化和读数。注意滴定管要垂直，视线与刻度平行，13四、试剂和材料1、苹果、Vc注射液

2、1％、2％草酸溶液3、2，6-二氯酚靛酚溶液100ml/组称取0.21g碳酸氢钠，0.26g2,6-二氯酚靛酚，溶于250ml蒸馏水中，稀释到1000ml.过滤，装入棕色瓶内，置冰箱内备用，保存不超过3天。每次临用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。已配好全班公用。四、试剂和材料1、苹果、Vc注射液144、标准抗坏血酸溶液准确称取纯抗坏血酸结晶100mg溶于1％草酸溶液定容到100ml。装入棕色瓶中贮存冰箱内。（已配好，全班公用）4、标准抗坏血酸溶液15五、操作五、操作161、维生素C提取液制备

待测样品1：水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取20g，加入20ml2％草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，反复抽提2-3次，（纱布可用少量2％草酸洗几次）合并滤液，定容至50ml（滤液混浊可离心）备用。1、维生素C提取液制备172、标定准确量取1ml标准抗坏血酸溶液加入9ml1％草酸溶液于100ml锥形瓶。然后用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微红色持续15秒不退色为终点。计算2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每ml2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数来表示。（取10ml1％草酸液做空白对照，按以上方法滴定）2、标定183、滴定量取10ml样品1提取液于锥形瓶中。用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微弱的玫瑰色，持续5秒钟不退色为终点，记录所用2，6-二氯酚靛酚的ml数。注意整个滴定过程不要超过2分钟。另取10ml1％草酸做空白对照滴定。样品及空白同时各做二份。3、滴定19注意事项(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。(2)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。注意事项(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫20(3)本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。(4)干扰滴定因素有：

色素：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，。

还原剂：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。(5)提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。(3)本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进21实验四、Vc的含量测定(草酸)课件22实验四、Vc的含量测定(草酸)课件23实验四、Vc的含量测定(草酸)课件24六、结果计算（VA-VB）*S维生素Cmg数/100g样品=——————*100

VA为滴定样品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的mL数VB为滴定空白对照所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的mL数S为1mL染料能氧化抗坏血酸mg数W为待测样品的重量。