(SOP-QC-007-01)-Bradford法检测蛋白质含量标准操作规程

标准操作规程StandardOperationProcedure吉林大学研发中心Bradford法测蛋白质含量标准操作规程编号SOP-QC-007-01Bradford法检测蛋白质含量1.试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。2.器皿与耗品：所有玻璃器皿为清洁级，37度烤干。tube、tip：—次性使用，容量瓶，96孔酶标板，3.仪器设备：酶标仪：旋涡混匀器。4.溶液的配置：G250储存液：95%无水乙醇：100ml88%磷酸：200ml考马斯量兰G250：350mg室温下可长期保存，稳定。G250工作液：双蒸水：425ml95%无水乙醇：15ml88%磷酸：30mlG250储存液：30ml可根据体积相应缩小比例配制，用1号滤纸过滤并保存于室温棕色瓶中，可使用数周。6.3牛血清白蛋白标准品BSA（实验室购买）.配制标准品标准程序：将牛血清白蛋白配制成lmg/m1,取牛血清白蛋白lOOmg，先用超纯水溶解，待其溶解后定容到一个洁净的100ml容量瓶中，300ul分装，保存于-20度，使用时，将其稀释至200ug/ml,配制标准品备用。标准品的鉴定用原有的标准品做标准曲线，随机取三支本分装品为样品，测定样品蛋白含量，得X土SD（其中X单位为ug/ml）与RSD,当X值为98-102，且RSD值小于等于2%者，认为该标准品的标示浓度为200ug/ml。l标准操作规程StandardOperationProcedure吉林大学研发中心Bradford法测蛋白质含量标准操作规程编号SOP-QC-007-015.程序：5.1.样品的处理一次检测过程包括标准不能超过20个样品。若是原液或成品,每个样品需做2个或3个稀释度：V厂V原（dT）其中V水为需要加入纯化水的体积，V原为稀释前样品的体积，d为稀释度水原待测样品如为冻干品，则根据标示量稀释至lmg/m1,再稀释10倍；待测样品如为未知浓度的样品，可以根据bradford标准品颜色目测后稀释样品。待测样品均需溶解后先离心，再进行稀释和检测操作。稀释后的样品需做同样的三个反应体系。标准曲线的制备（见9.5工作标准品的配制）管号123456配制工作标准品浓度（ug/ml）20016012080400200ug/m1标准品加入量（ul）20016012080400ddH2O加入量（ul）040801201602005.3.测定步骤（操作温度不能高于室温，每2个加样时间间隔均匀，为15秒）步骤内容标记管号123456N工作标准品浓度（ug/ml）20016012080400一加入工作标准品10ul加入稀释后样品（ul）10ul一加入G250工作液125ul混匀，室温静置2-3分钟5.4.使用酶标板测OD值每管样品（包括标准品）取lOul加在酶标板上，然后没孔加入125U1G250工作液，做三复孔，使用酶标仪检测578nm比色波长（单波长），并计算得出蛋白浓度数值。酶标准操作规程StandardOperationProcedure吉林大学研发中心Bradford法测蛋白质含量标准操作规程编号SOP-QC-007-01标仪的使用及设置参见《酶标仪使用标准操作规程》剩余样品处理若为发酵样品或蛋白样品，稀释后的样品应保存于4°冰箱一天反应后的样品测完后可以直接丢弃。结果计算与分析：7.1.结果判定标准标准曲线的相关系数均r值（诈0.99）；若是rV0.99的话，实验需要重新做；同一样品，同一稀释度，若是三个不同的反应体系得出结果RSDN10的话，也需要重新检测。若是样品分不同稀释度得出的结果RSDN10的话，也需要重新检测。数据的取舍标准。选择所测蛋白浓